幾種基因克隆的常用方法介紹（一）
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最為簡便的一種。獲取基因序列多從文獻中查取,即將別人報道的基因序列直接作為自己克隆的依據。現在國際上公開發行的雜志一般都不登載整個基因序列,而要求作者在投稿之前將文章中所涉及的基因序列在基因庫中注冊,擬發表的文章中僅提供該基因在基因庫中的注冊號 (accession number),以便別人參考和查詢。目前,世界上主要的基因庫有:(1)EMBL,為設在歐洲分子生物學實驗室的基因庫,其網上地址為http://www.ebi.ac.uk/ebi-home.html;(2)Genbank,為設在美國國家衛生研究院(NIH)的基因庫,其......閱讀全文
基因克隆
外源DNA和質粒載體的連接反應?外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間?形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交
基因克隆技術
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
基因的圖位克隆
?圖位克隆(Ｍａｐ-ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ)又稱定位克隆(ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ),1986年首先由劍橋大學的Ａｌａｎｃｏｕｌｓｏｎ提出,用該方法分離基因是根據目的基因在染色體上的位置進行的,無需預先知道基因的ＤＮＡ順序,也無需預先知道其表達產物的有關信息,但應有以下兩方面的基本情況:
基因克隆技術
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
基因克隆常見方法
、T4連接酶介導的DNA克隆傳統的分子克隆，通常需要使用相同的限制性內切酶酶切載體和目的片段，使得載體和片段產生相同的粘性或平末端，使用T4 DNA連接酶對其進行連接，轉化，挑取陽性克隆，得到重組質粒為了更方便的對DNA進行克隆，后續又將克隆的載體進行了簡化，出現了T載體，這樣就可以不用酶切，直接將
基因分離克隆的方法
1 基因芯片技術分離目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介質上的生物信息分子的微列陣。列陣中每個分子的序列及位置都是已知的，并按預先設定好的順序點陣。基因芯片是生物芯片的一種，其上固定的是核算類物質，主要用于DNA、RNA分析。分為DNA芯片和微點陣兩種。分離目的基因是是指從基因組中發現或找出某個
“電子”基因克隆－（sillcon－cloning）
利用計算機來協助克隆 基因，稱為“電子”基因克隆 （sillcon cloning），是與定位克隆 、定位候選克隆 策略并列的方法之一，即采用生物信息學的方法延伸EST序列，以獲得基因部分乃至全長的cDNA序列。EST數據庫的迅速擴張，已經并將繼續導致識別與克隆 新基因策略發生革命性變化。1
基因克隆技術1
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
目的基因的亞克隆
實驗題目 ：目的基因的亞克隆一、實驗目的1、掌握細菌基因組提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸內切酶處理基因組及其結果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、實驗原理細菌基因組的提取：通過堿法或者酶法裂解細菌之后，可以將胞內的核酸和蛋白質全釋放出來。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于 0.
基因克隆的載體類型
①在宿主細胞中能保存下來并能大量復制，且對受體細胞無害，不影響受體細胞正常的生命活動。②有多個限制酶（Restriction enzymes）切點，而且每種酶的切點最好只有一個，如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點，可適于多種限制酶切割的DNA插入。③含有復制起始位點，能夠獨立復制；通
目的基因的亞克隆
目的基因的亞克隆所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。??? 亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。?一、試劑準備1．LB液體培養基：
基因克隆的常用方法
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。
基因克隆技術概述
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
目的基因的亞克隆
實驗材料?E.coli JM109試劑、試劑盒?牛肉膏胰蛋白胨NaCl微量細菌基因組抽提試劑盒BamH IXho1 核酸內切酶凝膠電泳回收試劑盒儀器、耗材?高速臺式冷凍離心機水平電泳儀漩渦混合儀紫外檢測儀凝膠成像分析系統微量移液器及吸頭
目的基因的亞克隆
