WesternBlot實驗相關試劑的配制（一）
30%(w/v)丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺 29g甲叉雙丙烯酰胺 1g加去離子水，定容至 100ml 調整溶液 pH 值不超過 7.0，置棕色瓶中貯存于室溫或4℃。 10%SDS SDS 10g蒸餾水至 100ml50℃ 水浴下溶解，室溫保存。如在長期保存中出現沉淀，水浴溶化后，仍可使用。1.5mol/L Tris·HCl （pH8.8）Tris (MW121.14) 45.43g超純水 &nbs......閱讀全文
Western－Blot－實驗試劑選購指南（一）
(一)蛋白質電泳1.請參照常規電泳操作.2.分子量標準:可選擇普通分子量標準或預染的分子量標準.在選擇預染的分子量標準時,要注意其優點和缺點:優點: 在電泳過程中可監控蛋白質分離狀態; 可指示轉印中蛋白質的轉印效率.缺點: 染料影響蛋白質移動速度;分子量測定略欠精確;影響蛋白質與膜的結合力. 購
Western－Blot－實驗試劑選購指南（二）
美國Pierce公司化 學 發 光 底 物 系 列4. Western Blotting檢測試劑盒我們開發了此步免疫檢測的完整的試劑盒,即HRP標記的二抗檢測系統(含封閉液,洗液,底物,HRP/親和素-二抗),您只需準備好一抗,并選擇和一抗動物來源相應的試劑盒就可以.對于實驗來說,采用完整的試劑盒可
Western－Blot實驗相關試劑的配制（二）
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）BSA? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.1g0.15 mol/L NaCl ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1ml溶解后-20℃保存。制作蛋白標準曲線時，用0.15 mol/L NaCl進行100倍稀釋成1mg/ml，-20℃保存。
Western－Blot實驗試劑的準備工作
1. 30%儲備膠溶液： 丙烯酰胺（Acr） 29.0g 亞甲雙丙烯酰胺（Bis） 1.0g 混勻后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室溫。2. 4×分離膠緩沖液（1mol/L Tris-HCl PH 8.8） Tris 18.17g加ddH2O溶解，濃鹽酸調
Western－Blot實驗相關試劑的配制（一）
30%(w/v)丙烯酰胺溶液??丙烯酰胺 ? ? ? ? ? ? 29g甲叉雙丙烯酰胺 ? ? ? 1g加去離子水，定容至 100ml 調整溶液 pH 值不超過 7.0，置棕色瓶中貯存于室溫或4℃。?10%SDS?SDS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?10g蒸餾水至 ? ? ? ? ? ?
Western免疫印跡（Western－Blot）實驗原理和主要試劑
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。實驗原理與Southern或 Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電
Western－Blot主要試劑
主要試劑 1、 丙烯酰胺和N，N’-亞甲雙丙烯酰胺，應以溫熱(以利于溶解雙丙稀酰胺)的去離子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亞甲雙丙烯酰胺儲存液丙稀酰胺29g，N，N-亞甲叉雙丙稀酰胺1g，加H2O**100ml。)儲于棕色瓶，4℃避光保存。嚴格核實PH不得超過7.
