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    逆轉錄PCR的實驗步驟

    一、實驗器具與材料:1、移液槍:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸頭:1ml、200μl、20μl3、勻漿管:5ml4、吸頭臺:放置1ml吸頭的一個,放置20μl吸頭的一個5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl6、試劑瓶:2個60ml的棕色試劑瓶(廣口,帶蓋);1個125ml的白色試劑瓶(放無水乙醇)7、量筒:50ml、250ml、500ml8、容量瓶:250ml、500ml、1000ml9、試管架:5ml、1.5ml、20μl10、鹽水瓶:250ml、500ml各2個備用,一個裝無水乙醇,另一個裝DEPC水11、鋁制飯盒:4個12、塑料小飯盒:1個13、大瓷缸:2個14、錫泊紙:一卷15、卷紙:2卷16、三角燒瓶:帶蓋,稍大二、實驗器具的處理與準備1、塑料制品:(包括槍頭、EP管、勻漿管等)先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中,將塑料制品逐個浸泡其中,其中小槍頭需要吸管打入DEPC水,過夜,然后高壓,再......閱讀全文

    原位PCR技術

    除了經典的原位雜交外。原位雜交可與其他組織化學技術相結合,或與其他分子生物學技術相結合,使其應用范圍擴大,成為更有應用價值的技術。PCR技術是根據生物體內DNA復制的特點而建立的在體外經酶促反應將特定DNA序列進行高效和快速擴增的技術,它可將單一拷貝或低拷貝的待測核酸以指數形式擴增而達到用常規方法可

    PCR技術 PCR技術的應用

    一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合

    RNA提取與RT-PCR

     1.RNA的提取  RNA的提取其實原理很簡單:通過變性劑破碎細胞或者組織,然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA,再經過沉淀,洗滌,晾干,zui后溶解。但是由于RNA酶無處不在,隨時可能將RNA降解,所以實驗中有很多地方需要注意,稍有疏忽就會前功盡棄。  1.1分離高質量RNA  成功的cDNA合成來

    RNA提取和RT-PCR

    真核生物的基因組是DNA,為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢?因為真核生物的基因含有大量的非編碼區,稱為內元(intron),真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的,這些編碼區叫做外元(exon)。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后,經過剪切和拼接,去掉這些非編碼區,才形成成熟

    提高RT-PCR的靈敏度與產物長度

    摘要RT-PCR 已經成為研究者確定感興趣的器官、組織或細胞中mRNA 轉錄本出現、結構和表達水平的基本方法。RT-PCR的基本步驟包括:首先對樣品中出現的所有mRNA 合成一個cDNA拷貝,接著擴增感興趣的基因。因為兩個步驟中使用的反應緩沖液不能兼容,所以這兩個步驟(RT 和PCR)通常分別進行。

    逆轉錄PCR兩步法(RT-PCR)試劑盒產品說明書

      逆轉錄PCR兩步法(RT-PCR)試劑盒產品說明書(中文版)   主要用途   逆轉錄PCR兩步法(RT-PCR)試劑是一種旨在通過逆轉錄酶(reverse transcriptase)的作用把RNA逆轉錄成cDNA后,采用體外擴增DNA的方法(PCR法),進行分析RNA構造的權威而經典的技

    逆轉錄PCR兩步法(RT-PCR)試劑盒使用說明

    主要用途逆轉錄PCR兩步法(RT-PCR)試劑是一種旨在通過逆轉錄酶(reverse transcriptase)的作用把RNA逆轉錄成cDNA后,采用體外擴增DNA的方法(PCR法),進行分析RNA構造的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于RNA分析、cDNA克隆

    PCR簡介及污染的處理

    PCR技術簡介  前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reacti

    PCR簡介及污染的處理 高速離心機

    何謂PCR,簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制.目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。 PCR的要素基本的PCR須具備1.要被復制的DNA模板 Template 2

