提取分離mRNA分子試驗的操作步驟
1．將0.5-1.0g寡聚（dT）-纖維懸浮于0.1M的NaOH溶液中。 2．用DEPC處理的1ml注射器或適當的吸管，將寡聚（dT）-纖維素裝柱0.5-1ml，用3倍柱床體積的DEPC H2O洗柱。 3．使用1×上樣緩沖液洗柱，直至洗出液pH值小于8.0。 4．將RNA溶解于DEPC H2O中，在65℃中溫育10min左右，冷卻至室溫后加入等體2×上樣緩沖液，混勻后上柱，立即收集流出液。當RNA上樣液全部進入柱床后，再用1×上樣緩沖液洗柱，繼續收集流出液。 5．將所有流出液于65℃加熱5min，冷卻至室溫后再次上柱，收集流出液。 6．用5-10倍柱床體積的1×上樣緩沖液洗柱，每管1ml分部收集，OD260測定RNA含量。前部分收集管中流出液的OD260值很高，其內含物為無Poly(A）尾的RNA。后部分收集管中流出液的OD260值很低或無吸收。 7．用2-3倍柱容積的洗脫緩沖液洗脫Poly(A+)RNA，分部收......閱讀全文
酵母質粒提取離心法操作步驟
酵母質粒提取離心法操作步驟：1.接種5 mL含有酵母攜帶所需質粒的YDP培養液，將其振蕩培養在30℃16-24小時。2.取1-3ml酵母培養菌體(使用< 2×107細胞)，室溫下5000× g離心5 min。3.棄培養液，收集菌體，加入480μL Buffer SE和30μL Lyticase so
mRNA的分離與純化
[實驗原理]真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。這種結構為真核mRNA的提取，提供了極為方便的選擇性標志，寡聚（dT）纖維素或
mRNA的分離與純化
實驗概要mRNA的分離與純化實驗原理??真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A）表示。這種結構為真核mRNA的提取，提供了極為方便的選擇性
mRNA的分離與純化
真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。這種結構為真核mRNA的提取，提供了極為方便的選擇性標志，寡聚（dT）纖維素或寡聚（U）
簡述分子雜交儀的操作步驟
1.接通電源打開開關，進行參數設定。參數設定，接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，該行第一位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環到達所需的數字后按“移位”鍵到下一位數字修改最后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”鍵可選擇修改其他數據或回到正常顯示狀態。 2.達
mRNA的提取及純化實驗
磁珠法 親和柱層析法 親和柱層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 mRNA
mRNA的提取及純化實驗
實驗材料 mRNA試劑、試劑盒 mRNA分離試劑盒異丙醇NaAC儀器、耗材 儀器水浴離心機取液器分光光度計實驗步驟 一、生物素標記的Oligo（dT）探針與mRNA的煺火1. ?在DEPC處理過的1.5 ml Eppendof管中，加入0.2-1 mg 的總RNA和無RNase的水至終體積為0.5
植物組織mRNA的提取方法
實驗概要本實驗介紹了植物組織mRNA的提取方法。實驗原理由于mRNA末端含有多poly（A） ,當總RNA流徑oligo（dT）纖維素時，在高鹽緩沖液作用下，mRNA被特異的吸附在oligo（dT）纖維素柱上，在低鹽濃度或蒸餾水中，mRNA可被洗下，經過兩次oligo（dT）纖維素柱，可得到較純的m
外周血單個核細胞分離的操作步驟
1、取外周靜脈血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混勻。2、將分層液加入試管中，用量約為血量的1/2。用吸管沿管壁緩緩將血加入分層液面上。3、置于水平離心機離心，1500r/min，10min。可見絕大多數單個核細胞懸浮于血漿和分層液的界面，呈白膜狀。4、用尖吸管吸取界面的細胞層，置于另一試管中
mRNA提取注意事項
1．RNA的提取RNA的提取其實原理很簡單：通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉淀，洗滌，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。1．1 分離高質量RNA成功的cDNA合成來自高質量的RNA
mRNA提取注意事項
1．RNA的提取RNA的提取其實原理很簡單：通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉淀，洗滌，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。1．1 分離高質量RNA成功的cDNA合成來自高質量的RNA
全血基因組提取操作步驟
操作步驟（（２００ul全血））* 第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇! 1. 取200ul新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入1.5ml離心管。對如果全血起始量小于200μl，則用緩沖液BB補足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之間，則后續操作需要按照比例增
細胞質RNA提取實驗操作步驟
由于RNA的種類來源很多，因而提取制備方法各異，一般有苯酚法，去污劑法和鹽酸胍法，其中苯酚法實驗室最常用。組織勻漿后用苯酚處理離心，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法較好除去DNA和蛋白質，且獲得生物活性的RNA。實驗方法基本方案實驗材料RNA
