1、細胞以1.5×105 /ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4%FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處于G0 期。 2、終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。 3、棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。 4、甲醇/醋酸固定10min。 5、經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。 6、5%正常兔血清封閉。 7、甲酰胺100℃,5min變性核酸。 8、冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。 9、按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。......閱讀全文
(1)白細胞功能檢查1)全血粒細胞天然免疫功能測定 [原理] 先制備癌細胞懸液,待測的新鮮枸櫞酸抗凝血,將此血漿加入癌細胞懸液中,再加入自身粒細胞,帶有C3b等補體分子的癌細胞可被數量眾多的粒細胞補體受體黏附結合形成花環狀,花環率的高低可作為