關于體外轉錄的轉錄條件介紹
轉錄模板必須滿足： 1. 在基因組全長克隆過程中，在正向引物5‘末端添加T7啟動子序列； 2. 以T7啟動子作為體外轉錄啟動子，在啟動子后面靶位序列連續帶有3個G,轉錄效率最 高； 3. 在正向引物5/端添加一個帽子G,有利于提高體外轉錄RNA分子的侵染活性。......閱讀全文
關于體外轉錄的轉錄條件介紹
轉錄模板必須滿足： 1. 在基因組全長克隆過程中，在正向引物5‘末端添加T7啟動子序列； 2. 以T7啟動子作為體外轉錄啟動子，在啟動子后面靶位序列連續帶有3個G,轉錄效率最 高； 3. 在正向引物5/端添加一個帽子G,有利于提高體外轉錄RNA分子的侵染活性。
關于體外轉錄的基本介紹
轉錄通常發生在生物體內，如果我們將含有RNA轉錄酶、NTP等條件，在體外無細胞系統中，用DNA作為模板，模仿體內轉錄過程生成RNA，這樣的技術則能夠控制轉錄的基因、轉錄的過程和轉錄后RNA的用途，該技術被稱為體外轉錄。
關于體外轉錄的操作步驟介紹
1. 提取cDNA質粒； 2. 線性化質粒：（利用單一的酶切位點線性化有利于轉錄） 3. 純化質粒：（盡量避免RNase污染） ① 加等體積的Tris-苯酚：氯仿（1:1）到100μL限制內切酶消化體系，渦旋振蕩20s, 13000g離心5min； ②上清轉移，加入2倍體積無水乙醇和1/10
體外轉錄
·?????????In Vitro RNA Transcription?(Promega)For?in vitro?preparation single-stranded RNA probes or microgram quantities of defined RNA transcripts f
體外轉錄合成單鏈RNA探針:體外轉錄法
體外轉錄法l????????體外轉錄合成單鏈RNA探針1.??????用適當的限制酶消化超螺旋質粒DNA制備5 pmol的線性模板DNA。取一小份消化的DNA（100ng）進行瓊脂糖凝膠電泳分析。如有必要，再補加限制性酶進行溫育，直至不再殘存痕量的未消化DNA。2.??????如必須用產生3’突出端
關于轉錄因子的轉錄抑制區的介紹
也是轉錄因子調控表達的重要位點，但是對其作用機理研究尚不深入。可能的作用方式有三種：1）與啟動子的調控位點結合，阻止其它轉錄因子的結合；2）作用于其它轉錄因子，抑制其它因子的作用；3）通過改變DNA的高級結構阻止轉錄的發生。 轉錄因子必須在核內作用，才能起到調控表達的目的。因此，轉錄因子上的核
RNA干擾的體外轉錄的相關介紹
以DNA Oligo為模版，通過體外轉錄合成siRNAs，成本相對化學合成法而言比較低，而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。不足之處是實驗的規模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs，但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相
關于轉錄的特點介紹
轉錄時，細胞通過堿基互補的原則來生成一條帶有互補堿基的mRNA，通過它攜帶密碼子到核糖體中可以實現蛋白質的合成。與DNA的復制相比，轉錄有很多相同或相似之處，亦有其自己的特點。 轉錄中，一個基因會被讀取并復制為mRNA。就是說，以特定的DNA片段作為模板，以DNA依賴的RNA聚合酶作為催化劑，
體外轉錄siRNAs的技術特點
以DNA Oligo為模版，通過體外轉錄合成siRNAs，成本相對化學合成法而言比較低，而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。不足之處是實驗的規模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs，但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相當的
體外轉錄的概念和過程
轉錄通常發生在生物體內，如果我們將含有RNA轉錄酶、NTP等條件，在體外無細胞系統中，用DNA作為模板，模仿體內轉錄過程生成RNA，這樣的技術則能夠控制轉錄的基因、轉錄的過程和轉錄后RNA的用途，該技術被稱為體外轉錄。
siRNA的體外轉錄合成方法的介紹
以DNA Oligo為模版，通過體外轉錄合成siRNAs，成本相對化學合成法而言比較低，而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。不足之處是實驗的規模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs，但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相當的
轉錄模板的必要條件
轉錄模板必須滿足：1. 在基因組全長克隆過程中，在正向引物5‘末端添加T7啟動子序列；2. 以T7啟動子作為體外轉錄啟動子，在啟動子后面靶位序列連續帶有3個G,轉錄效率最 高；3. 在正向引物5/端添加一個帽子G,有利于提高體外轉錄RNA分子的侵染活性。
關于轉錄酶的特點介紹
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點： ①以DNA為模板； ②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸； ③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應； ④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸； ⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
關于基因轉錄的基本介紹
基因轉錄是在細胞核和細胞質內進行的。它是指以DNA的一條鏈為模板，按照堿基互補配對原則，在RNA聚合酶作用下合成RNA的過程。基因轉錄有正調控和負調控之分。 如細菌基因的負調控機制是當一種阻遏蛋白(repressor protein)結合在受調控的基因上時，基因不表達；而從靶基因上去除阻遏蛋白
關于轉錄的調節控制介紹
轉錄的調節控制是基因表達調節控制中的一個重要環節。促進基因轉錄叫正調節，抑制基因轉錄叫負調節。 在原核生物方面1961年F.雅各布和J.莫諾提出的操縱子學說，得到許多人的驗證和充實。操縱子通常的調控方式為： ①誘導和阻遏作用； ②環腺苷酸（CAMP）和降解物活化蛋白（CAP）的調節作用；
