幾種基因克隆的常用方法介紹（一）
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最為簡便的一種。獲取基因序列多從文獻中查取,即將別人報道的基因序列直接作為自己克隆的依據。現在國際上公開發行的雜志一般都不登載整個基因序列,而要求作者在投稿之前將文章中所涉及的基因序列在基因庫中注冊,擬發表的文章中僅提供該基因在基因庫中的注冊號 (accession number),以便別人參考和查詢。目前,世界上主要的基因庫有:(1)EMBL,為設在歐洲分子生物學實驗室的基因庫,其網上地址為http://www.ebi.ac.uk/ebi-home.html;(2)Genbank,為設在美國國家衛生研究院(NIH)的基因庫,其......閱讀全文
功能基因－cDNA－3’末端的克隆
一．原理 (1) 以目的mRNA 為模板，使用Oligo dT-3sites Adaptor Primer 進行反轉錄反應，合成1st Strand cDNA。 (2) 使用含有KpnI、XbaI、BamH I 酶切位點的上游特異性引物和3sites Adaptor Primer進行PCR反應。 (
小鼠βactin基因的克隆表達（3）
（2）質粒的提取及酶切鑒定分析 ? 質粒的提取按照質粒提取試劑盒的操作步驟進行，然后進行雙酶切鑒定。 ? 管號 ① ② 質粒DNA
小鼠βactin基因的克隆表達（2）
實驗步驟： ? （1）目的基因與表達載體的連接反應： ①表達載體和目的片段的酶切 ? 管號 ① ② pGEX 4T-1
生物節律轉基因豬克隆成功
由深圳華大基因研究院、丹麥奧爾胡斯大學、深圳華大方舟生物技術有限公司等單位組成的科研團隊，采用手工克隆技術，首次將人體生物鐘基因突變體轉入到豬體內，從而成功獲得生物節律轉基因模型豬。相關研究成果已在《公共科學圖書館?綜合》上發表。 ? 生物鐘存在于所有生物中，從綠藻
小鼠βactin基因的克隆表達（1）
動物組織RNA的提取實驗目的：掌握由動物組織中提取總RNA的方法實驗原理：Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA
家蠶油蠶突變基因的克隆
【實驗原理】外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA 連接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的連接緩沖系統中，將載體分子與外源DNA分子進行連接。Taq DNA聚合酶擴增的PCR產物，其DNA雙鏈前后末端都有一個游離的A堿
基因印記與動物克隆技術
基因印記 (imprinting) 對核移植后基因組重新編程的影響。基因印記現象在哺乳動物的發育過程中普遍存在,它是指基因的表達與否取決于它們是在父源染色體上還是母源染色體上。有些印記基因只從母源染色體上表達,而有些則只從父源染色體上表達。基因印記與動物克隆技術的成功及不足有何關系值得深入研究。
目的基因的亞克隆（subcloning）2
四、連接產物的轉化1.感受態細胞的制備⑴ 保存于-70℃的DH5α（或其他菌種）用接種環劃菌于1.5%瓊脂平板上，37℃恒溫倒置培養至單菌落出現（約14-16 hr）。⑵ 挑取單菌落，接種于2.0ml LB液體培養基中，37℃恒溫，250g振蕩培養過夜（約12hr）。⑶ 取0.5ml 過夜培養液，接
原核表達之目的基因克隆
1. 了解實驗課題對目的蛋白的要求包括：目的蛋白分子量有多大，表達目的（是蛋白結晶、藥劑結合還是制備抗體，不同目的對蛋白要求不同）；是否要其可溶；是胞內表達還是分泌表達，是組成型表達還是誘導型表達；另外，還要了解蛋白表達后需要采用什么樣的方式進行純化，純化標簽有多大，蛋白純化后是否需要將標簽去除（即
DNA基因探針的克隆方法介紹
