體內無細胞DNA的表達
對于一些由缺乏三種特定蛋白質的基因突變引起的疾病（如Leber先天性黑蒙和血友病），直接的想法是將能夠表達相關蛋白質的基因“播種”到體內，而不是“種”到基因組中，但在細胞質中自由表達。最典型的例子是幾種批準的病毒轉染基因療法（如FDA批準的用于治療遺傳性眼病的基因藥物“Luxturna”）。這種方法的優點是相對安全。畢竟，改變基因組往往是不可逆轉的，危險的偏離目標的后果加劇了（這就是為什么20世紀90年代末發生了許多死亡事件）。有兩個主要缺點：一是無細胞病毒DNA可能仍然插入到正常基因組中，并且這種插入不是局部的和隨機的；二是隨著細胞分裂而逐漸消耗。與基因組中DNA分裂的穩定復制不同，它的治療可能不會持久。......閱讀全文
體內無細胞DNA的表達
對于一些由缺乏三種特定蛋白質的基因突變引起的疾病（如Leber先天性黑蒙和血友病），直接的想法是將能夠表達相關蛋白質的基因“播種”到體內，而不是“種”到基因組中，但在細胞質中自由表達。最典型的例子是幾種批準的病毒轉染基因療法（如FDA批準的用于治療遺傳性眼病的基因藥物“Luxturna”）。這種方法
無細胞表達系統——難度蛋白表達的福音
1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河，這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此，體外蛋白表達開始為科學界所關注，不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差，使其未能得到進一步發展。 到80年代中期Sp
無細胞表達系統——難度蛋白表達的福音
1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河，這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此，體外蛋白表達開始為科學界所關注，不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差，使其未能得到進一步發展。到80年代中期Spirin等對其進
無細胞蛋白表達系統的選擇
圖1.? 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標準。
無細胞蛋白表達技術介紹
無細胞蛋白表達技術是指用含有蛋白合成必需的組分（核糖體，轉運RNA，氨酰合成酶，啟動/延伸/終止因子，三磷酸鳥苷，ATP，Mg2+和K+）的細胞裂解物在體外進行蛋白合成。與傳統的基于細菌或真核細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的
BioTechniques：無細胞表達究竟哪家強？
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而
BioTechniques：無細胞表達究竟哪家強？
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而
體內表達shRNA的設計
1.克隆到shRNA 表達載體中的shRNA 包括兩個短反向重復序列，中間由一莖環（loop）序列分隔的，組成發夾結構，由polⅢ啟動子控制。隨后在連上5-6個T作為RNA 聚合酶Ⅲ的轉錄終止子。2.兩個互補的寡核苷酸兩端須帶有限制性酶切位點。3.Stratagene發現29個寡核苷酸較之原先推薦的
體內表達shRNA（短發夾RNA）的設計
1.克隆到shRNA表達載體中的shRNA包括兩個短反向重復序列，中間由一莖環（loop）序列分隔的，組成發夾結構，由polⅢ啟動子控制。隨后在連上5-6個T作為RNA聚合酶Ⅲ的轉錄終止子。?2.兩個互補的寡核苷酸兩端須帶有限制性酶切位點。?3.Stratagene發現29個寡核苷酸較之原先推薦的2
生物體內控制基因表達的機制
生物體內控制基因表達的機制。基因表達的主要過程是基因的轉錄和信使核糖核酸（mRNA）的翻譯。基因調控主要發生在3個水平上，即：①DNA修飾水平、RNA轉錄的調控、和mRNA翻譯過程的控制；②微生物通過基因調控可以改變代謝方式以適應環境的變化，這類基因調控一般是短暫的和可逆的；③多細胞生物的基因調控是
