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（一）原理親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應的抗體（或抗原）發生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應抗體（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質分開，達到分離提純的目的。此法具有高效、快速、簡便等優點。（二）載體的基本要求和選擇理想的載體應具有下列基本條件：①不溶于水，但高度親水；②惰性物質，非特異性吸附少；③具有相當量的化學基團可供活化；④理化性質穩定；⑤機械性能好，具有一定的顆粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好為多孔的網狀結構，使大分子能自由通過；⑦能抵抗微生物和醇的作用。可以做為固相載體的有皂土、玻璃微球、石英微球、羥磷酸鈣、氧化鋁、聚丙烯酰胺凝膠、淀粉凝膠、葡聚糖凝膠、纖維素和瓊脂糖。在這些載體中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特異性吸附。纖維素的非特異性吸附強。聚丙稀酰胺凝膠是目前的首選優良載體。瓊脂糖凝膠的......閱讀全文
親和層析(Affinity Chromatography)是利用生物分子間專一的親和力而進行分離的一種層析技術。人們很早就認識到蛋白質、酶等生物大分子物質能和某些相對應的分子專一而可逆的結合，可以用于對生物分子的分離純化。但由于技術上的限制，主要是沒有合適的固定配體的方法，所以在實驗中沒有廣泛的
3.4.5 親和層析的應用親和層析的應用主要是生物大分子的分離、純化。下面簡單介紹一些親和層析技術用于純化各種生物大分子的情況。抗原和抗體利用抗原、抗體之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為免疫親和層析。例如將抗原結合于親和層析基質上，就可以從血清中分離其對應的抗體。在蛋白質工程菌發酵液中所需蛋白
親和層析的應用主要是生物大分子的分離、純化。下面簡單介紹一些親和層析技術用于純化各種生物大分子的情況。1.抗原和抗體利用抗原、抗體之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為免疫親和層析。例如將抗原結合于親和層析基質上,就可以從血清中分離其對應的抗體。在蛋白質工程菌發酵液中所需蛋白質的濃度通常較低,用離
⑥元素分析：如果配體中含有某種特別的元素，通過元素分析就可以確定配體結合量。⑦放射性分析法：偶聯中加入一定量帶有同位素的配體，通過放射性分析確定配體結合量，這是一種非常靈敏的方法。影響配體結合量的因素很多，包括基質和配體的性質、基質的活化方法及條件、基質和配體偶聯反應的條件等等。例如通常溴化氰活化的
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、 吸附層析 1、 吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、吸附層析 1、吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。 2、薄層層析 薄層
3.4.3 親和吸附劑選擇并制備合適的親和吸附劑是親和層析的關鍵步驟之一。它包括基質和配體的選擇、基質的活化、配體與基質的偶聯等等。這里主要介紹一些基本的原理，關于活化、偶聯等過程的具體實驗操作可以參閱本書后面的實驗部分或相應的參考書。基質⑴ 基質的性質基質構成固定相的骨架，親和層析的基質應該具有以
配體與基質偶聯后，通常要測定配體的結合量以了解其與基質的偶聯情況，同時也可以推斷親和層析過程中對待分離的生物大分子吸附容量。配體結合量通常是用每毫升或每克基質結合的配體的量來表示。測定配體結合量的方法很多，下面簡單介紹幾種：1) 差量分析：根據加入配體的總量減去配體與基質偶聯后洗滌出來的量即可大致推
一、實驗目的 1.熟悉親和層析純化蛋白質的的原理。 2.初步掌握親和層析法純化胰蛋白酶的方法步驟。 二、實驗原理 親和層析已經廣泛應用于生物分子的分離和純化，如結合蛋白、酶、抑制劑、抗原、抗體、激素、激素受體、糖蛋白、核酸及多糖類等，也可用于分離細胞
食品中黃曲霉毒素的測定—免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法 1 范圍本標準規定了免疫親和層析凈化—高效液相色譜法和免疫親和層析凈化—熒光光度法測定食品中黃曲霉毒素的條件和詳細分析步驟。本標準適用于玉米、花生及其制品（花生醬、花生仁、花生米）、大米、小麥、植物油脂、醬油、食醋等食品中
在分離分析特別是蛋白質分離分析中，層析是相當重要、且相當常見的一種技術，其原理較為復雜，對人員的要求相對較高，這里只能做一個相對簡單的介紹。 一、 吸附層析 1、 吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。 2、 薄層層析
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
