從免疫血清純化抗體
從免疫血清純化抗體1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移去Buffer A，用新鮮的Buffer A 洗一次，將膜浸沒于0.8-1 ml 相應的抗血清中，1-2 h, 于混勻器上輕輕震蕩混勻。5． 移去血清，用PBS 洗膜，4 次，每次5 min。6． 洗脫抗體新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗體洗脫液，將膜置于洗液中，手輕搖混勻2 min，迅速將洗液轉移至裝有100 μl 1 M Tris（pH 8.0）中和，使抗體復性。第1 次洗脫用400 μl 抗體洗脫液，第2，3 次用200 μl。7． 往洗脫下來的液體中加入100 μl Buffer A 以穩定抗體，并分裝成30 μl......閱讀全文
從免疫血清純化抗體
1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移去Buffer
從免疫血清純化抗體
從免疫血清純化抗體1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于濾紙上干燥。3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。4． 移
從免疫印跡到抗體純化
一、材料和試劑 1. ?PVDF或硝酸纖維素膜（Amersham，GEhealthcare）2. ?透析袋（PierceCat#68035）3. ?麗春紅S（Sigma，Cat#P7170）4. ?脫脂奶粉（Carnation，any your favorite brand in local st
抗體純化
Antibody PurificatioinPurification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose?(KPL)?Purifying Antibodies?(Perkin-Elmer)Precipitation MethodsProtein
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
抗體的純化實驗
實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白
抗體純化方法介紹
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
IgG抗體純化實驗
雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行。在大多數錆況下，運鐵蛋白可發生共沉淀或共純化，能用凝膠濾過層析去除之。實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.
IgG抗體純化實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 SAS儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不間斷地攪拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 離心20 min。?2. ?用預冷的33% SAS溶液在漩渦混合
抗體的純化實驗
實驗方法原理利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從金黃色化膿性葡萄球菌和 G 組鏈球菌分離純化。它們能特異結合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它們對不同的免疫球蛋白有不同的親和力，所以應根據免疫球蛋白的種類和類
抗體的純化實驗
抗體的純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用細菌胞壁蛋白的特性可以提供了一個快速、簡捷、特異、高效的抗體純化方法。這里細菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G，它們分別從
親和層析－－抗體純化
蛋白 A（Protein A）瓊脂糖微球蛋白 A（Protein A）是金黃色葡萄球菌的細胞壁成分。它由一條多肽鏈組成，其中包含五個抗體結合結構域。這些高親和力結合域和免疫球蛋白 G（IgG）的 Fc 區域特異性結合。其他類型如 IgA 和 IgM 可能可以通過和 抗體 Fab 片段相互作用與蛋白
IgG抗體純化實驗2
實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?準備好一根DEAE-Affi-Gel Blue柱子。用5倍柱床體積的加樣緩沖液平衡（7 ml 柱床體積/ml 抗血清或腹水）。此步驟及以下各步均在4℃下操作實施。2. ?于4℃下透析樣品40 h，中間換2次加樣緩沖液（每次換大約4
多克隆抗體純化實驗
實驗材料 動物血清樣品試劑、試劑盒 正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材 透析袋高速低溫離心機實驗步驟 一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高速低溫離心機?二、操作步驟?1. ?將待提取樣品用60 mmol/L，pH4.0醋
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。一、原理蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。?一、原理?蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
純化RNA實驗——從培養的細胞中純化總RNA
實驗材料細胞試劑、試劑盒RNA 提取緩沖液變性液水飽和酚儀器、耗材培養皿Falcon 2063 管實驗步驟1. 取 1 個細胞已長滿的 100 ml 培養皿，吸出培養液，加 2 ml RNA 提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細胞。RNA 提取緩沖液：變性液，20 mlβ-巰基乙醇，0.144 ml2 mo
從包涵體中純化表達蛋白
實驗方法原理蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細菌經離心濃縮后，可通過機械法、超聲處理法或溶菌酶加去污劑的方法進行裂解。包涵體經離心沉淀后，可用Triton X-100
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
從包涵體中純化表達蛋白
實驗材料 表達靶蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液 I細胞裂解緩沖液Ⅱ脫氧膽酸濃鹽酸包涵體溶解緩沖液 I包涵體溶解緩沖液ⅡKOHPMSFSDS 凝膠加樣緩沖液含尿素的 Tris-ClDNaseI溶菌酶SDS-聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 Sorvall GSA 轉頭或相當的轉頭pH 試紙磨光
從包涵體中純化表達蛋白
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細菌經離心濃縮后，可通過機械法、超聲處理法或溶菌酶加去污劑的方
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（
單克隆抗體的純化
實驗方法原理 葡萄球菌蛋白 A 可以結合數種哺乳類動物的免疫球蛋白。蛋白質 A-瓊脂糖介質可以結合部分 IgM、大部分 IgGl 及幾乎所有的 IgG2a、IgG2b 和 IgG3 MAb。實驗材料 腹水（單克隆抗體）試劑、試劑盒 蛋白 A-瓊脂糖 CL-4BTr1s 緩沖液 pH 8.6檸檬酸鹽緩
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
抗原和免疫血清的制備實驗——抗人血清抗體的制備
實驗材料家兔試劑、試劑盒羊毛脂石蠟油卡介苗生理鹽水儀器、耗材研缽離心機培養箱實驗步驟1. ?弗氏佐劑的制備將羊毛脂與石蠟油按1：5比例混合，高壓滅菌。2. ?人血清—弗氏完全的制備將滅菌佐劑一份置研缽中，邊研磨邊滴加等量的含卡介苗3—4毫克/毫升的抗原液，使成油色水乳劑，研磨要充分，使乳劑滴入冰水中
抗原和免疫血清制備實驗—抗紅細胞抗體（溶血素）制備
實驗材料家兔試劑、試劑盒紅細胞懸液生理鹽水阿氏液儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1.? 紅細胞懸液的制備（1） 采血采取的綿羊血與滅菌的保存液等量混合，置冰箱中，可保存數周，也可用抗凝方法（2） 洗滌血球先將抗凝血液離心沉淀（2000 cpm×5分鐘）吸去上清。加入2~3倍的生理鹽水并用毛細滴管反復吹
辛酸提取法純化多克隆抗體
該法可用于分離提取人、兔、小鼠血清中的Ig及雜交瘤誘生的腹水和培養上清液中McAb。 【材料和試劑】? （1）正辛酸。? （2）60mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS。? （3）透析袋。? （4）高速低溫離心機。? 【操作步驟】 （1）將待提取樣品用60mmol/L，pH4.0
單克隆抗體的純化實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液儀器、耗材超濾器濾膜實驗步驟1. ?將10 ml 經CNBr活化Sepharose 4B溶脹于1 mmol/l HCl中，然后轉移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶聯緩沖
單克隆抗體的純化實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris腹水液寧酸鹽緩沖液甘氨酸乙酸鹽緩沖液儀器、耗材 超濾器濾膜實驗步驟 1. ?將蛋白A-Sepharose置于Tris緩沖液中（超過50倍的量，v/v）充分溶脹。在室溫下將其灌入直徑為2.5 cm 玻璃層析柱中，用Tris緩沖液使其平衡。2. ?腹水濃稀釋于3倍體