單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細胞喪失產生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養。克隆化次數的多少由分泌能力強弱和抗原的免疫性強弱而決定。一般說，免疫性強的抗原克隆次數可少一些，但至少要3～5次克隆才能穩定。 克隆化的方法很多，包括有軟瓊脂克隆化、顯微操作法、熒光激活分離法及限稀釋法等。 （一）軟瓊脂克隆化 借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下： 1．配2.5％的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．將117ml完全DMEM液和3ml 10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。 ......閱讀全文
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗概要本文介紹了單克隆抗體的克隆化方法，包括有限稀釋法、顯微操作法、軟瓊脂平板法及熒光激活分離法等。實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細
單克隆抗體的克隆化方法
實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細
單克隆抗體的克隆化方法有限稀釋法介紹
1．材料（1）微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞（即飼養細胞）每孔2萬～4萬。（2）HT培養基2．操作方法（1）取出抗體陽性孔細胞，用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色，計數。（2）用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。（3）用吸管將細
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
單克隆抗體技術的方法克隆化操作過程
從原始孔中得到的陽性雜交瘤細胞,可能來源于二個或多個雜交瘤細胞,因此它們所分泌的抗體是不同質的。為了得到完全同質的單克隆抗體,必須對雜交瘤細胞進 行克隆化。另一方面,雜交瘤細胞培養的初期是不穩定的,有的細胞丟失部分染色體,可能喪失產生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細胞,得到分泌 抗體穩定
單克隆抗體的克隆化方法軟瓊脂平板法介紹
軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×1
單克隆抗體技術的克隆化的內容
從原始孔中得到的陽性雜交瘤細胞，可能來源于二個或多個雜交瘤細胞，因此它們所分泌的抗體是不同質的。為了得到完全同質的單克隆抗體，必須對雜交瘤細胞進 行克隆化。另一方面，雜交瘤細胞培養的初期是不穩定的，有的細胞丟失部分染色體，可能喪失產生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細胞，得到分泌 抗體
單克隆抗體(monoclonal－antibody)克隆化技術
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
單克隆抗體的克隆化方法顯微鏡操作法介紹
在直徑6cm培養皿中，加入1ml1.0×108細胞懸液放置5%CO2飽和濕度，37℃溫箱中放置30min以上，倒置顯微鏡下，尋找那些與周圍相距甚遠的單個細胞，將毛細管口（一頭有直角彎頭毛細管，一頭連接一尺長乳膠管，用口控制液體進入）水平置放于液面上，左右微動，直到看見管口，對準細胞，吸入毛細管，將管
單克隆抗體的克隆化方法熒光激活分離法介紹
用一種熒光激活細胞分類器（FluoresceinActivafedCellSorter，FACS）。其基本原理是：將細胞經熒光抗體染色后，經噴嘴形成單個細胞的線形液滴，在萊塞光激發下，熒光素發射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結合細胞形態大小產生光散射信號，經電腦處理，產生信號并與預定的信號對比，根
軟瓊脂克隆化的方法
軟瓊脂克隆化借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長，而達到克隆化，具體操作如下：1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×1
關于動物細胞工程的過程介紹
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。 2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細
關于動物細胞工程的過程介紹
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體制備的流程
原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力
單克隆抗體的產生方法
（一）動物體內誘生法?目前McAb治療用或體外診斷用的多采用該法。小鼠腹腔接種液體石蠟，一周后接種雜交瘤細胞懸液，接種10～14天后，無菌抽取腹水，離心取上清液即可。（二）體外培養法?這是實驗室制備的方法。將雜交瘤細胞置培養瓶中培養，離心后收集上清液。
單克隆抗體的方法特點
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽
單克隆抗體技術的方法
1、抗原準備抗原(Ag)是指所有能誘導機體發生免疫應答的物質。即能被 T/B 淋巴細胞表面的抗原受體(TCR/BCR)特異性識別與結合,活化 T/B 細胞,使之增殖分化,產生免疫應答產物(致敏淋巴細胞或抗體),并能與相應產物在體內外發生特異性結合的物質。因此,抗原物質具備兩個重要特性:一是誘導免疫應
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過
單克隆抗體制備的基本原理與過程
單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤
關于分子克隆化的基本介紹
分子克隆技術是70年代才發展起來的，它的出現和應用開辟了分子遺傳學研究的新領域，打開了人類了解、識別、分離和改造基因，創造新物種的大門。它的成就對于工業、農牧業和醫學產生深遠影響，并將為解決世界面臨的能源、食品和環保三大危機開拓一條新的出路。
簡述分子克隆化克隆的選擇
①直接篩選：有些載體帶有可辨認的遺傳標記，能有效地將重組分子與本底區分。例如：有些λ噬菌體攜帶外源基因后形成的噬菌斑就會從原來的混濁變為清亮；還有些載體分子攜帶外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的顏色有明顯變化，如藍色變為無色；有些λ噬菌體能侵染甲菌而不能侵染乙菌，攜帶外源DNA片段后便能侵染乙菌，
克隆化酵母DNA的操作實驗
實驗材料?酵母實驗步驟 ? 將待研究的基因亞克隆到YIP質粒。2.? 用限制性內切酶在克隆化基因內部切開，使質粒線性化。3.? 用1~10 μg DNA加上擔體DNA轉化適合的菌株，通過質粒上帶的標記進行選擇，在選擇培養基上純化幾個轉化子，制備DNA，應用Southern 雜交確證整合是否發生在所期
雜交瘤細胞的克隆化
融合后的細胞在孔里生長時，一般并不是一個單純的克隆（一般是兩個或者多個克隆，就算肉眼看到的是形成一個完整的克隆，但事實上可能是由兩個或者多個原始的雜交瘤形成的），如果直接將其擴大培養將會產生兩個問題：一是如果有兩個或兩個以上的克隆或一個克隆實際上是由兩個克隆長在一起形成的，并且都分泌抗體，那么就有可
概述單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，
單克隆抗體的制備方法3
（4）融合? ①將骨髓瘤細胞與脾細胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml離心管中用無血清不完全培養液洗1次，離心，1200rpm,8min;棄上清，用吸管吸凈殘留液體，以免影響聚乙二醇（PEG）濃度。輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略松動。? ②90s內加入37℃預溫的1ml 45%PEG