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（三）
細胞混合結果在本次實驗中，我們在一個96孔板里混合了多種細胞，保證每個孔大約50,000個細胞。因此，如果是1:1混合，那么每種細胞會有25,000個。如果是1:1:1混合，那么每種細胞將有16,700個。實驗板分別用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的優化結果)和550/588nm(D
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（一）
簡介在過去的五年中，熒光蛋白在監測體內生物學研究中，起到越來越重要的作用。源于維多利亞多管發光水母中的綠色熒光蛋白(GFP)是最早被我們應用的熒光蛋白，但是隨著時間的推移，現在我們可以使用的熒光蛋白種類也越加豐富，包括加強型的變異GFP蛋白、從其他種類水母中發現的熒光蛋白和珊瑚礁蛋白。它們都可以在眾
利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達（二）
結果波長優化用GeminiEM對DsRed進行波長掃描，以此舉例如何進行波長優化。為了檢測最大激發波長，我們首先固定發射波長為600nm，然后對發射波長進行掃描。掃描結果顯示最大激發波長為556nm(圖1)。同樣為了檢測最大發射波長，我們固定激發波長為535nm，然后掃描發射波長，從而得到584nm
流式細胞計量術（DNA含量）實驗_非固定細胞的無洗染色
實驗材料細胞試劑、試劑盒蛋白酶NST-DAPI 緩沖液MFM檸檬酸緩沖液DNA 染色 裂解溶液儀器、耗材尼龍篩實驗步驟一、組織培養細胞的染色1. 通過對懸浮培養中的細胞傾析或對單層培養的細胞蛋白酶消化來收獲細胞。計數細胞，800 g 慢速離心 3 分鐘沉淀細胞。2. 細胞染色。3. 在 NST-DA
無創DNA檢測的“創口”：真能保證“無創”嗎
近日，一篇《華大癌變》的文章在微信朋友圈流傳，讓無創DNA產前檢測技術（NIPT）再次進入公眾視野。低風險、高篩查率，這項讓醫療機構、商業公司乃至患者“推崇”的新技術，卻依然無法避免唐氏綜合征患兒的誕生。 由此，曾經“包打天下”的產前檢測技術遭到質疑：“無創”的DNA檢測真的能保證“無創”嗎？
無細胞DNA檢測－檢測心臟移植排斥反應的新方法
目前，斯坦福大學的研究人員設計出一種無創方法，能夠比以前更早地檢測到心臟移植的排斥反應（早數周或數月）。這種方法是通過檢測受者血液中越來越多的供體捐贈者DNA數量，不需要去除任何的心臟組織。 霍華德休斯醫學研究所的生物工程與應用物理學教授Stephen Quake博士指出：“這種檢測
研究實現活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像
近期，中國科學院合肥物質科學研究院智能機械研究所智能微納器件研究室研究員張忠平和王振洋領導的團隊在生物體核酸結構的同步原位影像分析方面取得新進展，合成了一種具有高效生物膜穿透能力的陽離子碳量子點，實現了對活細胞及線蟲體內DNA和RNA的同步熒光成像。相關研究成果發表在國際化學期刊《德國應用化學》
用DNA芯片技術檢測基因的表達
一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法，一是在片合成法，另一種方法是點樣法。在片合成法是基于組合化學的合成原理,它通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯位點和次序。在片合成法制備DNA芯片的關鍵是高空間分辨率的模板定位技術和固相合成化學技術的精巧結合。目前，已有多種模板技術用于基因
用DNA－芯片技術檢測基因的表達
實驗概要生物芯片是將生命科學研究中所涉及的不連續的分析過程(如樣品制備、化學反應和分析檢測)，利用微電子、微機械、化學、物理技術、計算機技術在固體芯片表面構建的微流體分析單元和系統，使之連續化、集成化、微型化。生物芯片技術主要包括四個基本要點：芯片方陣的構建、樣品的制備、生物分子反應和信號的檢測。1
用DNA芯片技術檢測基因的表達
