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實驗方法原理 以高濃度接種細胞和微珠，然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。 實驗材料 起始培養物 儀器、耗材 生長培養基 微載體 攪拌培養瓶 磁力攪拌器 實驗步驟 1. 按照所需最終培養液量的 1/3，以 2~3 g/L 混懸微珠。2. 用胰蛋白酶消化和計數細胞，以正常接種濃度的 3~5 倍將細胞接種到微珠懸液中。3. 以 10~25 rpm 將培養物攪拌 8 h。4. 加入......閱讀全文
微載體細胞培養技術是細胞培養過程中常見的一種細胞培養技術。關于微載體細胞培養技術，以動物細胞為例，具體介紹如下： 一、微載體培養技術的應用 微載體培養技術于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。
微載體細胞培養技術是細胞培養過程中常見的一種細胞培養技術。關于微載體細胞培養技術，以動物細胞為例，具體介紹如下： 一、微載體培養技術的應用微載體培養技術于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。微載體培養是目前公認的
一、微載體培養應用此技術于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。微載體培養是目前公認的最有發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，放大容易。目前微載體培養廣泛用于培養各種類型細胞，生產
B2B #5 采用第二種方式進行高倍率放大。用 3g/L 的微載體密度培養 Vero 細胞至細胞密度 3.07x106/毫升,培養體積為 3 升。用胰酶把 Vero 細胞從微載體上消化下來。取十分之一的細胞/微載體懸浮液接種到新的 1.5 升的培養體積中，微載體濃度為 6g/L。待細胞密
實驗方法原理微載體細胞培養開始于60年代末期，最早使用離子交換凝膠作為載體，輕微攪動即可懸液在培養基中，因而可增加細胞附著的面積，達到大量培養細胞的目的。后來，根據細胞附著生長的特點，對微載體進行了改良，使其帶有電荷或其它介質，更利于細胞附著和生長。這一方法亦可用于常規量的培養，也可用于大規模的培養
用于細胞培養的微載體 微載體培養（microcarrier culture）是一種用于高產量培養貼壁細胞的實用技術。CytodexTM專用于培養各類動物細胞，其培養體積可以從數毫升到6000升以上。應用Cytodex微載體技術，可以實現簡單的貼壁細胞懸浮化培養，每毫升培養液可得到數百萬細胞。微載
相比攪拌罐而言，WAVE 反應器在同一個培養袋中可以有更寬的培養范圍（10-100%工作體積），對于種子擴增和細胞消化的不同反應體積，都可以提供均勻有效的混合，從而實現微載體的原位消化，而無需特定的消化反應器。避免了消化前后微載體的轉移，操作簡單，均勻有效的混合有利于精密控制消化反應的條件，最大
圖 3 和圖 4 顯示的是球轉球前后 Vero 細胞在微載體上的生長情況，分別有接種前第一、第三和第五天細胞的形態。圖 4 的上面三張小圖顯示了球轉球實驗 B2B #3 之前來自細胞工廠種子培養的細胞生長形態。這是典型的 Vero 細胞種子培養的生長情況。通常 90%以上的 Vero細胞會在
一、前言動物細胞培養開始于本世紀初1962年，動物細胞培養規模開始擴大，發展至今已成為生物、醫學研究和應用中廣泛采用的技術方法，利用動物細胞培養生產具有重要醫用價值的酶、生長因子、疫苗和單抗等，動物細胞培養已成為醫藥生物高技術產業的重要部分。利用動物細胞培養技術生產的生物制品已占世界生物高技術產品市
細胞培養容器 有關培養容器的詳細內容，請參閱《微載體細胞培養：原理與方法》手冊。 簡而言之，微載體培養液可置于各類細胞培養容器中。但是，應用一些在輕微攪動即可使微載體均勻懸浮的容器所獲得的效果最佳，如WAVE生物反應器。那些在應用了能有效的混合懸液但不產生高剪切力的裝置能夠形成一個均勻的培養環境
Vero 細胞在 WAVE 反應器中的微載體球轉球放大 陸麗芳，Christain Kaisermayer, 姚鈺舜，隋禮麗通用電氣醫療集團生命科學部，Fast Trak研發中心，上海 概要 Vero 細胞能被廣泛應用于疫苗的生
特殊培養法1）二倍體細胞培養法二倍體細胞培養法與一般培養相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：1. 吸除舊培養液注入另瓶中。2. 用溫BSS沖洗1次。3.