試驗機的操作步驟
試驗機的操作步驟摘要 一、拆箱與安裝 1、拆開試驗機包裝箱上蓋板，取出隨機技術文件和附件。 2、拆下四周箱板，卸掉底板上固定拉力機的螺栓，取下拉力機。 3、去除各部的包裝捆扎物，擦凈油污和灰塵，將拉力機置放在平整穩固的工作臺面上。 二、試機 1、接通電源，打開電源開關，通電預熱30min
FYY系列分子雜交儀的操作步驟
1.接通電源打開開關，進行參數設定。參數設定，接通電源→按“選擇”鍵到相應的參數行→按“設定”鍵，該行第一位開始閃爍，進入修改狀態→按“置數”鍵，數字0~9循環到達所需的數字后按“移位”鍵到下一位數字修改最后修改完后，按“設定”鍵確認。按“選擇”鍵可選擇修改其他數據或回到正常顯示狀態。 2.達
分子雜交技術Northern雜交的操作步驟
(1)RNA經變性電泳完畢后,可立即將乙醛酰RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上。轉移方法與轉移DNA的方法相似。 (2)轉移完畢后 ,以6×SSC溶液于室溫浸泡此膜5分鐘,以除去瓊脂糖碎片。 (3)將該雜交膜夾于兩張濾紙中間,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小時。 (4) 用下列兩種溶液之一進行
分子雜交技術Southern雜交的操作步驟
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液處理凝膠,并輕微搖動: 500ml 0.2m
分子雜交儀的分類及操作步驟
分子雜交儀 1. 分子雜交儀的種類較多，根據實驗的需求，可以分為6大類： 1) 用于大容量的分子雜交儀。 2) 用于 Southern或者 Northern技術點雜交的雜交儀。 3) 用于小容量的核酸雜交儀。 4) 微孔板原位雜交儀。 5) 載玻片原位雜交和平板雜交儀。 6) We
植物RNA的分離（總RNA的分離和mRNA的分離）
1. 總RNA的分離總RNA分離的方法很多，常采用的是異硫氰酸胍和b-巰基乙醇這兩種RNase 抑制劑來抑制RNase的活性，同時，異硫氰酸胍與十二烷基肌氨酸鈉（sarcosyl）共同作用可以破壞核蛋白復合體，使RNA順利地解脫出來溶進緩沖液。由于RNA在堿性條件下不穩定，因而在整個提取過程中體
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順
分子標記—AFLP原理和操作步驟
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順
分子標記—AFLP原理和操作步驟
AFLP可用于：（1）構建遺傳連鎖圖譜；（2）利用AFLP快速鑒別與目的基因緊密連鎖的分子標記；（3）AFLP輔助的輪回選擇育種；（4）研究基因表達與調控；（5）分類和進化研究；（6）甲基化研究等。實驗方法原理AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行
外周血單個核細胞分離實驗的操作步驟
1、取外周靜脈血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混勻。 2、將分層液加入試管中，用量約為血量的1/2。用吸管沿管壁緩緩將血加入分層液面上。 3、置于水平離心機離心，1500r/min，10min。可見絕大多數單個核細胞懸浮于血漿和分層液的界面，呈白膜狀。 4、用尖吸管吸取界面的細胞層
浸取分離法的操作步驟介紹
浸取法分離可溶組分的步驟一般為： ①溶劑與固體物料密切接觸，使可溶組分轉入液相，成為浸出液。 ②浸出液與不溶固體（殘渣）的分離。 ③用溶劑洗滌殘渣，回收附著在殘渣上的可溶組分。 ④浸出液的提純與濃縮，取得可溶組分的產品。 ⑤從殘渣中回收有價值的溶劑。 leaching；solid-l
分子蒸餾技術運用于提取物的分離
?分子蒸餾技術運用較多的是醫藥、食品、香料等領域，但沒想到它對煙草的生產也起到了至關重要的作用。? ? 在煙草的采收和生產過程中，勢必會有一定量的廢次煙末是不能用的，如果直接舍棄的話不僅是一種浪費，也會給環境帶來嚴重污染。這就需要有一項技術能夠實現對廢次煙末的提取，使得材料得到充分利用。? ? 而這
小麥黃化苗總mRNA的提取
?[實驗原理]RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。本實驗以小麥為材料，采用異硫氰酸胍—苯酚—氯仿抽提法或CTAB法提取總RNA。異硫氰酸胍是高濃度變性劑，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使蛋白質與核酸分離，失活RNA酶，所以R
從臍靜脈分離干細胞操作步驟
從臍靜脈分離干細胞試劑和材料：培養基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；2.A；3.胰蛋白酶，0.05%，含EDTA；4.膠原酶A，0.1%用A配制；5.培養瓶；6.導管；實驗方法：在正常分娩后6
淋巴細胞分離液使用操作步驟
淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據血細胞的密度差異，通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。淋巴細胞分離液操作步驟是哪些？今天由重慶市華雅的小編給大家介紹下。 使用操作步驟： （1）
環己烷提取后測定瀝青煙的操作步驟
將采樣并恒重后的濾倚用100～120目尼龍篩布包裹(注意:濾筒不要剪碎),放入索氏提取器提取管中,高度要低手提取器虹吸部位。倒入適量環己烷使浸過提取器虹吸管,產生虹吸后再加入40ml左右,裝妥冷凝裝置,開啟電熱碗加熱,使提取器中環己烷液滴冷卻速度為0.5～1滴/s。待虹吸回流8～10次后,接收瓶中瀝