親和層析的原理與眾所周知的抗原一抗體、激素一受體和酶一底物等特異性反應的機理相類似，每對反應物之間都有一定的親和力。正如在酶與底物的反應中，特異的廢物(S')才能和一定的酶(E)結合，產生復合物(E－S')一樣。在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具有親和力，并產生
親和層析是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。 具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。
沉淀法沉淀法也稱溶解度法。其純化生命大分子物質的基本原理是根據各種物質的結構差異性來改變溶液的某些性質，進而導致有效成分的溶解度發生變化。1、鹽析法鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐
所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用，通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用，是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上，免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用，不同的部分在于, 層析后需要回收
一、實驗目的與原理生物大分子化合物的重要特征之一是具有與某些相對應的分子通過次級鍵或共價鍵專一結合的能力即親和力。例如酶與抑制劑之間，抗原與抗體之間，結合的雙方不僅是專一的，而且結合以后可以在不喪失生物活性的基礎上用物理或化學的方法進行解離。根據這一特性，如果把具有親和力的一對分子的某一方連接于水不
三、膜蛋白的純化一 旦 使 用 了 合 適 的 去 污 劑 將 膜 蛋 白 從 細 胞 膜 中 増 溶 出 來 ，就 可 以 分 離 目 標 蛋 白 質 了 。傳 統 色 譜 層 析 技 術 ，如 凝 膠 過 濾 、親 和 、離 子 交 換 和 層 析 聚 焦 （chromatofocusi
3)采用適當的流速，也可使理論塔板的高度降低，增大理論塔板數。太高或太低的流速都是不可取的。對于一個層析柱，它有一個最佳的流速。特別是對于氣相色譜，流速影響相當大。②改變容量因子D(固定相與流動相中溶質量的分布比)。一般是加大D，但D 的數值通常不超過10，再大對提高Rs 不明顯，反而使洗脫的時
分辨率： 由上式可見，Rs值越大，兩種組分分離的越好。當Rs = 1時，兩組分具有教好的分離，互相沾染約2%，即每種組分的純度約為98%。當Rs=1.5時，兩組分基本完全分開，每種組分的純度可達到99.8%。如果兩種組分的濃度相差較大時，尤其要求較高的分辨率。 為了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方
5. 正相色譜與反相色譜 正相色譜是指固定相的極性高于流動相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度快，先從柱中流出來。 反相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度快而先從柱中流出。&
親和層析是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。 具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。
親和層析是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。 具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。
親和層析是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。 具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。
實驗方法原理 剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 PBS-Earle緩沖液磷酸鹽緩
實驗方法原理 剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒
1 范圍本標準規定了免疫親和層析凈化—高效液相色譜法和免疫親和層析凈化—熒光光度法測定食品中黃曲霉毒素的條件和詳細分析步驟。本標準適用于玉米、花生及其制品（花生醬、花生仁、花生米）、大米、小麥、植物油脂、醬油、食醋等食品中黃曲霉毒素的測定。樣品中黃曲霉毒素的檢出限：免疫親和層析凈化—高效液相色譜法和
實驗步驟一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同
剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接體 ( splicc
⑵基質的活化基質的活化是指通過對基質進行一定的化學處理，使基質表面上的一些化學基團轉變為易于和特定配體結合的活性基團。配體和基質的偶聯，通常首先要進行基質的活化。①多糖基質的活化多糖基質尤其是瓊脂糖是一種常用的基質。瓊脂糖通常含有大量的羥基，通過一定的處理可以引入各種適宜的活性基團。瓊脂糖的活化方法