一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法，一是在片合成法，另一種方法是點樣法。在片合成法是基于組合化學的合成原理,它通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯位點和次序。在片合成法制備DNA芯片的關鍵是高空間分辨率的模板定位技術和固相合成化學技術的精巧結合。目前，已有多種模板技術用于基因
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達4
（3）CHO細胞穩定表達系統：動物細胞瞬時表達系統中外源基因沒有穩定地整合到宿主細胞染色體中，一染色體外DNA的形式存在。因而只能瞬時表達。要使外源基因在宿主細胞中高效、穩定地表達，必須建立一個穩定表達系統，包括適宜的表達載體、有效的基因轉染、標記基因和目標基因的選擇與共擴增、受體適當的受體細胞和培
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達2
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達3
（6）遺傳標記： 從成千上萬個哺乳細胞中，檢測出極少數的含DNA重組體的轉染細胞，并鑒定已導入外源DNA是哺乳動物細胞基因表達系統的一個關鍵內容。因此，在真核生物表達載體上必須附有標記基因，才能進行篩選。常用的標記基因有：胸苷激酶基因（thymidine kinase，TK）、二氫葉酸還原酶
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達1
通過外源DNA的重組、克隆、以及鑒定，可以獲得所需的特異DNA克隆。外源克隆基因在某種表達載體及適宜的宿主細胞中可表達為相應的蛋白質，這就組成了外源基因的蛋白表達系統。表達后的蛋白質必須具有原來的生物學活性，這是基于正確的基因轉錄、轉錄后加工、mRNA翻譯及翻譯后修飾，同時與表達載體的結構和表達體系
真核細胞表達系統的類型與常用真核細胞表達載體
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
嗅鞘細胞的細胞表達介紹
OECs表達膠質纖維酸性蛋白（GFAP），在血管壁形成終足，以及參與形成膠質界膜，此界膜大致勾勒出了嗅神經軸突與嗅球顆粒層嗅小球的交界線，OECs在免疫細胞化學超微結構特征以及與軸突的功能聯系方面與星形膠質細胞存在明顯不同。OECs對神經生長因子受體（P75NGR）Laminin細胞粘附分子L1
CHO細胞表達系統與酵母細胞表達系統比較
?CHO細胞表達系統與畢赤酵母表達系統是當前發展前景看好的兩個表達系統，為了能夠更加直觀地對兩個表達系統有一定的認識，特意在此篇中對兩個表達系統作一定的比較，從而能夠更進一步的對兩個表達系統有更深的了解1．CHO細胞表達系統? ?? ??（1）優點? ?? ? CHO細胞屬于成纖維細胞，既可以貼壁生
分析體內DNA復制和體外PCR擴增DNA有何異同點
相同點： 都是半保留復制，都會經歷DNA雙鏈的解開（變性），寡聚核酸與單鏈DNA的結合（退火），以及DNA聚合酶開始合成DNA（延伸）的三個過程。不同點：1、連續性不同體內DNA復制半不連續復制，體外PCR連續復制，不會產生岡崎片斷。2、酶不同PCR技術形成DNA時用耐熱DNA聚合酶，而DNA復制用
分析體內DNA復制和體外PCR擴增DNA有何異同點
一、相同點1、體內DNA復制和體外PCR擴增DNA都是DNA的復制過程。2、體內DNA復制和體外PCR擴增DNA都需要酶促合合成過程。二、不同點1、條件不同體內DNA復制：以DNA雙鏈、細胞分裂環境為條件。體外PCR擴增DNA：以模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件。2、過程不同體內DNA復制
三醫院試點“無創DNA檢測”
抽取母體少量血漿，就能檢測出胎兒是否存在三種染色體異常，判斷胎兒是否智力發育遲緩、四肢是否畸形。 2月4日，記者從安醫大一附院獲悉，在近日經國家衛計委審批獲準開展高通量基因測序產前篩查與診斷（即俗稱的“無創DNA”檢測）臨床試點的109家醫療機構，我省有3家醫院“榜上有名”。 “高通量基因測序