對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質，然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列，然后根據這一序列合成一套寡核苷酸探針。用此探針在DNA文庫中篩選，陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所
GeneCopoeia基因克隆技術相關研究
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。?基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DNA連接酶介
基因克隆的載體必要條件
⑴載體必須是復制子。⑵具有合適的篩選標記，便于重組子的篩選。⑶具備多克隆位點（MCS），便于外源基因插入。⑷自身分子量較小，拷貝數高。⑸在宿主細胞內穩定性高。
原核表達——基因克隆技術
原核表達可以用于檢測（1）發生在原核生物內的基因表達。（2）通過基因克隆技術，將外源目的基因，通過構建表達載體并導入表達菌株的方法，使其在特定原核生物或細胞內表達。實驗方法原理一個完整的表達系統通常包括配套的表達載體和表達菌株。如果是特殊的誘導表達還包括誘導劑，如果是融合表達還包括純化系統或者Tag
小鼠βactin基因的克隆表達（4）
實驗步驟：（1）誘導靶蛋白表達分別挑取對照菌和重組菌1~2個菌落，接入5ml含Amp（30μg/ml）的LB培養液，37℃振蕩培養過夜。取5ml過夜培養物接入500ml含Amp（30μg/ml）的LB培養液，37℃振蕩培養2h以上，至對數中期（A550=0.5~1.0）。向誘導管中加入IPTG使其濃
PCR技術應用基因克隆的應用
運用 PCR 技術、基因克隆和亞克隆比傳統的方法具有更大的優點。由于 PCR 可以對單拷貝的基因放大上百萬倍,產生微克(μg)級的特異 DNA 片段,從而可省略從基因組 DNA 中克隆某一特定基因片段所需要的 DNA的酶切、連接到載體 DNA 上、轉化、建立 DNA 文庫及基因的篩選、鑒定、亞克隆等
目的基因的亞克隆（subcloning）1
所謂亞克隆就是對已經獲得的目的片段進行重新，其目的在于對目的進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞的基本過程包括：(1)目的片段和載體的制備； (2)目的片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。一、試劑準備1．LB液體培養基：胰化蛋白胨（細菌培養用）10g，酵母提取物（細菌培養用）
基因克隆的基本步驟有哪些
基因克隆的基本步驟流程如下：一、目的DNA片段的獲得：DNA克隆的第一步是獲得包含目的基因在內的一群DNA分子，這些DNA分子或來自于目的生物基因組DNA或來自目的細胞mRNA逆轉錄合成的雙鏈 cDNA分子。由于基因組DNA較大，不利于克隆，因此有必要將其處理成適合克隆的DNA小片段，常用的方法有機
我國已完成400多個水稻基因轉基因克隆工作
我國的水稻研究已進入了一個全新的領域，目前華大基因農能平臺已經完成400多個水稻基因的轉基因克隆工作，依托華大基因強大的高通量測序技術，今后將進一步加快水稻轉基因育種研究工作。這是記者在6月29日結束的“水稻基因組學與農業應用研討會”上獲悉的消息。 作為世界上最早種植水稻的
體細胞克隆猴為何重要|克隆|基因編輯|神經科學新浪新聞
中國科學院神經科學研究所所長、中國科學院腦卓越中心主任蒲慕明向記者展示了這樣一幅漫畫——孫悟空拔根毫毛，“誕生”了無數小猴。他笑著說：“吳承恩真偉大，這么早就預言到體細胞克隆猴終將成功。” 拔根毫毛、化身千萬——今天，中國科學家讓神話變成了現實。這樣的成功，讓中國在非人靈長類動物體細胞克隆
克隆轉基因牛肉：“口味好營養高”
過生日誰沒見過，但為牛過生日見過的不多。7月10日，在為首批轉入大理石花紋狀肉質基因的克隆肉牛“萌萌”、“妞妞”舉辦的周歲生日會上，大家唱著、笑著，擊掌相慶。 “這不是普通的肉牛，這是國家轉基因重大專項子課題——‘優質高效轉基因肉牛新品種培育’去年夏天結出‘碩果’。”北京農學院動物科學技術
