均相熒光免疫測定(homogeneousfluorescenceimmunoassay)
均相熒光免疫測定(homogeneous fluorescence immunoassay)是根據1972年Rubenstein等建立的均相酶免疫測定法(HEI)發展形成的一種新型免疫熒光分析技術。所謂“均相”是指在反應結束后無須對游離和結合的標記物進行分離,直接測定即可。均相熒光免疫測定是利用熒光的一些特殊的理化特性(如熒光的激發、吸收、淬滅等),在標記抗原與特異性抗體結合后發生改變,據此設計建立的各種試驗方法。 一、熒光淬滅免疫測定 熒光淬滅免疫測定(fluorescencequenchingimmunoassay)反應系統內除待測藥物外,同時加入某種待測小分子抗原和一定量用熒光物質標記的該抗原,二者與有限量的特異性抗體競爭結合。當抗體與此種標記抗原結合時,發生淬滅作用使熒光物質的熒光消失;因而無須分離直接測定反應系統的偏振熒光強度。如樣品中未標記抗原含量高,則競爭結合的抗體多,使游離的標記抗原增多,經紫外......閱讀全文
均相熒光免疫測定(homogeneous-fluorescence-immunoassay)
均相熒光免疫測定(homogeneous fluorescence immunoassay)是根據1972年Rubenstein等建立的均相酶免疫測定法(HEI)發展形成的一種新型免疫熒光分析技術。所謂“均相”是指在反應結束后無須對游離和結合的標記物進行分離,直接測定即可。均相熒光免疫測定是利用
均相免疫分析的特點
均相免疫分析的定量依據一般是免疫反應前后標記物信號的改變.為實現高靈敏分析,這種信號的改變必須達到相當高的程度.另外,均相免疫分析體系還必須具有足夠的抵抗樣品基質干擾的能力.稀土離子配合物熒光檢測的高度特異性及其對周圍環境變化的高敏感性,為建立靈敏,強健的均相TRFIA提供了可能.均相免疫分析具有快
均相酶免疫測定
1.酶增強免疫測定技術(EMIT):EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原,保留半抗原和酶的活性。當酶標半抗原與抗體結合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。2.克隆酶供體
異相酶免疫試驗和均相酶免疫試驗
Ag為待測抗原,AgAb-E為結合標記物,Ab-E為游離標記物。若抗原-抗體反應影響標記物中酶的活性,如酶活性消失,即結合標記物(AgAb-E)無酶活性,游離標記物(Ab-E)有酶活性; (1) 檢測時不需分離結合標記物(AgAb-E)和游離標記物(Ab-E),檢測體系中標記物酶活性(Ab-E
什么叫均相和非均相
均相物系:在連續相和分散相之間沒有相界面。分離較難,如水-乙醇非均相物系:在連續相和分散相之間存在著明顯的相界面,機械分離過程,如油和水。
均相光激化學發光免疫分析技術
均相光激化學發光免疫分析技術(amplified luminescent proximity homogeneous assay linked immunosorbent assay,AlphaLISA) 是一種以表面包被有親和涂層的受體微球(acceptor beads) 和供體微球(donor
均相酶免疫測定的種類有哪些
1.酶增強免疫測定技術(EMIT):EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原,保留半抗原和酶的活性。當酶標半抗原與抗體結合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。 2.克
均相酶免疫測定的內容有什么?
1.酶增強免疫測定技術(EMIT): EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原,保留半抗原和酶的活性。當酶標半抗原與抗體結合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。 2
均相酶免疫測定的種類是什么?
1.酶增強免疫測定技術(EMIT):EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原,保留半抗原和酶的活性。當酶標半抗原與抗體結合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。 2.克
均相酶免疫測定的種類是什么?
