關于雜交瘤技術的基本介紹
雜交瘤技術（hybridoma technique） 即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術。它是在體細胞融合技術基礎上發展起來的。克勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）（1975）證明，骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合，形成能分泌針對該抗原的均質的高特異性的抗體——單克隆抗體，這種技術通稱為雜交瘤技術。這一技術的基礎是細胞融合技術。骨髓瘤細胞在體外可以連續傳代，而脾細胞是終末細胞，不能在體外繁殖。如將小鼠的骨髓瘤細胞與分泌某種抗體或因子的淋巴細胞融合，則融合細胞既具有腫瘤細胞無限繁殖的特性，又具有淋巴細胞能分泌特異性抗體或因子的能力，同時也克服了免疫淋巴細胞不能在體外繁殖的缺點，融合的細胞稱為淋巴細胞雜交瘤。......閱讀全文
關于雜交瘤技術的基本介紹
雜交瘤技術（hybridoma technique） 即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術。它是在體細胞融合技術基礎上發展起來的。克勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）（1975）證明，骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合，形成能分泌針對該抗原的均質的高特異性的抗體——單克隆抗體，
關于雜交瘤技術的應用介紹
單克隆抗體不僅在生物學和免疫學基礎研究中具有重要的價值，而且在實踐中的應用范圍亦極為廣泛。在醫學中，單克隆抗體已用于疾病的診斷，其優點是診斷準確，無交叉反應。例如，單克隆抗體診斷乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒，則很少發生假陰性的漏診。單克隆抗體還可作為治療疾病的藥物載體。單克隆抗體對靶組織有專一親
雜交瘤細胞的基本介紹
雜交瘤抗體技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠細胞與小鼠骨髓瘤細胞。脾淋巴細胞的主要特征是它的抗體分泌功能和能夠在選擇培養基中生長，小鼠骨髓瘤細胞則可在培養條件下無限分裂、增殖，即所謂永生性。在選擇培養基的作用下，只有b細胞與骨髓瘤細胞融合的
雜交瘤技術的基本原理
雜交瘤抗體技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠B細胞和小鼠骨髓瘤細胞。脾淋巴細胞的主要特征是它的抗體分泌功能和能夠在選擇培養基中生長（選擇原理見后），小鼠骨髓瘤細胞則可在培養條件下無限分裂、增殖，即所謂永生性。在選擇培養基的作用下，只有B細胞與骨
雜交瘤技術的基本原理
雜交瘤抗體技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠B細胞和小鼠骨髓瘤細胞。脾淋巴細胞的主要特征是它的抗體分泌功能和能夠在選擇培養基中生長（選擇原理見后），小鼠骨髓瘤細胞則可在培養條件下無限分裂、增殖，即所謂永生性。在選擇培養基的作用下，只有B細胞與骨
雜交瘤技術的基本原理
雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細胞（B淋巴細胞）的主要特征是它的抗體分泌功能，但不能在體外連續培養，小鼠骨髓瘤細胞則可在培養條件下無限分裂、增殖，即具有所謂永生性。在選擇培養基的作用下，
概述雜交瘤技術的基本原理
雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細胞（B淋巴細胞）的主要特征是它的抗體分泌功能，但不能在體外連續培養，小鼠骨髓瘤細胞則可在培養條件下無限分裂、增殖，即具有所謂永生性。在選擇培養基的作用
雜交瘤技術基本程序與方法1
一、雜交瘤技術的誕生?淋巴細胞雜交瘤技術的誕生是幾十年來免疫學在理論和技術兩方面發展的必然結果，抗體生成的克隆選擇學說、抗體基因的研究、抗體結構與生物合成以及其多樣性產生機制的揭示等，為雜交瘤技術提供了必要理論基礎，同時，骨髓瘤細胞的體外培養、細胞融合與雜交細胞的篩選等提供了技術貯備。1975年8月
