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在雙鏈 DNA 分子中，只有一條鏈轉錄成 mRNA，這條鏈稱為有意義鏈(sense strand)，該基因的另一條鏈則稱反意義鏈(antisense strand)。在含有許多基因的 DNA 雙鏈中，每個基因的有意義鏈并不是在同一條 DNA 鏈上。也就是說，一條鏈上既具有某些基因的有意義鏈，也含有另外一些基因的反意義鏈。由于 mRNA 聚合酶是沿著 DNA 鏈的 3’→5’方向移動，DNA 鏈與合成的 RNA鏈有反平行關系，所以 mRNA 鏈的合成方向是 5’→3’，mRNA 上的信息的閱讀是從多核苷酸鏈 5'末端向 3’末端進行。從轉錄和翻譯的方向也可看出，在原核生物細胞內當 mRNA的合成還沒有完成時，蛋白質或多膚的翻譯就己經開始了。④原核基因一般不含有內含子(intron)，在原核細胞中缺乏真核細胞的轉錄后加工系統。因此當克隆的含有內含子的真核基因在原核細胞中轉錄成 mRNA 前體后，其中內含子......閱讀全文
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
外源基因在原核細胞中表達是基因工程操作中最初取得成功的途徑。1 原核生物基因表達的特點同所有的生命過程一樣，外源基因在原核細胞中的表達包括兩個主要過程:即 DNA轉錄成mRNA和 mRNA翻譯成蛋白質。與真核細胞相比，原核細胞的表達有以下特點:①原核生物只有一種RNA 聚合酶(真核細胞有三種)識別原
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。
基因的克隆就是利用體外重組技術，將特定的基因和其它DNA順序插入到載體分子中。基因克隆的主要目標是識別、分離特異基因并獲得基因的完整的全序列，確定染色體定位，闡明基因的生化功能，明確其對特定性狀的遺傳控制關系。通過幾十年的努力由于植物 發育，生理生化，分子遺傳等學科的迅速發展，使人們
基因的克隆就是利用體外重組 技術，將特定的基因和其它DNA順序插入到載體分子中。基因克隆的主要目標是識別、分離特異基因并獲得基因的完整的全序列，確定染色體定位，闡明基因的生化功能，明確其對特定性狀的遺傳控制關系。通過幾十年的努力由于植物發育，生理生化，分子遺傳等學科的迅速發展，使人們
人類基因組計劃的主要任務之一就是要從大片段基因組區域或整條染色體DNA 上鑒定出基因表達序列(gene expressed sequences)或轉錄單位(transcription units)。在人類基因組30億個堿基對中，發生轉錄的表達序列(即基因)僅占總序列的3～5％。基因組中絕大部
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最
基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。1 根據已知序列克隆基因對已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最
真核生物中，從個體的生長、發育、衰老、死亡，到組織的得化、調亡以及細胞對各種生物、理化因子的應答，本質上都涉及基因的選擇性表達。高等生物大約有30000個不同的基因，但在生物體內任意8細胞中只有10%的基因的以表達，而這些基因的表達按特定的時間和空間順序有序地進行著，這種表達的方式即為基因的差異表達
Gateway技術提供以下可能： 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間 同時將您的基因轉移到多個表達系統 在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達一、一種更好的克隆方法Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統（圖1）。這項強大的體
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。 基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DN
基因載體是基因工程的核心，也是基因治療中強有力的生物工具，我們先來認識和閱讀載體圖譜吧。 一、載體分類及載體組成元件 載體分類 1、按屬性分類：病毒載體和非病毒載體 病毒載體是一種常見的分子生物學工具，可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入目的細
基因載體是基因工程的核心，也是基因治療中強有力的生物工具，我們先來認識和閱讀載體圖譜吧。 一、載體分類及載體組成元件 載體分類 1、按屬性分類：病毒載體和非病毒載體 病毒載體是一種常見的分子生物學工具，可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入目
