轉染的技術特點和分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。 從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣義的轉化。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。......閱讀全文
轉染的技術特點和分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。?從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為
轉染的技術特點和分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。???從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣
轉染的概念和常規轉染技術分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。
常規轉染技術的分類和選擇
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
常規轉染技術的分類和原理差異
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
常規轉染技術分類
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
物理轉染法的主要類型和技術特點
包括:①顯微注射②電穿孔③基因槍等,顯微注射雖然費力,但是非常有效的將核酸導入細胞或細胞核的方法。這種方法常用來制備轉基因動物,但卻不適用于需要大量轉染細胞的研究。電穿孔法常用來轉染如植物原生質體這樣的常規方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈沖的強度
人工脂質體法轉染的技術特點和應用
人工脂質體法采用陽離子脂質體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質。此外,脂質體體外轉染同時適用于瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA轉入動物和人的體內用于基因治療。Li
轉染的分類
包括:1.DEAE-葡聚糖法DEAE-葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地應用于瞬時表達的研究,但用于穩定轉染卻不是十分可靠。2.磷酸鈣法磷酸鈣法是磷酸鈣共沉淀轉染法,因為試劑易取得,價格便宜
區帶電泳的技術特點和分類
是在一定的支持物上,于均一的載體電解質中,將樣品加在中部位置,在電場作用下,樣品中帶正或負電荷的離子分別向負或正極以不同速度移動,分離成一個個彼此隔開的區帶。區帶電泳按支持物的物理性狀不同,又可分為紙和其他纖維膜電泳、粉末電泳、凝膠電泳與絲線電泳。1.按支持物的物理性狀不同,區帶電泳可分為:(1)濾
基因轉染技術的轉染方法介紹
1、轉染 轉染指通過生化或者物理方法將目的基因導入真核細胞中 。 2、感染 感染指通過病毒介導,用基因組中攜帶有克隆目的片斷的病毒來感染靶細胞。
簡述基因轉染技術的表達和檢測
在篩選出轉化子后還需要鑒定轉導細胞中外源基因的表達狀況。其中包括對目的基因和標記基因的鑒定。常用方法有原位雜交、Northern雜交、免疫組織化學染色等,原位及Northern雜交是檢測外源基因轉錄出的mRNA,后者則是檢測外源基因翻譯出的蛋白質。
磷酸鈣共沉淀轉染法的技術特點
磷酸鈣法是磷酸鈣共沉淀轉染法,因為試劑易取得,價格便宜而被廣泛用于瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和氯化鈣混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,最后把含有沉淀的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受
基因轉染技術的病毒方法轉染介紹
病毒作為基因轉染是基因遞送良好的工具,病毒載體的優點有: (1)在轉化的細胞中傳播重組的DNA分子作為穩定的遺傳成分; (2)可能將有缺陷的或突變的基因置于病毒調節信號的控制下以進行研究; (3)能將克隆的基因作為病毒微染色體的一部分 ,并能進行分離; (4)轉移效率較高。其主要缺點是病
基因轉染技術的轉染與分析介紹
具體的基因轉染條件應參考所使用的試劑和方法進行優化。靶基因被導入細胞后,一般在轉染后48小時,靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。如若建立穩定的細胞系,則可對靶細胞進行篩選,根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,最常用的真核表達基因載體
轉染和轉染效率測定步驟
LIPOFECTAMINE 2000轉染試劑轉染步驟此實驗步驟設計用來進行24孔板貼壁細胞的瞬時或穩定轉染,其為設計用來在生長培養基中直接加入復合物。1. 轉染前一天,胰酶消化細胞并計數,細胞鋪板,使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養基中。2. 對于每孔細
配體的分類和特點
按配體中配位原子的多少,可將配體分為單齒配體和多齒配體。單齒配體:一個配體中只有一個配位原子的配體。如 NH3、H20等。多齒配體:一個配體中有兩個或兩個以上配位原子的配體。如二亞乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 簡寫為DEN) 和乙二胺四乙酸根(簡寫為EDTA) 。兩可配體:有些
DNA纖維熒光原位雜交技術技術的特點、分類和應用
FISH的分辨率取決于載體DNA的濃縮程度,如何提高分辨率一直是一個重要課題。Wiegant等和Heng等首先利用化學方法對染色體進行線性化,再以此為載體進行FISH,使其分辨率顯著提高,這就是最初的纖維-FISH。纖維-FISH應用各種不同技術,將待研究細胞的全部遺傳物質即DNA在載玻片上制備出D
桿狀病毒轉染載體的分類
用于表達融合型蛋白的轉染質粒是一類早期構建的轉染質粒,它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中,多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點,當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時,就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合
常規轉染技術的類型
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
基因轉染技術介紹
用的基因轉染技術是將外源基因導入靶細胞需要一定的載體和導入方法,基因轉技術則是將純化的含有靶基因的質粒DNA送入細胞內,并在細胞內表達。轉染方法有多種,根據不同的細胞,貼壁或懸浮細所可選用不同的方法,其目的是要達到設置轉染效率,影響轉染產率的因素有多種,包括轉染方法、操作技術、質粒DNA的純度
細胞瞬時轉染技術
原理:通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術,將靶基因導入細胞,一般在轉染后48小時左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應用:觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)。一般流程:1)細胞接種:轉染實
色譜柱的特點和分類
3-1 柱的結構 1、堵棒(或導管)2、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過濾片? ? 3-2 柱的分類:根據所有的擔體材料分為三種: a.硅膠型:機械強度高,易制成小顆粒,理論塔板數高。 b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內穩定 c.羥基磷灰
色譜柱的特點和分類
3-1 柱的結構 1、堵棒(或導管)2、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過濾片? ? 3-2 柱的分類:根據所有的擔體材料分為三種: a.硅膠型:機械強度高,易制成小顆粒,理論塔板數高。 b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內穩定 c.羥基磷灰
稱重模塊的分類和特點
稱重模塊屬于傳感器的一種新型應用結構,主要由稱重傳感器、頂板、基板、支承螺栓及負載支承柱組成;只需要將稱重模塊簡單地安裝到罐體、料斗以及其它設備的支腳或支柱下便可以將該設備改造成稱。通常根據負載支承柱及頂板的不同分為固定式、半浮動式和浮動式。稱重系統主要由一個固定模塊、一個半浮動模塊以及若干全浮
多彩色熒光原位雜交技術的特點、分類和應用
mFISH是在熒光原位雜交基礎上發展起來的新技術,它不僅具有FISH的優點,而且克服了FISH的許多局限,其最大特點是可將多次繁頊的FISH實驗和多種不同的基因定位在一次FISH實驗中完成。mFISH能同時檢測多個基因,分辨復雜的染色體易位和微小缺失,區分間期細胞多倍體和超二倍體等。mFISH用激發
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA (質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA?(質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
轉染和轉化的區別?
從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣義的轉化。
擔體分類和特點
? 通常分為硅藻土和非硅藻土兩大類,每一類又有種種小類。 1、硅藻土類型: (1)白色的:表面積小,疏松,質脆,吸附性能小,經適當處理,可分析強極性組分; (2)紅色的:有較大的表面積和較好的機械強度,但吸附性較大。 2、非硅藻土類型: (1)氟擔體:表面惰性好,可用來分析高極性和腐蝕性物