小麥雄性不育基因克隆成功
山東農業大學付道林教授領銜的科研團隊成功克隆出太谷核不育基因，標志著我國在太谷核不育小麥研究上取得重大突破，為將來實現小麥等作物的雜交制種創造了條件。近日，國際著名學術期刊《自然·通訊》以《小麥Ms2基因編碼的稀有蛋白導致禾本科植物的雄性不育》為題發表了該研究成果。 普通小麥屬于自花授粉作物，
我國科學家克隆小麥矮稈基因
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/5/500729.shtm近日，中國農業科學院作物科學研究所小麥基因資源發掘與利用創新團隊克隆了小麥矮稈基因GSK3，并揭示了該基因通過編碼蛋白激酶磷酸化小麥綠色革命蛋白Rht-B1b來降低株高的分子機制，為小
線蟲unc22突變基因的克隆
實驗概要本實驗介紹了線蟲unc-22突變基因的克隆實驗原理和操作步驟。實驗原理外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA 連接酶的作用下，有Mg2 ?、ATP存在的連接緩沖系統中，將載體分子與外源DNA分子進行連接。Taq ?DNA
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）3
（3）原核生物的基因組基本上是單倍體，而真核基因組是二倍體。（4）如前所述，細菌多數基因按功能相關成串排列，組成操縱元的基因表達調控的單元，共同開啟或關閉，轉錄出多順反子(polycistron)的mRNA；真核生物則是一個結構基因轉錄生成一條mRNA，即mRNA是單順反子(monocistron)
常用的植物目的基因克隆技術
1、通過已知基因產物的分析和鑒定這類技術主要通過生物化學和病理學研究分離鑒定有關基因的蛋白產物，并對蛋白質氨基酸順序進行分析，推斷出編碼該蛋白質的基因序列，然后通過抗體、寡聚核苷酸探針或PCR制備的探針對文庫進行篩選來分離目的基因。如植物抗病蟲基因工程中常用的蘇云金桿菌殺蟲晶體蛋白基因（Bt基因）、
酵母菌基因克隆實驗——互補法
實驗材料酵母菌實驗步驟1. ?用含LEU 2作為選擇標志的酵母菌DNA文庫轉化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培養，依據插入片段的大小，篩選2 000~20 000個Leu+轉化體。?2. ?影印平板轉化體，將其轉印到預熱的選擇性平板，并于37℃培養篩選互補溫感突變的表型。過夜培養之
克隆基因的表達（expression－of－cloned－gene）2
在雙鏈 DNA 分子中，只有一條鏈轉錄成 mRNA，這條鏈稱為有意義鏈(sense strand)，該基因的另一條鏈則稱反意義鏈(antisense strand)。在含有許多基因的 DNA 雙鏈中，每個基因的有意義鏈并不是在同一條 DNA 鏈上。也就是說，一條鏈上既具有某些基因的有意義鏈，
幾種基因克隆的常用方法介紹（一）
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最
目的基因片段的PCR擴增與克隆
1.PCR技術 PolymeraseChainReaction聚合酶鏈反應它是一種模擬天然DNA復制過程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四種dNTP的情況下，通過高溫變性（90℃－95℃，1－2min）,低溫退火（25℃－37℃，1－2min）,中溫延伸（60℃－75℃，90
PCR技術目的基因的直接克隆介紹
與常規的基因克隆方法相比，PCR的優點是快速，簡單，但是用PCR克隆目的基因的限制是必須知道側接靶序列的核苷酸序列，以制備引物。因而該法具有很大的局限性。 可直接利用具有平端的PCR產物進行克隆，但利用合適的引物，在待克隆的目的基因二側引入不同的限制性酶切點，則可將擴增之后的目的基因定向克隆到