關于DNA解旋酶轉錄的介紹
1、 不需要： DNA復制需要解旋酶，可是與DNA復制相類似的轉錄過程并不需要解旋酶，基因的轉錄是由RNA聚合酶催化進行的。基因的上游具有結合RNA聚合酶的區域，叫做啟動子。啟動子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特異性結合的位點，決定了基因轉錄的起始位點。RNA聚合酶與啟動子結合后
關于轉錄控制的基本介紹
在分子生物學和遺傳學中，轉錄調節是指細胞調控DNA轉化為RNA(轉錄)的手段，從而使基因活動得到編排。 轉錄因子是一種與特定DNA序列結合的蛋白質，以調節特定基因的表達。轉錄因子的力量在于它們能夠激活或抑制下游目標基因的廣泛的序列。這些轉錄因子以一種組合方式工作的事實意味著，只有一小部分生物體
體外轉錄合成siRNAs的方法特點
以DNA Oligo為模版，通過體外轉錄合成siRNAs，成本相對化學合成法而言比較低，而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。不足之處是實驗的規模受到限制，雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs，但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比，還是需要占用研究人員相當的
轉錄因子的轉錄調控區的介紹
同一家族的轉錄因子之間的區別主要在轉錄調控區。 轉錄調控區包括轉錄激活區（transcription activation domain）和轉錄抑制區（transcription repression domain）二種。近年來，轉錄的激活區被深入研究。它們一般包含DNA結合區之外的30-10
關于啟動子的轉錄單元和轉錄起點的介紹
一、轉錄單元 轉錄單元（transcription unit) 是一段從啟動子開始至終止子（terminator）結束的DNA序列,RNA聚合酶從轉錄起點開始沿著模板前進,直到終止子為止,轉錄出一條RNA鏈。在細胞中,一個轉錄單元可以是一個基因,也可以是幾個基因。 二、轉錄起點 轉錄起點是
關于通用轉錄因子的成員介紹
1、TFⅡD 該通用轉錄因子識別TATA元件（大約在轉錄起始位點上游30個堿基對處）。像很多通用轉錄因子一樣，TFⅡD實際上是一個多亞基復合體。TFⅡD中與TATA序列結合的成分稱為TBP（TATA binding protein）。此復合體中的其他亞基稱為TAF，即TBP關聯因子（TBP-a
關于反轉錄酶的相關介紹
反轉錄酶(reverse transcriptase,也可寫成逆轉錄酶) 又稱為依賴RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中發現了一種特殊的DNA 聚合酶，該酶以RNA 為模板，以dNTP 為底物，tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 為引物，在tRNA 3'
關于反轉錄的簡要過程介紹
人為地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之為模板人工合成DNA。 反轉錄酶的作用是以dNTP為底物，以RNA為模板，tRNA(主要是色氨酸tRNA)為引物，在tRNA3′桹H末端上，按5′→3′方向，合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補DNA(complement
關于轉錄的基本信息介紹
轉錄（Transcription）是遺傳信息從DNA流向RNA的過程。即以雙鏈DNA中的確定的一條鏈（模板鏈用于轉錄，編碼鏈不用于轉錄）為模板，以A、U、C、G四種核糖核苷酸為原料，在RNA聚合酶催化下合成RNA的過程。作為蛋白質生物合成的第一步，進行轉錄時，一個基因會被讀取并被復制為mRNA，
關于轉錄酶的參與過程介紹
該酶需要四種核糖核苷酸三磷酸（NTP：ATP、GTP、CTP、UTP）作為RNA聚合酶的底物，DNA為模板，二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為：（NMP）n+NTP→（NMP）n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3'，第一個核苷酸帶有3個磷酸基。
關于mRNA轉錄加工的基本介紹
1、加帽 即在mRNA的5'-端加上m7GTP的結構。此過程發生在細胞核內，即對HnRNA進行加帽。加工過程首先是在磷酸酶的作用下，將5'-端的磷酸基水解，然后再加上鳥苷三磷酸，形成GpppN的結構，再對G進行甲基化。 2、加尾 這一過程也是細胞核內完成，首先由核酸外切酶切
關于tRNA轉錄加工的基本介紹
主要加工方式是切斷和堿基修飾。真核生物tRNA前體一般無生物學特性，需要進行加工修飾。加工過程包括： （1）剪切和拼接 tRNA前體在tRNA剪切酶作用下，切成一定大小的分子。大腸桿菌RnaseP特異切割tRNA前體5′旁側序列，3′－核酸內切酶如RnaseF可將tRNA前體3′端一段序列切
關于反轉錄病毒的基本介紹
逆轉錄病毒（Retrovirus）,又稱反轉錄病毒,屬于RNA病毒中的一類,它們的遺傳信息不是儲存在脫氧核糖核酸（DNA）,而是儲存在核糖核酸（RNA）上。逆轉錄病毒基因組為二倍體,兩條相同的單股正鏈RNA,其兩端為長末端重復序列（LTR）,內含有較強啟動子和增強子,對病毒DNA的轉錄調控具有重
體外轉錄合成單鏈RNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備特異性的單鏈 RNA 探針不僅比 DNA 探針更容易，在雜交反應中一般也比具相同比活性的 DNA 探針產生更強的信號，這可能是由于含有 RNA 的雜合鏈固有的更高穩定性的緣故（Casey and Davidson 197
體外轉錄合成單鏈RNA探針
實驗方法原理?制備特異性的單鏈 RNA 探針不僅比 DNA 探針更容易，在雜交反應中一般也比具相同比活性的 DNA 探針產生更強的信號，這可能是由于含有 RNA 的雜合鏈固有的更高穩定性的緣故（Casey and Davidson 1977)。雖然 DNA 探針仍普遍地應用于 Norther