siRNA聯合納米技術為難治型乳腺癌重拳出擊
據世衛組織2013最新報告，乳腺癌的發病率目前在西方發達國家屬于高位穩定的狀態。全球年發病新增乳腺癌患者在130萬左右，死亡率在歐美國家占到女性的16%，發病率和死亡率占女性第一位。對于我國來說，乳腺癌局勢也不容樂觀。乳腺癌已居我國女性惡性腫瘤之首，且近年發病呈年輕化，發病率每年遞增約 3%。乳腺癌已成為社會關注的焦點問題之一。 2001年美國斯坦福大學的研究人員Sorlie等通過基因研究，將乳腺癌分為5個亞型，每個亞型有各自雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長因子受體-2(Her-2)的表達特征，預后各不相同。在臨床上常抽取患者外周血，采用免疫組織化學方法檢測以上3個指標，均為陰性者稱為 “三陰”乳腺癌(TNBC)，不是都陰性的稱為“非三陰”乳腺癌。Basal-1ike型分子表達為ER(-) /PR(-)/HER-2(-)，相當于“三陰”乳腺癌。 “三陰”乳腺癌屬于乳腺癌的特殊亞型，......閱讀全文
JCI：siRNA篩選發現促乳腺癌轉移關鍵因子
近日，著名國際期刊JCI在線發表了荷蘭萊頓大學研究人員的一項最新研究成果，他們利用小干擾RNA對H1299細胞內與細胞遷移有關的基因進行了篩選，發現了一些與腫瘤細胞遷移速度和持續性有關的基因，并發現了與乳腺癌病人腫瘤轉移密切相關的SRPK1基因或可成為乳腺癌藥物治療的潛在靶點，因此具有重要意義
攜帶siRNA納米顆粒抑制三陰性乳腺癌轉移
來自美國的華人科學家Zheng-Rong Lu在國際學術期刊cancer research發表了一篇文章，他們針對β3整合素設計了siRNA并通過納米顆粒進行體內轉運能夠顯著抑制三陰性乳腺癌的生長，轉移和復發，具有重要應用前景。 轉移性乳腺癌是癌癥導致女性死亡的第二大殺手，而三陰性乳腺癌是乳腺
－siRNA聯合納米技術為難治型乳腺癌重拳出擊
據世衛組織2013最新報告，乳腺癌的發病率目前在西方發達國家屬于高位穩定的狀態。全球年發病新增乳腺癌患者在130萬左右，死亡率在歐美國家占到女性的16%，發病率和死亡率占女性第一位。對于我國來說，乳腺癌局勢也不容樂觀。乳腺癌已居我國女性惡性腫瘤之首，且近年發病呈年輕化，發病率每年遞增約 3%
siRNA表達框架制備siRNA的方法介紹
siRNA表達框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一種由PCR得到的siRNA表達模版，包括一個RNA pol Ⅲ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol Ⅲ終止位點，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。和siRNA表達載體不同的是，SECs
siRNA表達載體制備siRNA的方法介紹
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表
siRNA表達框架
siRNA表達框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版，能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一個RNA polⅢ啟動子，一段發夾結構siRNA，一個RNA pol I
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：?1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至
siRNA制備方法
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段45—50nt的發夾結構RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人
siRNA－轉染程序
?A．siRNA轉染的方法???哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：1.???????轉染試劑的用
siRNA的轉染
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀 將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉
SiRNA用戶指南
Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequenceUsing Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et al. 1999), we have systematically analyzed t
siRNA－Design－Guidelines
Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA, such as chemical synthe
siRNA對照解析
A．普通陰性對照??1.siRNA實驗應該有陰性對照；2.通用陰性對照為與目的基因的序列無同源性的普通陰性對照；3．Scrambled陰性對照和選中的siRNA序列有相同的組成，但是和mRNA沒有明顯的同源性；4．陰性對照需要確定和目的靶細胞中其它基因同源性很低。??B．熒光標記陰性對照??1. R
siRNA體外轉染——GenMuteTM－siRNA體外轉染的優化
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。最佳的siRNA濃度范圍是1.0nM到10nM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”。我們實驗室已經使用GenMuteTM轉染試劑成功敲除了內源表達的生長因子。以24孔板為例，如下步
siRNA的制備方法
化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的siRNA的情況
siRNA實驗成功要點
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列??? 為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA應根據mRNA低二級結構的區域設
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關
siRNA用戶手冊
The siRNA user guide??(revised May 6, 2004)?Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequenceUsing Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et
siRNA－的設計方法
關于設計siRNA以及siRNA設計對siRNA功能的影響，至今還沒有可靠的規律。雖然我們可以通過對mRNA實驗分析準確的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但這個過程十分耗時且昂貴，不推薦常規實驗使用。一種做法是每個目標序列設計3－4對siRNAs，實驗選擇較有效的siRNA。?????目前
siRNA－Oligo設計原則
1． 希望軟件可以在 web 上使用。 即用戶可以訪問我們的網站， 輸入基因代碼， 即可自行在網上設計 siRNA Oligo 。2． 可參照的軟件形式： 見如下網站：www.dharmacon.comwww.ambion.comwww.qiagen.com3． 希望能就每一個所指定的基因找到至少四
siRNA的轉染方法
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞 中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞 膜并通過胞飲進入目的細胞 的細胞 質。沉淀物的大小和質量對
siRNA個人經驗小結
在活體RNAi關鍵點：類似藥物屬性的引入，如穩定性、細胞內的傳送、組織的生物可溶性進入合成的siRNA。授予siRNA類似藥物的屬性化學穩定性的膽固醇共聚的siRNA 顯著的改善了其在體內和體外的藥物屬性。化學穩定性增強的方法：對正義和反義鏈進行部分的phosporothioate backbone
簡述siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞
siRNA的設計方法
關于設計siRNA以及siRNA設計對siRNA功能的影響，至今還沒有可靠的規律。雖然我們可以通過對mRNA實驗分析準確的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但這個過程十分耗時且昂貴，不推薦常規實驗使用。一種做法是每個目標序列設計3-4對siRNAs，實驗選擇較有效的 siRNA。方法一、
siRNA制備方法介紹
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si
siRNA的設計方法
關于設計siRNA以及siRNA設計對siRNA功能的影響，至今還沒有可靠的規律。雖然我們可以通過對mRNA實驗分析準確的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置，但這個過程十分耗時且昂貴，不推薦常規實驗使用。一種做法是每個目標序列設計3-4對siRNAs，實驗選擇較有效的siRNA。方法一、根據T
siRNA的制備方法
化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的siRNA的情況
開發肽siRNA偶聯物，向肝外組織定向遞送siRNA療法!
此次合作，將超越肝臟范疇，為多種肝外疾病開啟siRNA治療機會。 行業領先的RNAi治療公司Alnylam與行業領先的肽基藥物發現公司PeptiDream近日宣布了一項許可及合作協議，發現和開發肽-siRNA偶聯藥物，創造多種機會，為肝外組織遞送RNAi療法。通過這一合作，2家公司將合作選擇和
siRNA表達載體的構建
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN