酶標抗體的質量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價測定 采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2. 酶量和IgG量 酶量(mg/ml)=OD403′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402′0.42)′0.94′0.62 其中,0.42為酶蛋白本身(0.3)及結合戊二醛后增加的OD值,0.94為抗體蛋白與醛化酶結合后,OD280約增加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280=1.0時為0.62. 過碘酸鈉標記法IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402′0.3)′0.94′0.62 標記率= OD403/ OD280=0.3-0.6,即一個抗體分子上結合1-2個HRP分子.標記率可以大于0.6-0.9。OD403/ OD280=0.4,約相當于E/P=1.0。 酶標抗體的保存 經鑒定合格的酶標抗體,由于硫化物及疊氮化物等可與酶......閱讀全文
酶標抗體的質量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價測定 采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2. 酶量和IgG量 酶量(mg/ml)=OD403′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402′0.42)′0.94′0.62
酶標抗體的質量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價測定采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。2. 酶量和IgG量酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62其中,0.42為酶蛋白本身
酶標抗體的質量鑒定與保存
1.酶活性和抗體效價測定: 采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2.酶量和IgG量: 酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94
酶標抗體標記效果測定
酶標抗體標記效果測定:測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。
酶標抗體結合物的純化
在酶標記的溶液中,出現的是各種交聯物的混合物,有酶-抗體、酶-抗體-酶、抗體-抗體、酶-酶,甚至還有游離的酶和抗體。在這中間,除了抗體-酶和酶-抗體-酶外,其它都應該給予除去。1、50%飽和硫酸銨沉淀法。此法只能除去游離的酶及酶-酶聚合體。而不能除去其它不需要者。但是此法對酶標抗體的損耗少。2、過S
抗體捕獲酶標抗體法測定抗體的介紹
抗體捕獲酶標抗體法測定抗體,血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法。先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,去除IgG后再測定特異性IgM。將抗IgM抗體連接在固相載體上,洗滌后加入稀釋的血清標
雙抗體夾心酶標抗體法的相關介紹
雙抗體夾心酶標抗體法是檢測抗原最常用的方法。將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體,洗滌除去未結合的抗體及雜質。加受檢標本,使之與固相抗體接觸反應一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。加酶標抗體使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合,徹底
關于酶標抗體法的基本介紹
酶標抗體法,又名酶聯免疫吸附法(ELISA),利用酶標記抗原或抗體以檢測相應抗原或抗體的一種免疫學標記技術。其基本原理是使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性,而相對應的抗體或抗原與某種酶連接成酶標抗體或抗原,酶標抗體或抗原既保留了免疫活性可以與固相載體表面的抗原或抗體結合,又保留
競爭酶標抗體法測定抗體的基本介紹
競爭酶標抗體法測定抗體,可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體,洗滌后加入受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原
抗血清的鑒定與保存生化檢驗
抗血清的鑒定與保存:一、特異性抗體的鑒定1.抗體特異性鑒定:常采用雙向免疫擴散法。2.抗體的效價的鑒定:常采用雙向免疫擴散法。一是僅稀釋抗血清,與同一濃度抗原反應;另一種是抗血清、抗原同時稀釋作棋盤滴定。3.抗體的純度鑒定:常用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒定醫|學教育網整理。二、抗血清的保存動物血
RNA質量檢測與鑒定
方法一、檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景(溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0時,我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的,不過要注意,當你用Tris作為緩沖
酶標抗體法檢測農藥殘留的介紹
農藥殘留常用的快速檢測方法有酶抑制法和ELISA。酶試劑易失活導致反應不穩定,檢測結果誤差較大,重復性差。ELISA法操作步驟簡便,適用于樣品量較大的分析篩選,但是ELISA受限于抗體和抗原的制備和提取。已建立檢測毒死蜱殘留的ELISA方法,檢測DDT及其相關化合物的ELISA方法,測定套種氰戊
酶標抗體法—獸藥殘留檢測的方法
獸藥殘留常用的方法有微生物法、儀器分析法、微生物法適用于對畜禽組織中的抗菌藥物進行篩選檢驗,該方法雖然能檢測高濃度的殘留,但是檢測限高于樣品所規定的的最高殘留限量。因此ELISA成為廣泛應用的快速檢測獸藥殘留的方法。已建立檢測動物組織中的呋喃妥因代謝物的直接競爭化學發光酶免疫法,檢測呋喃唑酮代謝
酶標抗體法—生物毒素檢測的介紹
酶標抗體法—生物毒素檢測:以免疫學為基礎的檢測方法如ELISA具有實驗周期短、設備簡單、操作簡便等特定而被廣泛應用。已建立檢測黃曲霉毒素B1直接競爭ELISA法,檢測豬肉和雞肉中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和T-2毒素的直接競爭ELISA法,基于噬菌體展示技術的酶聯免疫吸附分析檢測赭曲霉毒素A的方法等。
