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(4) 小心倒出上清液，并測量其體積。依據表 20.1 所示的以百分飽和度從低到高的順序加入 AS 以確定所需 AS 的質量。繼續伴以快速的攪拌并緩慢加入 AS，以避免局部形成較高鹽濃度，之后靜置 30 min, 使其形成沉淀。(5) 如步驟 (3) 中所示進行離心。盡量去除上清液, 若之前已經仔細地進行了沉淀的預實驗，則沉淀中會含有 90% 或更多的目標蛋白質。該蛋白質可溶解于適宜的緩沖液中，經過透析、脫鹽和稀釋后，便可用于下一步的純化操作。3.AS 沉淀實驗的實施一般地，提高 10% 的 AS 飽和度可以使 90% 目標蛋白質發生沉淀, 所以我們應該限制「AS 區間」的范圍, 使其不超過 1 〇%(如蛋白質剛好在 30% 的飽和度溶解，但是在 40% 飽和度時發生沉淀，將此稱為 30%?40% 的 AS 區間）。如圖 20.2 所示方法，僅采用兩步離心操作便可以確定最佳 AS 沉淀條件。基本上，首先將細胞提取物置于一個容......閱讀全文
在過去的 100 年里，雖然人們已經使用過多種不同的沉淀方法，但是 AS 沉淀一直都得到了最廣泛的應用，尤其對于酸性蛋白質。此外，PEI 沉淀的應用也正日益普及。接下來，將會對這兩種方法進行詳細的討論, 隨后對其他幾種沉淀方法做簡單概述，并針對沉淀過程中沉淀的處理和純化效率的最大化提出一般性建議。實
蛋白質沉淀技術 實驗步驟 一、AS 沉淀
二、組織樣品在生化實驗中，經常利用離體組織研究各種物質代謝途徑和酶系的作用。或者從組織中分離、純化核酸、酶以及某些有意義的代謝物質進行研究。但是，在生物組織中，因含有大量的催化活性物質，離體組織的采集必需在冰冷條件下進行，并日需盡快完成測定。否則其所含物質的量和生物活性都將發生變化。一般采用斷頭法處
五、冷 凍 干 燥溶液中溶質的濃縮可以從熱力學上通過驅使溶劑變成氣態進人頂部空間 (蒸發) 或煮沸而實現。不幸的是，不穩定的溶質(如蛋白質分子)可以被用于除去溶劑所需的熱量快速降解。由于溶液的沸點是溶液的蒸氣壓等于大氣壓 (頂部空氣壓力） 時的溫度，因此，通過增加溶液的溫度或通過降低大氣壓力
蛋白質濃縮和溶質的去除實驗 實驗步驟 一、層
預計在新奇的一級分子和生物仿制藥實體方面將會有突出的增長。一些進步的是改良的分析、開發和相互作用。現在已有許多用于去除關的方法，包括凍干、反向萃取、溶質析出，precipitation、透析(溶劑交換） 、超濾和層析技術。值得注意的是，在眾多微和設備發展的支持下，小型化和高通量的蛋白質分析取得了極大
引起蛋白質沉淀的主要方法有下述幾種： (一)鹽析(Salting Out) 在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同，故可用于對混和蛋白質組分的分離
【目的和要求】1. 學習幾種常用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白質的兩性解離性質。初步學會測定蛋白質等電點的方法。3. 加深對蛋白質膠體分子穩定因素的認識，了解蛋白質的沉淀反應、變性作用的原理及其相互關系。【實驗原理】（一） 蛋白質及氨基酸的呈色反應蛋白質所含有的某些氨基酸具有特殊
實驗方法原理 當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同的蛋白質在不同濃度的鹽中形成沉淀，所以鹽析常用于蛋白質的分離純化。幾種因素如 pH 、溫度、蛋白質純度在測定各種蛋白質的鹽析時起著重要作用。選擇硫酸銨是因為它具有一些優良性質，如鹽析的有效性、pH 范圍廣、溶解度高、
硫酸銨沉淀法 實驗方法原理 當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同
確定沉淀蛋白質所需硫酸銨濃度的方法將少量樣品冷卻到0～5℃，然后攪拌加入固體硫酸銨粉末，見蛋白質產生沉淀時，離心除去沉淀，分析上清液確定所要蛋白質的濃度，如它仍在溶液中則棄去沉淀，再加更多的硫酸銨于上清液中，直到產生蛋白質沉淀時止。以所要提取的蛋白質在溶液中的濃度對硫酸銨濃度作圖，得沉淀曲線，找出蛋
實驗方法原理當高濃度鹽存在時，蛋白質往往凝聚并析出沉淀。這一技術稱為「鹽析」。不同的蛋白質在不同濃度的鹽中形成沉淀，所以鹽析常用于蛋白質的分離純化。幾種因素如 pH 、溫度、蛋白質純度在測定各種蛋白質的鹽析時起著重要作用。選擇硫酸銨是因為它具有一些優良性質，如鹽析的有效性、pH 范圍廣、溶解度高、溶
第一節 蛋白質分離純化與鑒定的基本原理一、蛋白質的理化性質（一）蛋白質的兩性電離 pI：當蛋白質溶液處于某一pH時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為0，此時的溶液的pH稱為~。 體內大多數蛋白質：pI≈pH 5.0。在pH 7.4，大多數蛋白質解離成陰離子。少數蛋白
3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 儲存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液體狀態存在（來自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相對分子質量 Mw=50000?100000, 也可采用其他來源，如 Sigma 和
