轉染的概念和常規轉染技術分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。......閱讀全文
轉染的概念和常規轉染技術分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類。
常規轉染技術分類
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
常規轉染技術的分類和選擇
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
常規轉染技術的分類和原理差異
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
常規轉染技術的類型
常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同
轉染的技術特點和分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。???從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣
轉染的技術特點和分類
轉染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。?從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為
細胞轉染的概念和應用
隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
轉染的分類
包括:1.DEAE-葡聚糖法DEAE-葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地應用于瞬時表達的研究,但用于穩定轉染卻不是十分可靠。2.磷酸鈣法磷酸鈣法是磷酸鈣共沉淀轉染法,因為試劑易取得,價格便宜
基因轉染技術的轉染方法介紹
1、轉染 轉染指通過生化或者物理方法將目的基因導入真核細胞中 。 2、感染 感染指通過病毒介導,用基因組中攜帶有克隆目的片斷的病毒來感染靶細胞。
轉染和轉染效率測定步驟
LIPOFECTAMINE 2000轉染試劑轉染步驟此實驗步驟設計用來進行24孔板貼壁細胞的瞬時或穩定轉染,其為設計用來在生長培養基中直接加入復合物。1. 轉染前一天,胰酶消化細胞并計數,細胞鋪板,使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養基中。2. 對于每孔細
細胞轉染的操概念
細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。
基因轉染技術的轉染與分析介紹
具體的基因轉染條件應參考所使用的試劑和方法進行優化。靶基因被導入細胞后,一般在轉染后48小時,靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。如若建立穩定的細胞系,則可對靶細胞進行篩選,根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,最常用的真核表達基因載體
基因轉染技術的病毒方法轉染介紹
病毒作為基因轉染是基因遞送良好的工具,病毒載體的優點有: (1)在轉化的細胞中傳播重組的DNA分子作為穩定的遺傳成分; (2)可能將有缺陷的或突變的基因置于病毒調節信號的控制下以進行研究; (3)能將克隆的基因作為病毒微染色體的一部分 ,并能進行分離; (4)轉移效率較高。其主要缺點是病
DNA轉染的基本概念
中文名稱DNA轉染英文名稱DNA transfection定 義將外源DNA分子導入真核細胞的過程。一般細胞很難接受外源DNA分子,可用適當的化學或物理方法處理(如磷酸鈣法、電穿孔法等),使外源DNA容易進入細胞。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
穩定轉染的基本概念
一般來說(由細胞類型決定),形成穩定轉染細胞的效率比瞬時轉染(transient transfection)的效率低1到2個數量級。利用可選擇的遺傳標記物有利于從非轉染細胞的中分離出稀少的穩定轉染物。
質粒轉染的基本概念
中文名稱質粒轉染英文名稱plasmid transfection定 義將外源質粒導入真核細胞的過程。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
短暫轉染的基本概念
中文名稱短暫轉染英文名稱transient transfection定 義外源核酸轉染真核細胞后未整合入細胞基因組,而是以附加體形式短時間存在于細胞中,幾天后就會丟失的現象。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
RNA轉染的基本概念
中文名稱RNA轉染英文名稱RNA transfection定 義將RNA分子導入細胞的過程。可用以研究RNA的功能。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
基因共轉染的概念和方法介紹
基因工程中將兩個以上的基因同時導入感受態真核細胞的方法,稱作共轉化(cotransformation,也稱共轉染)。將目的基因表達載體DNA 和標記基因表達載體DNA 混合后共同轉移到靶細胞中,分別使用標記基因與目的基因對應的選擇劑進行兩次篩選,最后可得到復合轉導的轉化子。在磷酸鈣沉淀物中,兩種物理
基因轉染技術介紹
用的基因轉染技術是將外源基因導入靶細胞需要一定的載體和導入方法,基因轉技術則是將純化的含有靶基因的質粒DNA送入細胞內,并在細胞內表達。轉染方法有多種,根據不同的細胞,貼壁或懸浮細所可選用不同的方法,其目的是要達到設置轉染效率,影響轉染產率的因素有多種,包括轉染方法、操作技術、質粒DNA的純度
細胞瞬時轉染技術
原理:通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術,將靶基因導入細胞,一般在轉染后48小時左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應用:觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)。一般流程:1)細胞接種:轉染實
簡述基因轉染技術的表達和檢測
在篩選出轉化子后還需要鑒定轉導細胞中外源基因的表達狀況。其中包括對目的基因和標記基因的鑒定。常用方法有原位雜交、Northern雜交、免疫組織化學染色等,原位及Northern雜交是檢測外源基因轉錄出的mRNA,后者則是檢測外源基因翻譯出的蛋白質。
影響細胞轉染轉染效率的因素和注意事項
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小
影響細胞轉染轉染效率的因素和注意事項
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒
轉染
細胞傳代(1) 試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。(2) 棄掉培養皿中的培養基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3) 用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2 )。用手輕拍
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA (質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA?(質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
轉染和轉化的區別?
從本質上講,和轉化沒有根本的區別。無論是轉染還是轉化,其關鍵因素都是用氯化鈣處理細菌或培養細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA或RNA能夠容易進入細胞內部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉染為廣義的轉化。
各種轉染試劑的中文轉染方法
FuGENE6(Roche)轉染步驟: 轉染前一天將細胞分至培養板,轉染當天細胞應50-80%融合。將細胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過夜將達到如此密度。 將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。 1. 在PCR管中加入不含血