雜交瘤技術基本程序與方法2
2、細胞融合?（1）主要試劑的配制?①細胞培養基雜交瘤技術中使用的細胞培養基主要有RPMI-1640或DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）兩種基礎培養基，具體配制方法按廠家規定的程序，配好后過濾除菌（0.22um），分裝，4℃保存。??不完全RPMI-1640培
雜交瘤技術基本程序與方法3
⑥7.5% NaHCO3溶液?稱取分析純NaHCO3 7.5g，溶于100ml超純水或四蒸水中，過濾除菌，分裝小瓶（4-5ml/瓶），蓋緊瓶塞，4℃保存。?⑦HEPES溶液（1mol/L）?稱取23.83g HEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N，-2-ethanesu
雜交瘤技術基本程序與方法4
4）飼養細胞（Feeder cells）的制備?在細胞融合后選擇性培養過程中，由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其他活細胞使之繁殖，這種被加入的活細胞稱為飼養細胞。飼養細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了，一般認為它們可能釋放非種屬特異性的生長
雜交瘤技術基本程序與方法5
下面簡要介紹幾種常用的抗體檢測方法?（1）免疫酶技術?免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性和酶對底物顯色反應的高效催化作用有機結合而成的免疫學技術。由于它特異性強，靈敏度高，現已廣泛用于篩選和鑒定單抗。?①器材和試劑?a、包被緩沖液：?碳酸鹽緩沖液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mo
雜交瘤技術基本程序與方法6
③全菌抗原的ELISAS?a、新鮮培養的細菌用蒸餾水或PBS懸浮，并調整細菌濃度至1×108個/ml。必須指出，對于人畜共患病病原體需注意安全操作，最好是滅活處理。?b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（0.1mol/L NaHCO3 95ml+25%戊二醛溶液5ml），37℃作用2小時，蒸餾水洗
雜交瘤技術基本程序與方法7
?⑦Dot-ELISA試驗?免疫斑點試驗（Dot-ELISA）是以硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜為固相載體，進行抗原抗體反應的免疫檢測手段。該法采用不溶性底物（如DAB，或4-氯萘酚或AgNO3等），其與相應標記物（HRP、AP、膠體金）作用形成不溶性產物，呈現斑點狀著色，從而易于判定結果。根據所用的標
雜交瘤技術基本程序與方法8
（3）間接血凝試驗?間接血凝試驗又稱被動血凝試驗（PHA），是目前應用較廣的檢測方法之一。本試驗是以包被可溶性抗原的紅細胞作為指示系統，當被檢抗體與包被在紅細胞上的抗原產生特異性反應時，導致紅細胞呈凝集現象。可見，該法具有靈敏、快速、容易操作和無需昂貴儀器等優點，而且經改用醛化紅細胞以后，克服原來重
雜交瘤技術基本程序與方法9
?（1） 有限稀釋法?材料：?a、96孔細胞培養板等；?b、HT培養基；?c、活力強的雜交瘤細胞；?d、小鼠腹腔細胞。?方法：?a、制備小鼠腹腔細胞。同“細胞融合”一節中的方法。?b、制備待克隆的雜交瘤細胞懸液，用含20%血清的HT培養基稀釋至每毫升含2.5、15和50個細胞3中不同的稀釋度。?c、
雜交瘤技術基本程序與方法10
（2）雜交瘤細胞的復蘇?雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞或其他細胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數年至數十年。復蘇時融解細胞速度要快，使之迅速通過最易受損的 -5℃?0℃，以防細胞內形成冰晶引起細胞死亡。?通常情況下，凍存時細胞數量多，生長狀態好的雜交瘤細胞系以及其他細胞的復蘇可采用以下方法，這也是各個