（1）微載體選擇：先用利用三種小量微載體做培養實驗，觀察細胞在一定時間內細胞的吸著率和計算細胞數，以得到最大量細胞為佳。（2）水化：稱一定量的微載體放入容器中，按每克微載體加50～100ml的比例，加入無Ca2＋和Mg2＋的磷酸緩沖液（PBS），室溫下放置應不少于3小時，并不時輕微攪動，然后再用新鮮
5. 微載體培養操作要點 ●培養初期：保證培養基與微球體處于穩定的PH與溫度水平，接種細胞（對數生長期，而非穩定期）至終體積1/3的培養液中，以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量，更高的微載體濃度需要控制環境或經常換液。 ●
5.微載體培養操作要點? 培養初期：保證培養基與微球體處于穩定的PH與溫度水平，接種細胞（對數生長期，而非穩定期）至終體積1/3的培養液中，以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量，更高的微載體濃度需要控制環境或經常換液。? 貼壁階
摘要 WAVE Bioreactor 系統多用于懸浮細胞的培養。然而，用于細胞治療和疫苗生產的多種細胞為貼壁依賴型的，需要一個可貼附的生長表面。在本研究中，Cytodex 微載體被應用在 CellbagTM 生物反應器中以擴增 Madine-
用于MDCK和 Vero細胞的生物反應器 WAVE Bioreactor 系統由一個帶有一次性塑料細胞培養袋的搖動平臺組成，配備CO2 氣體混合器 (CO2MIX20) 或WAVEPOD?控制塔用于控制pH、溫度、氧氣和混合。MDCK細胞在Cellbag-10 L和C
細胞懸浮培養是利用生物反應器大規模培養動物細胞生產生物制品的核心技術，是當前國際上生物制品生產的主流模式，其最大優勢是通過更為精確有效的工藝控制手段，在獲得最大產量的同時能穩步提高產品的質量。但該技術目前在國內尚未得到廣泛應用，生物制品生產仍主要采用病毒產率低、生產成本高、勞動強度大的轉瓶細胞培養方
微載體培養技術（micro-carrierculturetechnique）于1967年被用于動物細胞大規模培養。經過三十余年的發展，該技術日趨完善和成熟，廣泛應用于生產疫苗、基因工程產品等。 微載體是指直徑60-250μm，能適用于貼壁
在瓶子內進行球轉球實驗 在 WAVETM 反應器內細胞密度達到需要的水平時，Vero 細胞微載體培養懸浮液即被轉移到另外一個透明的瓶子中并移到生物安全柜中。后面的清洗和胰酶消化過程等均在生物安全柜內進行。在微載體沉降下來之后，去除上清。剩下的微載體被轉移到
結果和討論 微載體培養的最佳工作體積和混合速度的確定當我們使用 20%到 80%的Cellbag最大工作體積時，微載體培養可以產生均勻的微載體混合分布（圖 2）。圖 2. 微載體培養的最佳工作體積 在工作體積小于
實驗材料細胞試劑、試劑盒CB儀器、耗材微型離心機臨床臺式離心機超離心機吊桶式轉頭離心管振蕩器尼龍單絲網探頭超聲儀實驗步驟1. 準備下列儀器：微型離心機臨床臺式離心機超離心機吊桶式轉頭和合適的離心管振蕩器尼龍單絲網，孔徑約 50 μm探頭超聲儀2. 將微載體培養物轉移到 50 ml 的錐形離心管中。3
細胞和病毒生產的放大培養面臨挑戰。當需要生產量增加千倍時，細胞培養瓶對于工業規模生產是不可行的。微載體為生物反應器中貼壁細胞的生長提供了方便， 微載體充當貼壁細胞可附著的支架，允許它們增殖，而生物反應器使細胞-微載體復合體自由懸浮在培養基中。因此，貼壁細胞也可以像懸浮細胞那樣生長，從而簡化了放大培養
Vero細胞在轉瓶 （Spinner Flask)中無血清條件下的微載體培養 Vero細胞也可以在轉瓶中進行微載體培養。如圖 14 所示，在無血清條件下，WAVE 和轉瓶這兩種培養系統中可以獲得基本相同的最大細胞密度。相比 Cytodex3，Cy
微載體用量為3 g/l的 Cytodex3，接種細胞密度為0.3×106細胞/ml。培養條件為37℃，pH 7.3，5% CO2，采用光纖溶氧電極監測溶氧水平。培養基含有 2% FBS。每小時取樣并用結晶紫染色測定總細胞密度，上清中的懸浮細胞和死細胞用臺盼藍染色。MDCK細胞在接
293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為生產重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的
293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤，心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細胞 293中表達分泌性蛋白質，如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成為生產重組蛋白的一條途徑。因此完善 293
獲得穩定的雜交瘤細胞系后，即可根據需要大量生產單抗，以用于不同目的。 一、單抗的大規模制備 目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統，一是動物體內生產法，這是國內外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養法。 1、動物體內生產單抗的方法 迄今為止，通常情況下均采用動物體內
現代免疫檢測的工作原理 免疫檢測是目前醫療衛生和生物科學研究領域常用的診斷方法。免疫檢測的核心步驟為抗原-抗體間特異性的復合反應，通過復合反應產生檢測信號，實現對溶液中抗體或抗原性的定量。由于抗體分子能夠識別非常有限的分子種類，因此免疫檢
在血液凈化領域：微球可以替代腎臟用來去除血液有毒物質，治療和延長病人壽命。微球是制造人工腎的關鍵材料。 在計量領域：粒徑高度均一的微球可以作為標準顆粒用于精確測量常規尺子無法計量的納米尺寸的物質，標準顆粒作為計量工具也可用于矯正精密計量儀器。 在醫療診斷領域：功能化微球如磁性微球，多色熒光編碼微球可