酶標抗體法—轉基因檢測的介紹
檢測轉基因物質的雙抗體夾心ELISA具備多克隆抗體費用較低。單克隆抗體親和力高的特點,使得后續研究開發的試劑盒檢測成本低廉,靈敏可靠,而且可以穩定、方便地提供標準化試劑,便于實現工業化生產。雙抗體夾心ELISA檢測方法的研究和建立,為制備免疫膠體金試紙條提供了便利,為建立轉基因動物的現場、快速查
實驗室準則:抗體質量的金標
幾乎所有實驗室都會用到抗體,抗體不僅是生命科學研究的重要工具,在免疫學診斷領域也是不可或缺的。市面上的抗體種類繁多同時也良莠不齊,由于缺乏評估抗體質量的標準方法,人們過去只能依賴于生產廠家的信用。 做過免疫熒光、免疫沉淀(IP)或者Western blot實驗的人都知道,抗體優劣對實驗結果有
抗體的保存
腹水:腹水重組后可加入少量疊氮納等來阻止細菌生長。腹水應當凍存。單抗最好能夠小包裝保存以避免反復凍融。若要保存較長時間,則不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,會使抗體效價下降,因此加入蛋白酶抑制劑可以選擇。純IgG:不要稀釋抗體后來保存,除非加入羊血清,BSA等后。IgG會和玻璃,塑料等粘附。
抗體的保存
一、腹水?腹水重組后可加入少量疊氮納等來阻止細菌生長。腹水應當凍存。單抗最好能夠小包裝保存以避免反復凍融。若要保存較長時間,則不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,會使抗體效價下降,因此加入蛋白酶抑制劑可以選擇。?二、純IgG?不要稀釋抗體后來保存,除非加入羊血清,BSA等后。IgG會和玻璃,塑
間接酶標抗體法的基本信息介紹
間接酶標抗體法,主要是利用酶標記的抗抗體檢測已與固相結合的受檢抗體,是檢測抗體最常用的方法。將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原,洗滌除去未結合的抗原及雜質。加入稀釋的受檢樣品(如血清),樣品中特異性抗體與抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及
酶標抗體法—重金屬檢測的簡介
重金屬檢測方法有原子吸收光譜法、原子熒光法、陽極溶出伏安法、催化極譜法和電感耦合等離子體質譜法,這些方法均不能滿足快速檢測的要求。而酶標抗體法可提高檢測速度。建立了檢測重金屬鎘的間接競爭ELISA法,Pb和Cr的間接競爭ELISA,一步競爭ELISA對環境水樣中的Cd檢測等。
酶標抗體和酶抗酶復合物的應用于雙抗體夾心法ELISA
該法多用于檢測多價大分子抗原,但不能用于檢測半抗原等小分子物質。 【試劑及配制】 (1) 包被液(pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) Na2CO3 0.16g NaHCO3 0.29g 蒸餾水加至 100ml (2)稀釋液(pH 7.4 -Tween 20) KH2PO4 0.
如何保存抗體
1.鼠抗:腹水:l??????當腹水通過加入DDWater重組后,通常需要加入少量的疊氮化鈉防菌。l??????應該冷凍保存,不推薦在4度保存。l??????應當分裝成小份,盡量防止反復凍融。l??????腹水中含有蛋白酶,可以降解抗體,而血清中則不含。加入蛋白酶抑制劑可以減緩降解。?純化的IgG:
抗體保存指南
抗體保存指南抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。本指南以Abcam抗體保存方法為主,同樣也可以應用到其他絕大部分公司的抗體產品!請謹記!無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體!1. 收到抗體后請務必在12000rpm離心1
抗體保存指南
抗體保存指南 抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。 本指南以Abcam抗體保存方法為主,同樣也可以應用到其他絕大部分公司的抗體產品! 請謹記!無論何時 請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體!
酶的穩定型與保存方法介紹
1、酶的劑型 酶制劑常以4種劑型供應,即液體酶制劑、固體酶制劑、純酶制劑、固定化酶制劑。由于酶的特性使得如何提高酶的穩定性,延長其有效期是各行業需解決的問題。 2、影響酶的穩定性因素 ①溫度 大多數酶可在低溫條件下(0~4℃)使用、處理和保存。但有些酶的高級結構的穩定性與疏水鍵有關;許多酶可
酶標抗體法—致病微生物檢測的介紹
不論是在發展中國家還是發達國家,對食品安全影響較大的是致病微生物引起的食源性疾病,而在人們食物鏈中,單增李斯特菌、空腸彎曲菌、沙門氏菌都是重要的食源性致病菌。已建立檢測沙門氏菌的雙抗夾心ELISA法,檢測單增李斯特菌的ELISA法,耐熱菌間接競爭ELISA快速檢測方法等。
培養基質量控制與保存
一、物理性狀的質量控制應包括20℃ -25 ℃時的pH,并應觀察以下內容:加入培養基的量和(或)瓊脂層的厚度、顏色、透明度、是否存在肉眼可見的雜質、凝膠穩定性/黏稠度(一致性)、濕度。滅菌前后都應測定pH,采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測定液體培養基的pH,固體培養基可用平頭電極或者連接微型探頭
酶標抗體和酶抗酶復合物的應用于細胞ELISA
應用酶標抗體進行免疫測定的方法較多,非均相酶免疫測定是目前應用最廣泛的一類酶免疫檢測技術,其中以酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent aay,ELISA)最常用,它可用于測定抗體,也可測定可溶性抗原及細胞抗原。而酶-抗酶復合物多用于免疫組織化學。以下
酶與抗體的偶聯實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 磷酸鈉HRPO碳酸鹽緩沖液過碘酸鈉SASTrisEDTABSA甘油儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?濃度≥1 mg/ml 抗體溶液對2 l 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液透析,于4℃緩慢搖動下過夜。2. ?10 mg HRPO溶解于1 ml 0.1
鑒定血清的質量與防發揮的方法
?? 一 鑒定的方法? ? 1、理化性質:蛋白含量包括血清總蛋白含量、球蛋白含量、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標,血清中球蛋白主要是抗體,球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。? ? 2、微生物檢測:對支原體、病毒的檢測,支原體是一種很小的微生物,可通過孔徑22u的濾