淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術（二）
2. HAT選擇雜交瘤 一般在融合24 小時后，加HAT選擇培養液。HT和HAT均有商品化試劑50×貯存，用時1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培養液中。 因為在培養板內已加入飼養細胞、融合后的細胞，200 μl/孔。所以在加選擇培養液時應加3倍量的HAT。我們認為，融合后最初補加的量可用全量的2/3進行選擇，可得到滿意的篩選結果。 50×HATH: 5×10-3MA: 2×10-5MT: 8×10-4M 一般選擇HAT選擇培養液維持培養兩周后，改用HT培養液，再維持培養兩周，改用一般培養液。 三、抗體的檢測 篩選雜交瘤細胞通過選擇性培養而獲得雜交細胞系中，僅少數能分泌針對免疫原的特異性抗體。一般在雜交瘤細胞布滿孔底1/10面積時，即可開始檢測特異性抗體，篩選出所需要的雜交瘤細胞系。 檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法......閱讀全文
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術（二）
2. ?HAT選擇雜交瘤?一般在融合24 小時后，加HAT選擇培養液。HT和HAT均有商品化試劑50×貯存，用時1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培養液中。?因為在培養板內已加入飼養細胞、融合后的細胞，200 μl/孔。所以在加選擇培養液時應加3倍量的HAT。我們認為，融合后最初補加的量可用
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。?制備單克隆抗體包
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術（一）
實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。?制備單克隆抗體
淋巴細胞雜交瘤(hybridoma)單克隆抗體技術2
(三) 骨髓瘤細胞 骨髓瘤細胞系應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤細胞在同一品系小鼠腹腔內產生大量 McAb。 常用骨髓瘤細胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653 等。 骨髓瘤細胞的培養適合于一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度
淋巴細胞雜交瘤(hybridoma)單克隆抗體技術1
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術1
?1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術2
檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白質、細胞和病毒等McAb的檢測。 2. RIA用于可溶性抗原、細胞McAb的檢測。 3. FACS熒光激活細胞分類儀用于檢查細胞
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術3
抗體的制備方法與原理一、抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好（特異性強和效價高）的抗體。 （一）用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術4
（二）細胞融合 1．細胞融合前準備 （1）骨髓瘤細胞系的選擇：骨髓瘤細胞應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤在同一品系小鼠腹腔內產生大量McAb。常用的骨髓瘤細胞系見表2-4。表2-4用于融合試驗的主要骨髓瘤細胞系名 稱來 源耐 受 藥 物Ig鏈H LP3/X63-Ag
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備技術5
免疫組化染色方法?SP法1）脫蠟、水化；2）PBS洗2～3次各5分鐘；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘；4）PBS洗2～3次各5分鐘； 5）抗原修復；6）PBS洗2～3次各5分鐘；7）滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備方法
制備單克隆抗體包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產，要經過幾個月的一系列實驗步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實驗方法。一、細胞融合前準備（一） 免疫方案選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。
單克隆抗體雜交瘤細胞篩選技術介紹
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
[淋巴細胞]雜交瘤的定義
中文名稱[淋巴細胞]雜交瘤英文名稱hybridoma定 義腫瘤細胞與正常來源淋巴細胞融合產生的雜種細胞。實際上多指T或B淋巴細胞與骨髓瘤細胞系融合成的雜交瘤細胞。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞培養與細胞工程（二級學科）
單克隆抗體制備過程與原理
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
細胞雜交瘤技術
細胞雜交瘤技術?雜交瘤技術?雜交瘤技術是1975年Kohler和Milstein用于制備單克隆抗體而創建的一項重要技術，被譽為“免疫學上的一次革命”。此技術被廣泛用于各種單克隆抗體的制備。抗體是由B淋巴細胞分泌的，一個B淋巴細胞只能分泌一種抗體。把B淋巴細胞和骨髓細胞融合，即可形成在體外長期存活并分
單克隆抗體制備的基本原理與過程
單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體技術的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
概述單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
關于單克隆抗體的制備過程介紹
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
單抗是什么
動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細胞系，具有不同基因的B淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成效應B細胞（漿細胞）和記憶B細胞，大量的漿細胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。如果能選出一個制造一種專一
單抗是什么
動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細胞系，具有不同基因的B淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成效應B細胞（漿細胞）和記憶B細胞，大量的漿細胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。如果能選出一個制造一種專一