目的基因的亞克隆可應用于：（1）進一步分析目的基因；（2）基因重組。實驗方法原理亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。實驗材料E.coli JM109試劑、試劑盒牛肉膏胰蛋白胨NaCl微量細菌基因組抽提試劑盒
目的基因的亞克隆
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。 實驗材料
分子標記基于圖譜克隆基因
圖位克隆(Map—bascd cloning））是近幾年隨著分子標記遺傳圖譜的相繼建立和基因分子定位而發展起來的一種新的基因克隆技術。利用分子標記輔助的圖位克隆無需事先知道基因的序列，也不必了解基因的表達產物，就可以直接克隆基因。圖位克隆是最為通用的基因識別途徑，至少在理論上適用于一切基因。基因
酵母菌基因克隆實驗
實驗材料?酵母菌實驗步驟 1.? 用含LEU 2作為選擇標志的酵母菌DNA文庫轉化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培養，依據插入片段的大小，篩選2 000~20 000個Leu+轉化體。?2.? 影印平板轉化體，將其轉印到預熱的選擇性平板，并于37℃培養篩選互補溫感突變的表型。過
果蠅白眼突變基因的克隆
【實驗目的】掌握T克隆的原理和方法。了解質粒提取的原理和方法。【實驗原理】外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA 連接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的連接緩沖系統中，將載體分子與外源DNA分子進行連接。Taq DNA
基因分離克隆用什么方法
蛋白組是指細胞內全部蛋白的存在及活動方式，即基因組表達產生的總蛋白質的統稱。功能蛋白質組指那些可能涉及到特定功能機理的蛋白質群體。主要研究方法為蛋白質雙向電泳。通過高效液相色譜、質普對蛋白質序列進行分析，在借用分子生物學的手段則可以進行目的基因的分離。如：應用PCR進行分離目的基因：通過對蛋白質的序
復制型基因的克隆方法
將目的基因仍保留在染色體以外的克隆系統稱為復制型基因克隆系統，以區別整合到染色體上的整合型克隆系統。盡管有大量不同的噬菌體，但所有已知的乳球菌復制型克隆系統都是由質粒構建的。乳球菌遺傳學研究證明，乳球菌含有數量不等的質粒，多則十幾個。它們當中一些編碼重要的代謝物質，為了分析和克隆這些基因，以及了解它
目的基因的亞克隆3
2． 調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，最后在72℃ 保溫7min。3． 結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。4．PC
目的基因的亞克隆2
2. 連接產物的轉化⑴ 取100μl貯存于-70℃鈣化菌，冰浴化開；⑵ 加入適量連接產物（一般不超過10μl，輕輕混勻，冰浴20min；⑶ 于42℃熱休克90s，迅速轉移至冰浴中，繼續冰浴2-3min；⑷ 加入LB液體培養基200μl，于37℃緩搖孵育45min；⑸ 將培養物適量涂于1.5%瓊脂LB
目的基因的亞克隆1
所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。 一、試劑準備 1．LB液體培養基：胰化蛋白胨（細
我國成功克隆稻米品質關鍵基因
由中科院院士張啟發領銜的水稻國家研究團隊成功克隆了第一個稻米堊白率的主效基因Chalk5,并對其調控堊白形成的分子與細胞學機理進行了深入研究。研究成果不僅為優質稻米的分子育種提供了目標基因，還為水稻優質育種實踐提供了理論指導，也為進一步闡明作物品質調控的生物學機理提供了理論依據。
功能基因－cDNA－3’末端的克隆
一．原理 (1) 以目的mRNA 為模板，使用Oligo dT-3sites Adaptor Primer 進行反轉錄反應，合成1st Strand cDNA。 (2) 使用含有KpnI、XbaI、BamH I 酶切位點的上游特異性引物和3sites Adaptor Primer進行PCR反應。 (
小鼠βactin基因的克隆表達（2）
實驗步驟： ? （1）目的基因與表達載體的連接反應： ①表達載體和目的片段的酶切 ? 管號 ① ② pGEX 4T-1
DNA基因探針的克隆方法介紹
對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質，然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列，然后根據這一序列合成一套寡核苷酸探針。用此探針在DNA文庫中篩選，陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所
GeneCopoeia基因克隆技術相關研究
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。?基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DNA連接酶介
PCR技術應用基因克隆的應用
運用 PCR 技術、基因克隆和亞克隆比傳統的方法具有更大的優點。由于 PCR 可以對單拷貝的基因放大上百萬倍,產生微克(μg)級的特異 DNA 片段,從而可省略從基因組 DNA 中克隆某一特定基因片段所需要的 DNA的酶切、連接到載體 DNA 上、轉化、建立 DNA 文庫及基因的篩選、鑒定、亞克隆等