1.酶增強免疫測定技術(EMIT):EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原,保留半抗原和酶的活性。當酶標半抗原與抗體結合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。 2.克
關于均相酶免疫測定項目的介紹
均相酶免疫測定主要用于藥物和小分子物質的檢測。ELISA則應用更為廣泛,可用以檢測的項目包括以下幾個方面: 1.病原體及其抗體廣泛應用于傳染病的診斷。病毒肝炎病毒、風疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒等;細菌如鏈球菌、結核分枝桿菌、幽門螺桿菌和布氏桿菌等;寄生蟲如弓形體、阿米巴、瘧原蟲等。 2.蛋白
熒光免疫技術
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescentantibod
免疫熒光
Immunofluorescence Technique?(Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells??Immunofluorescence Protocol?(Walter Steffen)Methanol fixationForma
熒光免疫分析
免疫分析是基于蛋白抗原和抗體之間、或者小分子半抗原與抗體之間的特異反應的分析方法,是生物分析化學的重要內容之一。其中,用熒光物質作為標記的免疫分析即為熒光免疫分析。作為熒光標記物,應具有高的熒光強度,其發射的熒光與背景熒光有明顯區別;它與抗原或抗體的結合不破壞其免疫活性,標記過程要簡單、快速;水溶性
免疫熒光的常見熒光
1)FITC2)RB2003)TRITC4)鑭系:Eu、Tb5)PE6)其它常見熒光素的特性1)FITC:黃色結晶粉末,吸收光:490~495nm,發射光:520~530nm,明亮的黃綠色熒光。2)RB200:橘紅色粉末,吸收光570nm,發射光595~600nm,橘紅色熒光。3)TRITC:紫紅色
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
免疫熒光簡介
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
免疫熒光概述
免疫熒光(immunofluorescence technic)Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescentantibodytechnique)。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用
直接免疫熒光
中文名稱直接免疫熒光英文名稱direct immunofluorescence定 義直接用熒光標記抗體來研究特異性抗原在細胞內定位的方法。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞生物學技術(二級學科)
間接免疫熒光
中文名稱間接免疫熒光英文名稱indirect immunofluorescence定 義直接免疫熒光技術的改進。待檢細胞首先用未標記的抗體處理,使之與特異的抗原形成復合物,然后再用抗抗體的熒光標記抗體著色,即可檢測出特異抗原在細胞中的存在部位,具有熒光增強效應。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞,順序加入一抗和二抗,通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片產生一抗種屬的二抗豬血清或其他封閉劑D-PBSA試劑、試劑盒新鮮制備的固定劑用含10%的FBS培養液封固劑實驗步驟1. 用 D-PBSA 洗滌長有細胞的蓋玻片,置于合適的培養皿中。如 13 mm 蓋玻片可用24 孔
免疫熒光技術
免疫熒光技術1)??直接法1.標本經固定后,PBS洗滌3×3分鐘。2.加熒光素標記的抗體,濕盒內37℃孵育50分鐘。3.PBS洗滌3×3分鐘。4.0.1%伊文氏蘭復染。5.PBS洗3次,蒸餾水洗2次,每次3分鐘,以除去NaCl結晶。6.緩沖甘油封片,鏡檢。?2)??間接法1.標本固定后,PBS洗滌3
間接免疫熒光
方案16.11 間接免疫熒光實驗方法原理固定細胞,順序加入一抗和二抗,通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片產生一抗種屬的二抗豬血清或其他封閉劑D-PBSA試劑、試劑盒新鮮制備的固定劑用含10%的FBS培養液封固劑實驗步驟1. 用 D-PBSA 洗滌長有細胞的蓋玻片,置于合適的培養皿中。如 1
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞,順序加入一抗和二抗,通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產生一抗種屬的二抗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
免疫熒光技術
基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。試劑與儀器l??????????磷酸鹽緩沖鹽水(PBS):
免疫熒光技術
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種.它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展,該技術已相當成熟。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 直接法 將
熒光免疫技術介紹
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescentantib
熒光免疫分析原理
熒光免疫檢測技術具有專一性強、靈敏度高、實用性好等優點,因此它被用于測量含量很低的生物活性化合物,例如蛋白質(酶、接受體、抗體)、激素(甾族化合物、甲狀腺激素、酞激素)、藥物及微生物等 作為免疫分析法的一種,FIA同樣存在兩種模式,即競爭型和夾心型。其中競爭型(以標記抗原的競爭型為例)的測定原
免疫熒光技術
實驗方法原理 直接法是以熒光素標記的抗體直接與標本內的抗原反應,形成抗原—熒光素標記抗體復合物。根據熒光的分布位置及強度,確定相應抗原的存在與否及其所在部位。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBS伊文氏蘭儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. 標本經固定后,PBS洗滌3×3 分鐘;2. 加熒光素標記的抗體,濕