Western－Blot詳解－主要試劑
主要試劑1、?丙烯酰胺和N，N’-亞甲雙丙烯酰胺，應以溫熱(以利于溶解雙丙稀酰胺)的去離子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亞甲雙丙烯酰胺儲存液丙稀酰胺29g，N，N-亞甲叉雙丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)儲于棕色瓶，4℃避光保存。嚴格核實PH不得超過7.0，因可以
Western－blot實驗需要準備什么試劑和耗材
1.1細胞①將細胞培養皿置于冰上，用冰冷得PBS洗滌細胞2次②吸出PBS，加入裂解液（碧云天P0013；1%TritonX-100；）a.融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據實驗需要加入適當的上述蛋白酶磷酸酶
Western－Blot實驗（一）
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western－Blot實驗（二）
小巧的體格，卻一應俱全，可以靈活控制多種應用程序，包括化學發光，熒光，DNA/蛋白膠。可以滿足對實驗室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進行近紅外激光定量熒光western 成像系統。這達到對成像最完美
Western－Blot實驗步驟
實驗步驟： 1.分別配制 5%濃縮膠和12%分離膠 12%分離膠10mL 5%積層膠6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
蛋白印跡(Western－Blot)常用試劑
蛋白印跡(Western Blot)常用試劑>>>蛋白抽提貨號品名規格價格備注WB003組織蛋白抽提試劑100ml300全蛋白抽提WB004RIPA裂解液100ml100全蛋白抽提WB005細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑100次680WB006膜蛋白和胞質蛋白抽提試劑100次680WB007改良We
Western－Blot技術實驗流程
Western Blot又稱為蛋白質印跡，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的基于抗體抗原之間特異免疫反應的一種定量或定性檢測蛋白的實驗方法。基本原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同分子量的蛋白質樣品分離，分離后的蛋白被轉移到固相支撐物（雜交膜）上，抗體特異性識別目標蛋白，通過酶促反應或者化學發光等
Western－Blot實驗關鍵
Western Blot操作步驟多，每一步的失誤都會造成全盤失敗，綜合而言，抗體仍然是決定成敗的關鍵，如果抗體不好，就是神仙也沒招。其中內參抗體很重要，因為內參抗體的選擇關系到全盤實驗的考評。Actin，Tubulin，GAPDH我們都用過，Actin，Tubulin的缺點是有時候會出現復帶，比較穩
western－blot的實驗原理
蛋白免疫印跡（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學檢測三個部分組成。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質按分子量大小在凝膠中分成帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質轉移到一種固相支持物上， 用得最多的材料是硝酸
western－blot的實驗原理
Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品(跑PAGE 膠的原理你懂吧~~~)，轉移到固相載體（硝酸纖維素膜NC膜）上
Western－Blot－Protocol實驗步驟
一、提取抗原蛋白??將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精重懸
Western－Blot技術實驗流程
Western Blot又稱為蛋白質印跡，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的基于抗體抗原之間特異免疫反應的一種定量或定性檢測蛋白的實驗方法。 基本原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同分子量的蛋白質樣品分離，分離后的蛋白被轉移到固相支撐物（雜交膜）上，抗體特異性識別目標蛋白，通過酶促反應或
westernblot實驗過程
Western，也稱Western blot、Western blotting、Western印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。可按照以下步驟操作。1.收集蛋白樣品(Protein sample preparation)使用細胞裂解液，對貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品進行裂解。然后測定每個蛋白樣品
Western－Blot的原理和所用試劑匯總
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。原理與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物
Western－Blot的原理和所用試劑匯總
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 一、原理 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blo
Western－Blot的原理和所用試劑匯總
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 一、原理 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blo
Western－Blot的原理和所用試劑匯總
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 原理 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒
western－blot實驗結果怎么分析
灰度掃描目標條帶，與內參條帶灰度值比較，進行標準化數據。根據比值繪制圖表。IP=immunoprecipitation 免疫沉淀（富集樣品或避免抗體同原材料中其他物質發生非特異反應）IB=immunoblotting 免疫印跡 （不一定是蛋白免疫印跡=Western blotting）
Western－Blot實驗操作進階技巧（一）
除非是Western blot實驗方面的高手，要不就像在我看來，Western blot發展至今好像與其1979年剛被發明出來的時候一樣一樣，同樣也是根據蛋白不同的大小（或電荷）進行電泳分離，然后轉膜，利用抗體篩選出目標蛋白。 多年來這種技術已經成為了蛋白研究方面的一種主要技術，研究人員可以利
western－blot實驗經驗總結（一）
做了很久的WB（western blot），走了很多彎路，其實發現WB想要做好并不難，總結了WB實驗中可能會遇到的問題，分析了可能的原因及對應的解決方案，希望能成為你實驗成功的基石。?問題1：轉膜不充分(1)膜沒有完全均勻濕透使用100% methanol浸透膜。(2)靶蛋白分子量小于10 000選
western－blot實驗經驗總結（二）
問題4：有陽性條帶，但條帶比較弱（1）抗體染色不充分增加抗體濃度，延長孵育時間。（2）酶活性降低直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物。（3）標本中靶蛋白含量太低增加標本上樣量。（4）洗膜過度縮短洗滌時間。（5）HRP抑制劑所用溶液和容器中避免含有疊氮化鈉。
Western－blot如何進行實驗質控
WB實驗總做不好，那么如何進行WB實驗質控呢？ 做過WB實驗的小伙伴都經歷過成像時忐忑不安，出來結果時的彷徨無措，為什么條帶沒有出啦，為什么背景這么高，為什么受傷的總是我，看著旁邊小伙伴漂亮的結果圖，心生羨慕嫉妒，那么小編給大家整理總結了如何進行WB的質控和注意哪些檢查點。 蛋白樣品