Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝膠對RNA進行分級離，通常Northern雜交所顯示的RNA條帶更為銳利。1）在滅菌的微理離心管內，混勻下列液體：6mol/L乙二醛 5.4μlDMSO 16.0μl0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0μl RNA（多達10μl） 5.4μl市售乙二醛通常為40％溶液（6mol/L）。 由于接觸空氣的后乙二醛易于氧化，所以使用前需通過混合床樹脂（Bio-Rad AG 501-X8 對乙三......閱讀全文
Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。?含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，
分子雜交技術Northern雜交的簡介
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝
分子雜交技術Northern雜交的操作步驟
(1)RNA經變性電泳完畢后,可立即將乙醛酰RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上。轉移方法與轉移DNA的方法相似。 (2)轉移完畢后 ,以6×SSC溶液于室溫浸泡此膜5分鐘,以除去瓊脂糖碎片。 (3)將該雜交膜夾于兩張濾紙中間,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小時。 (4) 用下列兩種溶液之一進行
Northern雜交
實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗
Northern雜交
Northern雜交1．在10~20 ml?預雜交液中68℃溫育膜2h。2．若使用雙鏈探針，在100℃下加熱32P標記的雙鏈DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。3．把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育12~16h。4．雜交后，將膜從塑料袋中取出，
Northern雜交
轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗膜以去除非特異結合的探針，
Northern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的
Northern雜交
實驗概要本實驗介紹了Northern雜交的基本流程。主要試劑液氮，TRIzol ?(Invitrogen)，DEPC水，氯仿，異丙醇，70%酒精，酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，水飽和酚(PH4.3)，無水乙醇，NaOAc，抽提緩沖液(0.02M ?NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
分子雜交技術Northern雜交的注意事項
(1)如果瓊脂糖濃度高于1%，或凝膠厚度大于0.5cm，或待分析的RNA大于2.5kb,需用0.05mol/LNaOH浸泡凝膠20分鐘,部分水解RNA并提高轉移效率。浸泡后用經DEPC處理的水淋洗凝膠,并用20×SSC浸泡凝膠45分鐘。然后再轉移到濾膜上。 (2)在步驟(3)的操作中，如果濾膜
Northern雜交技術的方法和步驟
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
Northern雜交試驗指導手冊（6）－Northern－印跡雜交
A． 探針準備DIG標記的RNA探針與DNA探針相比，顯示較強的雜交信號和較地的非特異性背景，因此，只要可能選用RNA探針可以比DNA探針獲得更好的雜交結果。如果必須使用DNA探針，建議使用高SDS雜交緩沖液或DIG Easy Hyb以減少背景。在正式雜交試驗之前，優化雜交探針濃度是避免顏色背景所必
OsAGAP的Northern雜交
實驗概要本實驗參照Sambrook等(1989)的方法進行轉膜，雜交。實驗步驟1. RNA樣品的電泳轉膜將適量的瓊脂糖溶于水，微波爐加熱使之完全溶解，并冷卻至60℃；將甲醛溶液、瓊脂糖水溶液、5X甲醛凝膠電泳緩沖液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝膠。將不同材料的上樣量調成一致，均為35ug，與樣
southern雜交與northern雜交的區別
研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上。
southern雜交與northern雜交的區別
研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上。
Northern雜交試驗指導手冊
Northern雜交試驗指導手冊DIG標記的Northern雜交試驗指導一、 RNA提取方法一、改良異硫氰酸胍提取法試劑及其配制異硫氰酸胍變性液：貯存液－在含484ml 水（經DEPC處理）, 17.6ml 0.75mol/L檸檬酸鈉（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入25
組織印跡的Northern雜交
組織印跡的Northern雜交1）硝酸纖維素膜或尼龍膜上的組織印跡1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層尼龍膜。2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上輕輕吸干或先用蒸餾水洗滌幾秒
Northern雜交分析操作步驟
【操作】1．RNA的提取見前。2．變性膠的制備：取瓊脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加熱熔化，冷卻至 60℃時加入5×甲醛凝膠電泳緩沖溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混勻、制膠。待膠凝固后，置于1×甲醛凝膠電泳緩沖溶液中預電泳5min。3．樣品制備 取總RNA4.5 ，加入5
Northern雜交步驟和過程
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
分子雜交——Northern基因檢測
實驗概要Northern雜交采用瓊脂糖凝膠電泳，將分子量大小不同的RNA分離開來，隨后將其原位轉移至固相支持物（如尼龍膜、硝酸纖維膜等）上，再用放射性（或非放射性）標記的DNA或RNA探針，依據其同源性進行雜交，最后進行放射自顯影（或化學顯影），以目標RNA所在位置表示其分子量的大小，而其顯影強度則
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交試驗指導手冊(3)
試驗程序1.在純凈工作臺上將5ml含AP的LB液體培養基加入到一10~15ml通氣良好的試管中，然后將前述經鑒定含有目的 DNA片斷的轉化細菌接種其中，37℃下振蕩培養過夜。2.取1.5ml培養物置于一微量離心管中，在4℃下12000rpm離心2min.，棄去上清液，使細菌沉淀盡可能干燥。3.將細菌
Northern雜交試驗指導手冊（3）
A． 載體選擇為了獲得能夠在體外轉錄RNA探針的DNA模板，其克隆載體必須帶有可供選擇的特異轉錄啟動子，同時，為了獲得理想的Northern雜交試驗結果，載體選擇帶有兩種不同類型而方向相反啟動子的載體，以便在RNA探針制備時同時得到兩條鏈的轉錄探針。常用的這類載體有：pGEM-3/pGEM-4 (
Northern雜交試驗指導手冊(1)
一、RNA提取方法一、改良異硫氰酸胍提取法試劑及其配制異硫氰酸胍變性液：貯存液－在含484ml 水（經DEPC處理）, 17.6ml 0.75mol/L檸檬酸鈉（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g異硫氰酸胍，加熱至60~65℃并持續攪拌使之充分溶解。貯存液室溫保存備
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子