關于qPCR（RTPCR）數據相對定量的分析方法與經驗
qPCR的數據相對定量分析其實很簡單。我做了很多的qPCR實驗，也看了很多的資料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商業化軟件使用的教程及教程里面記述的原理。我在這里跟大家分享一下自己的經驗，最常用，最普遍的相對定量方法就是2^-△△Ct法，該法最最簡單的說就是：首先將一次實驗的所有基因Ct值整理好，之后用每一組樣本自身的目的基因Ct值減去自身內參基因Ct值，得到的數就是△Ct；換成公式就是：△Ct=Ct（目的基因）-Ct（內參基因）；然后，將每一組樣本每一個目的基因的△Ct都算好，整理進Excel，用本次實驗中待研究樣本的△Ct減去對照組樣本的△Ct，并同時對所有結果取相反數（就是加一個負運算，正數就變成負數，負數就變成正數），該步運算得到的結果就是-△△Ct。最后，對-△△Ct進行2的冪運算，即2^-△△Ct就得出Fold Change。但是，我想說的是2^-△△Ct得出的是Fo......閱讀全文
關于qPCR（RT-PCR）數據相對定量的分析方法與經驗
qPCR的數據相對定量分析其實很簡單。我做了很多的qPCR實驗，也看了很多的資料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商業化軟件使用的教程及教程里面記述的原理。我在這里跟大家分享一下自己的經驗，最常用，最普遍的相對定量方法就是2^-△△Ct法，該法最最簡單
qPCR（RT-PCR）數據相對定量的分析方法與經驗
qPCR的數據相對定量分析其實很簡單。我做了很多的qPCR實驗，也看了很多的資料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商業化軟件使用的教程及教程里面記述的原理。我在這里跟大家分享一下自己的經驗，最常用，最普遍的相對定量方法就是2^-△△Ct法，該法最最簡單
qpcr中的相對定量和絕對定量的區別
熒光絕對定量中標準品：指用含有目的基因的質粒，知道質粒的分子量和濃度計算出拷貝數，然后倍比稀釋就作為絕對定量的標準品。獲取：把目的基因p出來，然后接到質粒上，轉染搖菌擴增，然后再抽質粒，酶切純化。最后把純化的目的基因做個鑒定。
相對 RT-PCR: 樣品定量實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 雙蒸水 RT-PCR 緩沖液 MMLV 逆轉錄酶 SUPERaseINRNA 酶抑制劑 Taq DNA 聚合酶
相對 RT-PCR: 樣品定量實驗
試劑、試劑盒 雙蒸水RT-PCR 緩沖液MMLV 逆轉錄酶SUPERaseINRNA 酶抑制劑 Taq DNA 聚合酶總 RNA 隨機引物dNTP 混合物 基因特異的正向引物基因特異的反向引物[a-32P]dCTP儀器、耗材 Quantu mRNA Universal 18S standards P
相對 RT-PCR: 樣品定量實驗
已知線性范圍的循環參數和 18SrRNA 引物與競爭子的比例，就可以用自己的樣品去做相對定量 RT-PCR。下面配制的 PCR 反應混合物包含 9 個反應（4 個樣品、4 個非反轉錄對照、1 個不加模板的對照）及 10% 的額外份額。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑
qPCR結果分析經驗分享
Real-time qPCR就是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系，所以成為定量的依據。由于常規的PCR的缺點，real-time qPCR由于其操作簡便，靈敏度高，重復性好等優點發展非常迅速。設在
史上最全的QPCR數據分析
用參照基因 ( 如GAPDH 或 ?-actin)能準確量化初始材料的載量,尤其當初始材料量常常受限時,進行相對基因表達分析實驗十分方便。缺點是這個方法要求得到一個或多個在所有測試樣本中恒定表達的已知參照基因，而且表達水平不受研究條件下處理方式的影響。確定這樣的參照基因十分重要，最近有報道提出在
RT-PCR經驗淺談
做RNA病毒基因的RT-PCR成敗的關鍵首先在于RNA模板的制備。本人三年前做過一個正鏈RNA病毒全基因組分段擴增，設計方案是將全基因組分成7個片段，0.6kb-3.3kb不等，分別進行RT-PCR擴增，剛開始的三個月，我們課題組三個人辛辛苦苦，什么招都想過了，結果連一個片段都沒有拿到。后來有一個周
RT-PCR經驗淺談
RT-PCR成敗的關鍵首先在于RNA模板的制備以問者的口氣應該是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做過一個正鏈RNA病毒全基因組分段擴增設計方案是將全基因組分成7個片段，0.6kb-3.3kb不等分別進行RT-PCR擴增剛開始的三個月我們課題組三個人辛辛苦苦什么招都想過了結果連一個片段都沒有拿