    逆轉錄酶原位 PCR 實驗

    這一部分介紹了一種原位 PCR,特別是逆轉錄酶原位 PCR 的簡略方法。詳細討論了其中的每個實驗程序。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。實驗方法原理原位 PCR 儀,蓋玻片,培養箱,濕盒,RT-PCR 試劑盒,Permount實驗材料組織樣品和細胞培養物試劑、試劑盒Nuc

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    RT-PCR實驗方法大全

    RT-PCR實驗有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需測RNA濃度,逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不會出太大問題。 3. PCR,按常規。但如需擴長片段,則對前兩步要求較高,需要有完整的cDNA存在,不是單

    實驗室HIV檢測技術概述及進展

    艾滋病(AIDS)又稱獲得性免疫缺陷綜合征,是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種免疫缺陷性疾病。HIV感染的診斷是艾滋病預防控制 工作的重要組成部分,建立敏感實用的檢測方法對于監測、診斷或血液篩查,控制艾滋病的流行顯得尤為重要。以下本文就HIV的檢測技術現狀及進展做一綜述。1 

    高質量RNA的標準

    real time RT-qPCR 是檢測樣本中特定基因表達量的有效方法,包含逆轉錄步驟和定量PCR步驟。好的開始是成功的一半,獲得高質量的、能正確反應樣品中轉錄情況的RNA,對于其后的定量結果,自然是非常重要的。Mikael Kubista,教授, R&D TATAA Biocenter主

    real-time PCR 數據分析

    無論所使用的real-time PCR是何種型號,正確的數據分析對于獲得有效的實驗結果都是至關重要的。這里介紹有關real-time PCR數據分析的知識。 在討論基本分析過程之前,先介紹如何設計一個好的實驗。如果你是自己設計的引物和探針,那有助于下一步的工作。但是在有些情況下,人們使用出

    RNA提取與RT-PCR(2)

    融解RNA一般使用TE。 保存RNA應該盡量低溫。為了防止痕量RNase的污染,從富含RNase的樣品(如胰臟、肝臟)中分離到的 RNA需要貯存在甲醛中以保存高質量的RNA,對于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA,在水中貯存一個星期就基本降解了,而從大鼠脾臟中提取的 RNA,在水

    PCR技術綜述

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    逆轉錄PCR(RT-PCR)

    實驗四 逆轉錄PCR (RT-PCR )【實驗目的】1.了解用逆轉錄PCR 法獲取目的基因的原理。2.學習和掌握逆轉錄PCR 的技術和方法。【實驗原理】聚合酶鏈式反應(PCR)過程利用模板變性,引物退火和引物延伸的多個循環來擴增DNA序列。因為上一輪的擴增產物

    熒光定量PCR具體實驗步驟

    熒光定量PCR具體實驗步驟,1 樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色

    PCR儀的用途及使用方法

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    原位PCR

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    RT-PCR擴增目的基因cDNA

    實驗概要學習從細胞或組織的RNA中用逆轉錄PCR擴增目的基因的技術及操作。實驗原理普通PCR方法可以以DNA為模板擴增基因,但真核生物的基因組中通常分為可轉為mRNA的外顯子和不轉錄的成mRNA的內含子,所以從染色體DNA用PCR方法擴增出的基因是內含子和外顯子相間排列的DNA分子,不能用于基因工程

    臨床基因擴增檢驗實驗室工作規范(二)

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      全球大爆發的新型冠狀病毒肺炎或新型冠狀病毒感染疾病的診斷有多種方法,其中針對其病毒核酸的實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測是病原學診斷的金標準。PCR 方法是所有核酸(RNA、DNA)定量檢測的重要方法,對于新冠病毒等RNA核酸首先需要逆轉錄為cDNA,而后PCR方法則基本一致,下面

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    熒光PCR法檢測RNasin性能效果

    實驗目的:對RNasin性能效果進行檢測及評估。 實驗材料及設備: 模板RNA:大鼠肌肉組織RNA 引物:Rat β-acting:Forward CCCATCTATGAGGGTTACGC Reverse  TTTAATGTCACGCACGATTTC RNase:50mg/ml(si

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    BioTNT mRNA 引物篩選,引物定制或specific primers的使用說明1

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