逆轉錄病毒介導的基因技術
是目前將外源基因導入細胞的最有效的方法。此系統包括重組逆轉錄病毒載體和包裝細胞兩個部分,廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。該病毒為RNA病毒,感染細胞后,其基因組RNA經逆轉產生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒,前病毒轉錄產生正鏈即為病毒基因組RNA。整個基因組從5′端到3′端依次是:5′長末端重復順序(LTR)編碼病毒內部結構蛋白的gag基因,編碼蛋白的pol基因,編碼外殼蛋白的env基因以及3′LTR和一個介子5′LTR和gag基因之間的包裝信號。將病毒蛋白編碼區gag、pol、env全部切除,代之以外源性目的基因即改建為病毒載體,保留了LTR和包裝信號,是一種復制缺陷性病毒。同時,設計一種包裝細胞系,其內含有輔助病毒基因組,即為包裝信號缺乏的MO-MLV。當逆轉錄病毒載體進入包裝細胞系時,載體基因就被包裝形成完整的病毒顆粒,于是包裝細胞系就成了制造病毒載體的生產細胞系。......閱讀全文
逆轉錄病毒介導的基因技術
是目前將外源基因導入細胞的最有效的方法。此系統包括重組逆轉錄病毒載體和包裝細胞兩個部分,廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。該病毒為RNA病毒,感染細胞后,其基因組RNA經逆轉產生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒,前病毒轉錄產生正鏈即為病毒基因組R
逆轉錄病毒介導的基因技術
是目前將外源基因導入細胞的最有效的方法。此系統包括重組逆轉錄病毒載體和包裝細胞兩個部分,廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。該病毒為RNA病毒,感染細胞后,其基因組RNA經逆轉產生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒,前病毒轉錄產生正鏈即為病毒基因組R
逆轉錄病毒介導的基因技術
是目前將外源基因導入細胞的最有效的方法。此系統包括重組逆轉錄病毒載體和包裝細胞兩個部分,廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。該病毒為RNA病毒,感染細胞后,其基因組RNA經逆轉產生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒,前病毒轉錄產生正鏈即為病毒基因組R
逆轉錄病毒介導的基因技術的缺陷
①載體的滴度較低;②是輔助病毒與載體病毒重組重新獲得包裝信號使病人面臨感染輔助病毒的危險性;③此載體只能整合至分裂相細胞;④此載體容納的外源基因量較少,不利于較大的基因的插入。
關于逆轉錄病毒介導的基因技術的介紹
是目前將外源基因導入細胞的最有效的方法。此系統包括重組逆轉錄病毒載體和包裝細胞兩個部分,廣泛應用的逆病毒載體LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。該病毒為RNA病毒,感染細胞后,其基因組RNA經逆轉產生雙鏈DNA拷貝插入宿主染色體形成前病毒,前病毒轉錄產生正鏈即為病毒基因
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病毒介導基因轉移:前述的化學和物理方法都是通過傳染方式基因轉移。病毒介導基因轉移(viral mediatedgene transfer)是通過轉換方式完成基因轉移,即以病毒為載體(vector),將外源目的基因通過基因重組技術,將其組裝于病毒上,讓這種重組病毒去感染受體宿主細胞,這種病毒稱為病毒運
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技術和方案14-PCR介導基因破壞法
實驗步驟展
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RNA介導的基因沉默實驗
實驗材料pGEM-T 載體 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DNA 模板 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒d
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實驗材料pGEM-T 載體DNA 模板試劑、試劑盒dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套緩沖液限制酶儀器、耗材PCR 純化試劑盒或柱子實驗步驟一、篩選目的基因片段的參數1. 序列( 1 ) 構建一個指定的 RNA 沉默載體首先要進行生物信息學分析。根據目的基因對應的已知 cDNA 序列
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染色體介導的基因轉移
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