外源基因轉移技術介紹
外源基因的轉移：基因轉移（gene transfer）是將外源基因導入細胞內，其轉移方法較多，常用的要有下列幾類：1）化學法：將正常基因DNA（及其拷貝）與帶電荷物質和磷酸鈣、DEAE－葡萄糖或與若干脂類混合，形成沉淀的DNA微細顆粒，直接傾入培養基中與細胞接觸，由于鈣離子有促進DNA透過細胞有作用，某些化合物可擾亂細胞膜，故可將DNA輸入細胞內，并整合于受體細胞的基因組中，在適當的條件下，整合基因得以表達，細胞亦可傳代。這種方法簡單，但效率極低，一般1000－100000個細胞中只有一個細胞可結合導入的外源基因。要達到治療目的，就需要從病人獲得大量所需的受體細胞。當然，可以通過選擇培養的方法來提高轉化率。2）物理法：包括電穿孔法和直接顯微注射法。①電穿孔法：電穿孔法（electroporotion）是將細胞置于高壓脈沖電場中，通過電擊使細胞產生可逆性的穿孔，周圍基質中的DNA可滲進細胞，但有時也會使細胞受到嚴重損傷。②顯微注射......閱讀全文
外源基因轉移技術介紹
外源基因的轉移：基因轉移（gene transfer）是將外源基因導入細胞內，其轉移方法較多，常用的要有下列幾類：1）化學法：將正常基因DNA（及其拷貝）與帶電荷物質和磷酸鈣、DEAE－葡萄糖或與若干脂類混合，形成沉淀的DNA微細顆粒，直接傾入培養基中與細胞接觸，由于鈣離子有促進DNA透過細胞有作用
外源基因在真核細胞表達技術
生化方法l??????磷酸鈣介導的質粒DNA轉染真核細胞1.??????轉染前24 h，通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60 mm組織培養皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃溫箱孵育20～24 h。轉染前1 h換液。2.?????
外源基因在原核細胞表達技術
原核細胞l??????用IPTG誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因?含重組表達載體的大腸桿菌菌株的構建1.??????PCR修飾或限制性內切酶消化分離DNA片段，片段5’端和3’端帶有與IPTG誘導表達載體對應的限制酶位點。2.??????含靶cDNA/基因的DNA片段與表達載體連接。3.????
外源基因在真核細胞表達技術
生化方法*?磷酸鈣介導的質粒DNA轉染真核細胞轉染前24 h，通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60 mm組織培養皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃溫箱孵育20～24 h。轉染前1 h換液。2.按照下屬方法制備磷酸鈣-DNA沉淀：
外源基因在原核細胞表達技術
原核細胞*用IPTG誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因?含重組表達載體的大腸桿菌菌株的構建1.PCR修飾或限制性內切酶消化分離DNA片段，片段5’端和3’端帶有與IPTG誘導表達載體對應的限制酶位點。2.含靶cDNA/基因的DNA片段與表達載體連接。3.重組質粒轉化有lacIq?等位基因的大腸桿菌
關于外源基因的基本介紹
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。 細菌、植物和動物的基因轉化具有重要的研究
外源基因進入細胞主要方法介紹
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法、脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和
外源DNA的基因特點
基因有兩個特點，一是能忠實地復制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能夠“突變”，突變絕大多數會導致疾病，另外的一小部分是非致病突變。非致病突變給自然選擇帶來了原始材料，使生物可以在自然選擇中被選擇出最適合自然的個體。含特定遺傳信息的核苷酸序列，是遺傳物質的最小功能單位。除某些病毒的基因由核糖核酸（
細胞化學詞匯外源基因
中文名稱：外源基因英文名稱：exogenous gene定 義：經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
外源基因轉化的用途
利用外源基因轉化已經產生了轉基因學科，利用重組DNA技術可以將以前沒有的新特性引入生物體。通過轉基因創造的生物體很多，從細菌到哺乳動物，包括綿羊和猴子，它們有多種用途：用于研究發育遺傳學、疾病過程和基因調控等。轉基因動物可以生產藥物，并增加牛奶或肉類的產量。來自轉基因動物的組織和器官可以用于輸血和移
外源基因的誘導表達
1．目的了解外源基因在原核細胞中表達的特點和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac啟動子的表達系統中。先讓宿主菌生長，lac I產生的阻遏蛋白與lac操縱基因結合抑制下游的外源基因轉錄。向培養基中加入誘導物IPTG（異丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表達。表達的蛋白可經SDS-
基因轉移技術的技術方法介紹
基因轉移是用物理的、化學的或生物學的方法將目的基因導入受體細胞并使之表達的一種技術。
基因轉移的技術方法介紹
基因轉移是用物理的、化學的或生物學的方法將目的基因導入受體細胞并使之表達的一種技術。物理方法包括顯微鏡注射法、電脈沖介導法。顯微注射法是應用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞；電脈沖介導法又稱電穿孔法，是指在高壓電脈沖的作用下，使細胞膜上出現瞬間微小的孔洞，從而介導不同細胞之間的原
病毒介導基因轉移技術介紹
