氯化銫溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA實驗(一)
用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法,取決于與線狀 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。連續梯度法實驗方法原理用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法,取決于與線狀 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。實驗材料粗制質粒試劑、試劑盒CsClCsCl 再分帶溶液乙醇溴化乙錠石蠟油儀器、耗材皮下注射針頭折光儀一次性注射器實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液CsCl ( 固體),CsCl 再分帶溶液,乙醇,溴化乙錠 ( 10 mg/ml ),石蠟油2. 核酸和寡核苷酸粗制質粒3. 離心機和轉頭Sorvall SS-34 轉頭或相當的轉頭,超速離心機轉頭(最好為垂直式)和離心管(如果離心時間不是限制因素,可用 Beckman Vti65、角度轉頭 Ti50、Ti65、Ti70 或 Sorvall 的......閱讀全文
DNA作圖實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?限制酶緩沖液儀器、耗材?電泳儀實驗步驟 ? 用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。2.? 從每個反應取小份樣品作電泳分析,用已知的分子量標準作對照。剩余的樣品置于冰浴。3.? 比較分子量標準估算出DNA片段的長度,推導出每種限制性內切酶的酶切位點數目。4.?
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗
純化DNA實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 TBS抽提緩沖液儀器、耗材 離心管實驗步驟 1. 根據樣品類型,從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌 2 次,用刮棒把細胞刮入約 0.5 ml 的 TBS 中,將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中,
DNA純化實驗
PCR清潔試劑盒純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油
DNA作圖實驗
多種酶消化 限制酶部分消化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 應用遺傳學技術構建能顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒(堿裂解法) ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒(堿裂解法) ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA定點突變實驗
DNA定點突變實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方
DNA定點突變實驗
DNA定點突變可用于:(1)研究蛋白質相互作用位點的結構、改造酶的不同活性或者動力學特性;(2)改造啟動子或者DNA作用元件;(3)提高蛋白的抗原性或者是穩定性、活性、研究蛋白的晶體結構,以及藥物研發、基因治療等等方面。實驗方法原理定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以
質粒DNA提取實驗
堿解法SDS堿裂解法(試劑盒提取)實驗方法原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性,再將pH值調至中性使其復性,復性的為質粒DNA,而染色體DNA不會復性,纏結成網狀物質,通過離心除去。實驗材料大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
核酸染色實驗——DNA
核酸是細胞內的一種大分子化合物,核酸不僅存在于細胞核內,也存在于細胞質中,動物、植物和微生物等都含有核酸。核酸可分為核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)。經過染料和化學試劑,能夠清楚地顯示 DNA 和核仁組成區嗜銀蛋白(AgNOR)物質。實驗方法原理在一般情況下,通過鹽酸水解后使 DNA 殘基
植物DNA提取實驗
實驗方法原理?真核細胞基因組在提取過程中一般有以下幾步,首先是機械法破細胞抽提;然后去除蛋白質,糖類等細胞內雜質污染;最后純化出DNA。實驗材料?幼嫩的植物材料試劑、試劑盒?液氮CTAB抽提緩沖液NaACTris-HCl EDTA氯仿異戊醇TE buffer儀器、耗材?瓷研缽離心管離心機實驗步驟 一
痘苗DNA檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶/EDTA干冰/乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10/BrdU 培養基篩選試劑4
DNA的提取實驗
實驗方法原理 酚為有效的蛋白質變性劑,并且飽和的酚與水相有效的分開.因此,在含核酸的樣品加入酚,可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層,位于水相與有機相的界畫,從而達到純化核酸的目的.但酚不能完全抑制RNA酶的活性,而且酚層中含有10-15%的水,從而溶解一部分poly-(A)RNA。將酚與氯仿聯合使用
沉淀DNA的實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?乙酸鈉乙醇儀器、耗材?EP管低溫離心機移液器-70度冰箱實驗步驟 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內切酶和配套Buffer。2. 在離心管中加入如下成分:10×Buffer ? 1μl待切樣品 xμl酶 0.5-1μl————————————
DNA定點突變實驗
實驗方法原理?定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化),包括堿基的添加、刪除、點突變等。單點突變的原理是從常規E.coli中經純化試劑盒(Miniprep)或者氯化銫純化抽提得到質粒。設計一對包含突變位點的
動物DNA提取實驗
實驗方法原理?在濃氯化鈉(1-2 mol/L)溶液中,脫氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化鈉(0.14 mol/L)溶液中,脫氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同濃度的氯化鈉溶液,將脫氧核糖核蛋白和核糖核蛋白從樣品中分別抽提出來。?將抽提得的
質粒DNA提取實驗
實驗方法原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子,是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作,進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步:①細菌的培養和質粒的擴增②細菌菌體的裂解③質粒DNA的純化實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒
DNA裂解分析實驗
實驗材料?細胞試劑、試劑盒?溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材?Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中,4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘,棄上清。2. 加入 20
質粒DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性,再將pH值調至中性使其復性,復性的為質粒DNA,而染色體DNA不會復性,纏結成網狀物質,通過離心除去。
動物DNA提取實驗
標簽: ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?動物肝臟 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DNA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?提取動物肝臟DNA提取可以:(1)用于法醫學鑒定;(2)
植物DNA提取實驗
機械法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這是一種快速簡便提取植物總DNA的方法。先將新鮮的葉片在液氮中研磨,以機械力破碎細胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化銨分離緩沖液,使細胞膜破
沉淀DNA的實驗
乙醇沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體
DNA的提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酚為有效的蛋白質變性劑,并且飽和的酚與水相有效的分開.因此,在含核酸的樣品加入酚,可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層,位于水相與有機相的界畫,從而達到純化核酸的目的.但酚不能完全抑制RNA酶的活性,而且酚層中含有10-15%的水
痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA的提取實驗
掌握核酸提取與純化的方法,離心技術的合理使用.酚為有效的蛋白質變性劑,并且飽和的酚與水相有效的分開.因此,在含核酸的樣品加入酚,可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層,本實驗來源于牡丹江醫學院 本科 5 年制檢驗專業實驗指導實驗方法原理酚為有效的蛋白質變性劑,并且飽和的酚與水相有效的分開.因此,在含核酸
DNA的轉化實驗
體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒,選用轉化和篩選技術, 可獲得含重組的陽性克隆。在此陽性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴增,繁殖, 保存以及表達目的基因的產物,這是PCR體外擴增DNA所不能替代的。配合DNA重組技術,所獲得的,不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研,醫藥生產和生物
dna提取實驗步驟
利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA,將沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液。在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M。加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出。分別用66%,80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品。此法提取的DNA中