雜交瘤技術基本程序與方法11
（A）免疫擴散法?這種方法簡便、準確，最常用。被檢的McAb樣品通常為雜交瘤細胞培養上清液，由于其中單抗的濃度較低，應先將其濃縮10-20倍左右再檢測。小鼠腹水中的單抗濃度雖很高，但也含有小鼠本身的各類Ig，它們也會與相應抗血清發生反應，使鑒定結果出現混亂，即使將腹水稀釋10-20倍后再檢測也不能完
關于雜交瘤技術細胞的選擇與融合
建立雜交瘤技術的目的是制備對抗原特異的單克隆抗體，所以融合細胞一方必須選擇經過抗原免疫的B細胞，通常來源于免疫動物的脾細胞。脾是B細胞聚集的重要場所，無論以何種免疫方式刺激，脾內皆會出現明顯的抗體應答反應。融合細胞的另一方則是為了保持細胞融合后細胞的不斷增殖，只有腫瘤細胞才具備這種特性。·選擇同
雜交瘤技術制備催化抗體的方法介紹
經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖成母體的同
細胞雜交瘤技術
細胞雜交瘤技術?雜交瘤技術?雜交瘤技術是1975年Kohler和Milstein用于制備單克隆抗體而創建的一項重要技術，被譽為“免疫學上的一次革命”。此技術被廣泛用于各種單克隆抗體的制備。抗體是由B淋巴細胞分泌的，一個B淋巴細胞只能分泌一種抗體。把B淋巴細胞和骨髓細胞融合，即可形成在體外長期存活并分
雜交瘤技術原理
單克隆是指利用在細胞融合基礎上的B細胞雜交瘤技術。??????? 雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細胞（B淋巴細胞）的主要特征是它的抗體分泌功能，但不能在體外連續培養，小鼠骨髓瘤細胞則可在
關于超濾技術的基本介紹
超濾（ultrafiltration，UF）技術是介于微濾和納濾之間的一種膜分離技術，平均孔徑為3~100 nm，具有凈化、分離、濃縮溶液等功能。其截留機理主要包括膜的篩分作用和靜電作用，過濾介質為超濾膜，在兩側壓力差的驅動下，只有低分子量溶質和水能夠通過超濾膜，從而達到凈化、分離、濃縮的目的。
抗體酶的雜交瘤技術制備法介紹
經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖成母體的同
雜交瘤細胞技術分析
雜交瘤細胞技術分析克隆化的細胞可以在體外進行大量培養，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養液。而體內雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能
關于雜交瘤細胞飼細胞的制備方法介紹
小鼠腹腔細胞制備方法： 1．引頸處死小鼠，用酒精消毒表體。 2．切開腹部皮膚剝向兩側，暴露出腹壁。 3．用無菌 7 號針頭注射器，吸取 3ml 無血清培養液。 4．用小鑷夾起腹壁，注入 3ml 無血清培養液，用手反復輕輕揉腹壁，再反復抽吸 3~5 次。 5．收集末次吸得的細胞，注入 5
關于雜交瘤細胞的簡介
雜交瘤細胞（hybridoma）是一種在制備單克隆抗體過程中，用骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合而成的細胞。雜交瘤細胞一般通過瘤細胞培養來制備。 雜交瘤技術是指兩個或兩個以上細胞合并形成一個細胞的現象。他可使兩個不同來源的細胞核在同一細胞中表達功能。
簡述雜交瘤技術的產生背景
科勒和米爾斯廷于1975年發明了淋巴細胞雜交瘤技術，終于使制備純一抗體的難題獲得了解決。雜交瘤技術是由細胞融合技術發展而來。抗體是由免疫的B淋巴細胞分泌的球蛋白，各個淋巴細胞分泌的抗體各不相同。因而，要獲得一種純一的抗體只有從一個B淋巴細胞產生的細胞群制取。然而，B淋巴細胞在體外不能長期存活，分
單克隆抗體雜交瘤細胞篩選技術介紹
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
關于層析分離技術的基本介紹
各種不同的層析方法都涉及共同的基本特點:有一個固定相和流動相，當蛋白質混合溶液(流動相)通過裝有珠狀或基質材料的管或柱(固定相)時，由于混合物中各組份在物理化學性質(如吸引力、溶解度、分子的形狀與大小、分子的電荷性與親和力)等方面的差異使各組分在兩相間進行反復多次的分配而得以分開。流動相的流動取