病毒介導基因轉移：前述的化學和物理方法都是通過傳染方式基因轉移。病毒介導基因轉移（viral mediatedgene transfer）是通過轉換方式完成基因轉移，即以病毒為載體（vector），將外源目的基因通過基因重組技術，將其組裝于病毒上，讓這種重組病毒去感染受體宿主細胞，這種病毒稱為病毒運
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達1
通過外源DNA的重組、克隆、以及鑒定，可以獲得所需的特異DNA克隆。外源克隆基因在某種表達載體及適宜的宿主細胞中可表達為相應的蛋白質，這就組成了外源基因的蛋白表達系統。表達后的蛋白質必須具有原來的生物學活性，這是基于正確的基因轉錄、轉錄后加工、mRNA翻譯及翻譯后修飾，同時與表達載體的結構和表達體系
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達4
（3）CHO細胞穩定表達系統：動物細胞瞬時表達系統中外源基因沒有穩定地整合到宿主細胞染色體中，一染色體外DNA的形式存在。因而只能瞬時表達。要使外源基因在宿主細胞中高效、穩定地表達，必須建立一個穩定表達系統，包括適宜的表達載體、有效的基因轉染、標記基因和目標基因的選擇與共擴增、受體適當的受體細胞和培
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達3
（6）遺傳標記： 從成千上萬個哺乳細胞中，檢測出極少數的含DNA重組體的轉染細胞，并鑒定已導入外源DNA是哺乳動物細胞基因表達系統的一個關鍵內容。因此，在真核生物表達載體上必須附有標記基因，才能進行篩選。常用的標記基因有：胸苷激酶基因（thymidine kinase，TK）、二氫葉酸還原酶
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達2
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
基因轉移技術
基因轉移技術分為兩類：第一類是將目的基因轉導入體外培養的細胞或導入從體內取出的細胞，觀察目的基因在細胞中的表達，這項技術稱基因轉染（gene transfection）技術。通常情況下，該技術轉入的目的基因不與細胞染色體發生整合，而是在細胞質呈現暫時性表達，隨時間推移而逐漸減弱或消失。第二類是將
分子遺傳學詞匯外源基因
中文名稱：外源基因英文名稱：exogenous gene定 義：經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
外源基因的概念和功能特點
中文名稱外源基因英文名稱exogenous gene定 義經轉基因步驟導入受體細胞的基因。應用學科遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
基因轉移的物理技術方法介紹
包括顯微鏡注射法、電脈沖介導法。顯微注射法是應用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞；電脈沖介導法又稱電穿孔法，是指在高壓電脈沖的作用下，使細胞膜上出現瞬間微小的孔洞，從而介導不同細胞之間的原生質膜發生融合，使外源DNA通過細膜上出現的瞬間小孔而進入細胞。
基因轉移的化學技術方法介紹
有DNA-陽離子-二甲基亞砜法。基因轉移的生物學方法包括細胞融合法、脂質體介導法、原生質體融合法等。除以上三種方法外，又出現了顆粒轟擊技術，就是將外源DNA包被在金屬上，在電場中包被DNA的金屬顆粒獲得能量并以高速度運動，穿入靶細胞組織或器官內，由于這種金屬顆粒可以涂成薄膜狀，所以可實現較多細胞的基
基因轉移技術的基本步驟介紹
（1）配制下列溶液①2×HEPES-緩沖鹽溶液（HBS）②2mol/L CaCl2③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm濾器過濾除菌，分裝貯存于4℃。④DNA：將DNA（約20μg/106細胞）溶于0.1×TE（pH8.0），使用濃度為40μg/ml。為使轉化效率達到最高，質粒DNA應用CsCl
外源基因人工轉化轉染的方法
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。
關于外源DNA的基本介紹
外源DNA，是通過基因工程技術或病毒感染等途徑引入靶細胞中的DNA序列。 對于一個細胞來說，內源DNA是其基因組的序列（本身生物就有的DNA），而外源的DNA是通過基因工程導入的其他物種或細胞的DNA，也可以是人工合成的一段DNA。
實時熒光定量－PCR技術用于檢測插入的外源基因拷貝數
自 1994 年，第一例轉基因植物產品 Flavr Savr TM 西紅柿在美國上市，到 2003 年底，世界范圍內轉基因作物已遍布 18 個國家和地區，種植面積達 167.2 萬英畝 (6770 萬公頃 )( Ewen SWB,1999; 北國網 ) 。大量實踐使得植物轉基因技術已有了
基因轉移技術的概念
基因轉移指應用物理、 化學或生物學方法將目的基因轉移入受體細胞內的過程。基因轉移技術在基因工程、生物醫學研究、基因治療、植物農作物品種改 造等領域被廣泛應用。通過基因轉移將遺傳信息從一個基因組向另一個基因組轉移，使 轉移的遺傳信息在受者生物表達。
基因轉移技術的簡介
基因轉移技術是一種將外源基因以在體(in vivo)或離體(in vitro)的方式導入到靶細胞核內的技術, 屬于基因工程技術(亦稱重組DNA?技術)的一個重要組成部分。基因工程技術以分子生物學等學科發展為基礎, 使人類擁有了構造生物遺傳物質新組合的能力。對在體方式而言, 基因轉移技術需要跨越細胞外
基因轉移技術的缺陷
①載體的滴度較低；②是輔助病毒與載體病毒重組重新獲得包裝信號使病人面臨感染輔助病毒的危險性；③此載體只能整合至分裂相細胞；④此載體容納的外源基因量較少，不利于較大的基因的插入。因此，人們在努力改造包裝細胞系使其日趨完善，并廣泛用于體外及體內的基因治療中。在體外治療中，為了增強腫瘤病人骨髓細胞對化療藥