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一、原理細菌體中含有大量蛋白質，具有不同的電荷和分子量。強陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用，通過加熱使蛋白質解離，大量的SDS結合蛋白質，使其帶相同密度的負電荷，在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）上，不同蛋白質的遷移率僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色，可及時觀察電泳分離效果。因而根據預計表達蛋白的分子量，可篩選陽性表達的重組體。二、試劑準備1、30%儲備膠溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亞甲雙丙烯酰胺（Bis）1.0g，混勻后加ddH2O，37OC溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室溫。2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0)：Tris 18.17g加ddH2O溶解, 濃鹽酸調pH至8.0,定容至100ml。3、1M Tris-HCl(pH 6.8)：Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 濃鹽酸調pH至6.8,定容至100ml。4、10% SDS：電泳級SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,濃鹽酸......閱讀全文
實驗方法原理 蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細
實驗方法原理蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細菌經離心濃縮后，可通過機械法、超聲處理法或溶菌酶加去污劑的方法進行裂解。包涵體經離心沉淀后，可用Triton X-100
對于復雜混合物，如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分，通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation)，二維凝膠 (2D 膠）電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷，即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量，即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電
實驗材料 表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇
1 植物群體遺傳蛋白質組學 1.l 遺傳多樣性蛋白質研究基于基因組學的一些遺傳標記，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen
關鍵詞：western blot 聚丙烯酰胺 分離膠 積層膠 電泳目的：蛋白質的檢測與分析【原理】一個基因表達終極結果是產生相應的蛋白質（或酶）。因此檢測蛋白質是測定基因表達的主要標志，檢測蛋白質的方法很多，除ELISA法外，也可用與檢測DNA和RNA相類似的吸印方法。前兩法有“南”和“北”之意，故
pGEX 載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽 S 轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒二硫蘇糖醇谷胱甘肽洗脫緩沖液磷酸緩沖鈉鹽溶液Tri
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗 試劑、試劑盒 樣品緩沖液
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 &nbs
圖1. 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標
每一個領域的發展都是基于技術的進步和革新，蛋白質組學亦然。蛋白質的可變性和多樣性等特殊性質導致了蛋白質研究技術遠遠比核酸技術要復雜和困難得多，但正是這些特性參與和影響著整個生命過程。在開始實驗之前，先看看這篇技術簡介吧。一 蛋白質與DNA相互作用在許多的細胞生命活動中，例如DNA復制、mR
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
關于包涵體的純化是一個令人頭疼的問題，包涵體的復性已經成為生物制藥的瓶頸，關于包涵體的處理一般包括這么幾步：菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復性以及純化，內容比較龐雜 一、菌體的裂解 1、怎樣裂解細菌？ 細胞的破碎方法 1.高速組織搗碎
一、原理 一個基因表達的最終產物是產生相應的蛋白，因此檢測蛋白是測定基因表達的主要標志。 原理：Western Blotting 是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離；并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持
實驗材料 表達 BMP 融合蛋白的大腸桿菌細胞 試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖
親和層析方法幾乎可以將麥芽糖結合融合蛋白純化成單組分。麥芽糖結合蛋自（MBP) 是一個由大腸桿菌 malE 基因編碼的周質蛋白，是細菌麥芽糖轉運系統的成員之一。MBP 能結合微摩爾水平的麥芽糖和麥芽糊精，因此可用交聯了麥芽糖的瓊脂糖進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J
1.2.7重組融合蛋白的純化 PrP-pET-32a（+）轉化表達菌E.coli BL21（DE3），TB培養基中，25℃，AMP 200 ug/ml，搖床（250 r／min）培養至OD600約為1.5，更換等體積新鮮TB培養基，加入IPTG至終濃度1 mM，AMP 200 ug/ml，
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達 實驗方法原理 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—P
實驗材料 帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株 IPTG 誘導的表達載體
實驗材料 載體和細菌菌株 PL 表達載體 陽性對照質粒 試劑、試劑盒
實驗材料 進行轉染的細胞株 按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞 試劑、試劑盒
實驗材料 大腸桿菌菌株 pTA1529 或 pBAce 陽性對照質粒 試
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.
用固化 Ni2+吸收色譜純化帶組氨酸標簽的蛋白實驗 實驗材料 表達帶多聚組氨酸
我們將方案分成三個階段: 第一階段介紹蛋白質的制備及蛋白質的熒光染料標記；第二階段，通過轉染或微注射將適當的探針成分導入細胞；第三階段，圖像的收集和分析過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
實驗材料 大腸桿菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3) pET 載體或同類載體 陽性對照質粒
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