通過外源DNA的重組、克隆、以及鑒定，可以獲得所需的特異DNA克隆。外源克隆基因在某種表達載體及適宜的宿主細胞中可表達為相應的蛋白質，這就組成了外源基因的蛋白表達系統。表達后的蛋白質必須具有原來的生物學活性，這是基于正確的基因轉錄、轉錄后加工、mRNA翻譯及翻譯后修飾，同時與表達載體的結構和表達體系
1 基因芯片技術分離目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介質上的生物信息分子的微列陣。列陣中每個分子的序列及位置都是已知的，并按預先設定好的順序點陣。基因芯片是生物芯片的一種，其上固定的是核算類物質，主要用于DNA、RNA分析。分為DNA芯片和微點陣兩種。分離目的基因是是指從基因組中發現或找出某個
狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90～180 Kb之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。 桿狀病毒只來源于無脊椎動物，雖然已發現600多種桿狀病毒，但進行
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進
1．克隆已知序列的基因 根據已知基因的序列設計引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同種屬之間，基因編碼區序列的同源性高于非編碼區的序列。在某種植物的同源基因被克隆的條件下，可先構建eDNA文庫或基因組文庫，然后以該基因(或部分序列)為探針來篩選目的基因的克隆。 2．功能克隆 根據基
第二軍醫大學細胞生物學教研室；上海200433 何志穎；姚玉成（綜述）；胡以平（審校）關鍵詞：EST技術；“電子”基因克隆；生物信息學；基因摘要： 隨著人類基因組計劃的順利進行，EST技術被廣泛應用于基因識別、繪制基因表達圖譜、尋找新基因等研究領域。利用人類基因組研究不斷產生的數據，從ES
日前，使用名為“基因捕獲”(gene trap)的技術，奧地利的研究人員建立了一個人類單倍體細胞庫，這個細胞庫匯集了3000 多種細胞系，每個細胞系都具有一種不同的突變基因。相關的研究論文發表在8月25日的Nature Methods雜志上。渥太華大學教授William Stanford
1體外TNTRT7 轉錄/翻譯系統表達重組基因體外翻譯是研究基因表達、基因調控的一類重要技術，該技術可廣泛用于基因表達量、啟動序列等調控因子的確立，并結合PTT實驗篩選天然突變或人工誘變的基因片段，還可用來進行蛋白和DNA結合方面的研究。早期的體外翻譯研究大多是提取mRNA然后通過網織紅細胞或麥胚系
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
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大腸桿菌表達系統最突出的優點是工藝簡單、產量高、周期短、生產成本低。然而，許多蛋白質在翻譯后，需經過翻譯后的修飾加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等過程才能轉化成活性形式。大腸桿菌缺少上述加工機制，不適合用于表達結構復雜的蛋白質。另外，蛋白質的活性還依賴于形成正確的二硫鍵并折疊成高級結構，在
1．克隆已知序列的基因根據已知基因的序列設計引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同種屬之間，基因編碼區序列的同源性高于非編碼區的序列。在某種植物的同源基因被克隆的條件下，可先構建eDNA文庫或基因組文庫，然后以該基因(或部分序列)為探針來篩選目的基因的克隆。2．功能克隆根據基因的產物
自上世紀70年代基因工程技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今日已取得令人矚目的成就 。隨著人類基因組計劃的完成，越來越多的基因被發現，其中多數基因功能不明。利用表達系統在哺乳動物細胞內表達目的基因是研究基
1 轉座子及轉座子標簽法克隆基因基因標簽法克隆植物組織中的基因是較為常用的一種方法，T-DNA和轉座子均可作為基因標簽。轉座子最早由美國的細胞遺傳學家Mc- clintock在玉米中發現，它是指基因組中一段特定DNA片段，能在轉位酶的作用下從基因組的一個位點轉移到另一個位點。轉座子不僅能在本基因
1 轉座子及轉座子標簽法克隆基因基因標簽法克隆植物組織中的基因是較為常用的一種方法，T-DNA和轉座子均可作為基因標簽。轉座子最早由美國的細胞遺傳學家Mc-clintock在玉米中發現，它是指基因組中一段特定DNA片段，能在轉位酶的作用下從基因組的一個位點轉移到另一個位點。轉座子不僅能在本基因組中轉