快速了解還原糖的測定

　　實驗原理

　　斐林試劑法

　　還原糖與斐林試劑發生作用，可以生成磚紅色沉淀。

　　所需試劑

　　斐林試劑（主要由質量濃度為0.1g/mL的NaOH溶液和質量濃度為0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成）

　　注意：現配現用

　　實驗材料準備

　　植物組織是常用的實驗材料,但必須加以選擇。本實驗最理想的實驗材料是含糖量較高的生物組織(或器官),而且組織的顏色較淺,或近于白色的,如蘋果和梨的果實。經試驗比較,顏色反應的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜。

　　操作方法

　　①向試管內注入2mL待測組織藥液

　　②向試管內注入1mL斐林試劑（甲液和乙液等量混合均勻后再注入）

　　③將試管放入盛有50～65℃溫水的大燒杯中加熱約2min

　　④觀察試管中出現的顏色變化

　　其他說明

　　斐林試劑和班氏試劑等都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分有區別。下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結。

　　1. 斐林試劑和雙縮脲試劑

　　斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液和CuSO4溶液組成，但二者有如下三點不同：

　　（1）溶液濃度不同

　　斐林試劑中溶液為斐林試劑甲(NaOH溶液)其濃度為0.1g/ml,斐林試劑乙(CuSO4溶液)其濃度為0.05g/ml；雙縮脲試劑:雙縮脲試劑A(NaOH溶液)的濃度為0.1g/ml，雙縮脲試劑B(CuSO4溶液)的濃度為0.01g/ml。

　　（2）使用原理不同

　　斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉淀）。

　　鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。雙縮脲反應實質是在堿性環境下的與雙縮脲試劑發生的紫色反應。而蛋白質分子中含有很多與雙縮脲（）結構相似的肽鍵，所以蛋白質都能與雙縮脲試劑發生顏色反應，可以用雙縮脲試劑鑒定蛋白質的存在 [3] 。

　　（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙可強烈產生，很容易沉淀析出，因此斐林試劑一般為現用現配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉為一對緩沖物質，產生的數量有限，與溶液混合后產生的濃度相對較低，不易析出，因此該試劑可長期保存 [3] 。

　　當然，無論用班氏試劑還是斐林試劑，歸根結底都是與醛基在沸水浴加熱條件下反應而生成磚紅色的沉淀，兩者反應現象一樣，這就是二者的相同之處。

　　（4）備注：

　　如果溶液中還原糖含量較低，產生的氧化亞銅便會較少，試驗后只會有綠色、混濁的黃色或橙色等。

　　在酸性環境中，Cu2 會變得較為穩定，不容易發生反應，所以不能進行試驗。

　　醇和醛在這測試亦會產生磚紅色沉淀物，因為兩者都具有在這試驗中產生作用的官能團。