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242
四、蛋白質的沉淀 蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉淀(precipitation)，變性蛋白質一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質也可不發生沉淀。 蛋白質所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無外加
在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的有以下幾種沉淀方法和沉淀劑：1．鹽析法多用于各種蛋白質和酶的分離純化。2．有機溶劑沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化，有時也用于蛋白質沉淀。3．等電點沉淀法用于氨基酸、蛋白質及其它兩性物
2. 不可逆的沉淀反應在發生沉淀反應時，蛋白質的分子內部結構，空間構象遭到破壞，失去其天然蛋白質的性質，這時蛋白質已發生變性。變性后的蛋白質沉淀不能再溶解于原來的溶液中，這種沉淀反應稱為不可逆沉淀反應。重金屬鹽、生物堿試劑、過酸、過堿、加熱、震蕩、超生波、有機溶劑等都能使蛋白質發生不可逆沉淀反應。重
1．熱變性及酸堿變性沉淀法 用于選擇性的除去某些不耐熱及在一定PH值下易變性的雜蛋白。 2．有機溶劑沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化，有時也用于蛋白質沉淀。3．等電點沉淀法 用于氨基酸、蛋白質及其它兩性物質的沉淀。但此法單獨應用較少，多與其它方法結合使用。4．非離子多聚體沉淀法
1、核酸抽提原理 簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
（六）興風作浪的乳糖(lactose) 晚上每天都有人做報告，我覺得讓我收獲最大的是Bill Studier的報告。本來這個報告是后來才聽到的，但是由于Burgess的模塊是唯一的涉及大腸桿菌鐘表達蛋白的，我把這一段提前來說說。Studier這老哥是Brookhaven National
1.熱變性及酸堿變性沉淀法 用于選擇性的除去某些不耐熱及在一定PH值下易變性的雜蛋白。 2.有機溶劑沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化，有時也用于蛋白質沉淀。 3.等電點沉淀法 用于氨基酸、蛋白質及其它兩性物質的沉淀。但此法單獨應用較少，多與其它方法結合
實驗材料白蛋白 &n
蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉淀。蛋白質沉淀常用的方法有bai鹽析法、等電點沉淀法、有機溶劑沉淀法、重金屬鹽沉淀法、生物堿試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。乙醇沉淀蛋白質是蛋白發生變性析出。 鹽析法 在蛋白質溶液中加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽，破壞蛋白質的水化膜和中和電
添加到食品和飲料中的防腐劑是防止或阻斷引起食品腐敗的微生物生長的一類物質。山梨酸(Sorbic acid，sA)，苯甲酸(Benzoic acid，SB)，常作為防腐劑，糖精鈉(Sodium saccha-tin，Sac)作為甜味劑廣泛用于食品中。但添加過量防腐劑，不僅能破壞維生素 B還能使鈣形成不
實驗材料白蛋白球蛋白試劑、試劑盒提取液漂洗液溶解液燒化劑甘油溶液實驗步驟3.1 種子總蛋白提取的普適方法使用普適方法的目的在于從研磨好的種子中提取總蛋白質，不考慮具體的蛋白質種類 。此方法由 Damerval 等 [ 9] 及 Granier [ 10 ] 提出，它可以用于所有的種子，參見第 1 章
在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的有以下幾種沉淀方法和沉淀劑： 1．鹽析法 多用于各種蛋白質和酶的分離純化。 2．有機溶劑沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化，有時也用于蛋白質沉淀。 3．等電點沉淀法 用于氨基酸、
實驗材料 白蛋白球蛋白試劑、試劑盒 提取液漂洗液溶解液燒化劑甘油溶液實驗步驟 3.1 種子總蛋白提取的普適方法使用普適方法的目的在于從研磨好的種子中提取總蛋白質，不考慮具體的蛋白質種類 。此方法由 Damerval 等 [ 9] 及 Granier [ 10 ] 提出，它可以用于所有的種子，參見第
4.泡沫分離原理：將氣體通入含多種組分的溶液中，由于這些組分的表面活性由差異，因此在溶液的表面，某些組分將形成泡沫，泡沫的穩定性取決于操作條件及溶液的生物學特性。泡沫中含有更多的表面活性成分，故泡沫的組分種類及其含量與溶液中的不相同。這樣，溶液中的組分舅得以分離。蛋白質較易吸附與氣液界面，這有利于其
試劑、試劑盒：分離緩沖液 &nbs