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一、實驗目的學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。二、實驗原理上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響；所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法。利用脂質體轉染法最重要的就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗......閱讀全文
RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑（RFect原代細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑） &nb
原代細胞相對普通傳代細胞要難轉染，但用對了試劑一樣可以擁有很高的轉染效率和實驗結果，下面以RFect為例，簡單介紹下原代細胞轉染的操作步驟和注意事項。原代細胞轉染操作步驟（以24孔培養板為例）：A. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔500 μl培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50
本文以RFect Plasmid DNA Transfection Reagent（RFect質粒DNA轉染試劑盒），作為攜帶質粒穿膜的載體物質，具體介紹DNA轉染方法。圖. 用本產品4ul轉染1ug pEGFP-C2質粒到293T細胞后，綠色熒光蛋白的表達情況。貼壁/懸浮細胞瞬時轉染-RFect質
實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法，包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法，及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀 將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉
下面的方案分成 3 個階段：用 pTet-tTAk 穩定轉染成纖維細胞，穩定轉染可誘導表達 tTA 的 NIH-3T3 細胞，分析轉染細胞中的蛋白表達。穩定轉染細胞系表達反式激活因子和靶基因分為兩個階段。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗
磷酸鈣-DNA共沉淀法核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現時，可使DNA附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內，進入細胞的DNA僅有1%～5%可以進入細胞核中，其中僅有不到1%的DNA可以與細胞DNA整合，在細胞中進行穩定表達，基因轉導的頻率大約為10-4，這項
實驗材料 pSV2-His 帶有靶基因開放閱讀框的 pTet-Splice 帶有報道基因的 pTet-Spliqe N
本方法中介紹的磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染貼壁細胞是對 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改進。Jordan 等大大優化了磷酸鈣介導的中國倉鼠卵巢細胞與人胚腎 293 細胞的轉染方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數
RFectMN單核細胞小核酸轉染試劑
IS PCR的技術特點 （1）既具有PCR的特異性與高靈敏性，又具有原位雜交的定位準確性；（2）測到低于2個拷貝量的細胞內特定DNA序列，甚至可檢測出單一細胞中的僅含一個拷貝的原病毒DNA；（3）有助于細胞內特定核酸序列定位與其形態學變化的結合分析；（4）可用于正常或惡性細胞，感染或非感染細胞的鑒定
在此介紹經典 DEAE-葡聚糖轉染方法的兩種形式。第一種（主要方案）細胞短時間接觸髙濃度 DEAE-葡聚糖，轉染效率較髙，但對細胞的毒性較大。第二種 (備選方案：DEAE-葡聚糖介導的轉染：增強細胞存活力）細胞長時間接觸較低濃度的 DEAE-葡聚糖，轉染效率較低，但細胞存活率較高。本實驗來源于分子克
在此介紹經典 DEAE-葡聚糖轉染方法的兩種形式。第一種（主要方案）細胞短時間接觸髙濃度 DEAE-葡聚糖，轉染效率較髙，但對細胞的毒性較大。第二種 (備選方案：DEAE-葡聚糖介導的轉染：增強細胞存活力）細胞長時間接觸較低濃度的 DEAE-葡聚糖，轉染效率較低，但細胞存活率較高。本實驗來源于分子克
介紹 RFect小核酸轉染試劑是國際知名科學家崔坤元博士領導我公司研發團隊在美國西雅圖實驗室研發成功的一種新型的小核酸轉染試劑。RFect可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA，轉染細胞包括絕大多數貼壁生長的細胞，如
實驗概要本實驗介紹了脂質體轉染的幾個方法。實驗原理脂質體(LR)試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先
1. RNAi 介紹 RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導
實驗材料 進行轉染的細胞株 按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞 試劑、試劑盒
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方
摘要： 本實驗介紹了脂質體轉染的幾個方法。 實驗原理 脂質 體(LR)試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把 DNA 轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
一些真核蛋白在原核宿主細胞中的表達不但行之有效而且成本低廉，然而許多在細菌中合成的真核蛋白或因折疊方式不正確，或因折疊效率低下，結果使得蛋白活性低或無活性。不僅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻譯后加工，例如二硫鍵的精確形成、糖基化、磷酸化、寡聚體的
用的基因轉染技術是將外源基因導入靶細胞需要一定的載體和導入方法，基因轉技術則是將純化的含有靶基因的質粒DNA送入細胞內，并在細胞內表達。轉染方法有多種，根據不同的細胞，貼壁或懸浮細所可選用不同的方法，其目的是要達到設置轉染效率，影響轉染產率的因素有多種，包括轉染方法、操作技術、質粒DNA的純度
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。si
實驗概要本實驗介紹了細胞瞬時轉染與傳代、細胞的裂解及共聚焦顯微鏡觀察。主要試劑1. 裂解緩沖液配方：1%NP-40，100mM NaCl，20mM TRis pH8.0，5mM EDTA，5mM MgCl2，10% Glycerol。2. 細胞培養液成分：RPMI1640基本培養液 10%胎牛血清
我們將方案分成三個階段: 第一階段介紹蛋白質的制備及蛋白質的熒光染料標記；第二階段，通過轉染或微注射將適當的探針成分導入細胞；第三階段，圖像的收集和分析過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備
慢病毒，（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷 I 型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。慢病毒載體可
細胞生物學研究中的一些常規操作只是整個項目中微不足道但又非常重要的一步。這些常規操作簡單沒有技術內涵，卻消耗了研究者大量時間與體力，且結果也不能得到保證。其中使用血球計數板在顯微鏡下進行手動細胞計數首當其沖。 手工計數不僅浪費了研究者大部分的時間，繁冗無聊的計數過程往往讓人頭暈眼花，影響了研究者的積
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
實驗方法原理tTA 是一種融合蛋白，它是由來自于大腸桿菌的四環素抑制蛋白和皰疹病毒的 VP16 蛋白的轉錄激活區域組成的。在缺乏四環素時，tTA 就結合到并激活位于基因前端的由 Tn10 和一個小的 CMV 啟動子組成的七聚體結構的四環素抗性控制子（簡稱 Tet P）。當 tTA 結合到 Tet P
常規的轉染包括脂質體，電轉化和病毒法。普通的293、Hela等細胞系，脂質體轉染也能達到70-80%。而對于其他一些極難轉染的細胞，如原代神經元，原代神經干細胞，免疫細胞等來說，脂質體轉染不僅轉化效率很低（約10%），而且細胞死亡率極高。因此有些研究人員不得不轉用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法。病