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通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA 片段化。在預實驗中，建立了適宜的部分酶切條件。對于將用于克隆的基因組 DNA 來說，預實驗的結果確定了對其進行制備的三個大規模反應的條件，這將在本方案敘述。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理通過限制酶部分酶切可將高分子質量 DNA 片段化。在預實驗中，建立了適宜的部分酶切條件。對于將用于克隆的基因組 DNA 來說，預實驗的結果確定了對其進行制備的三個大規模反應的條件，這將在本方案敘述。實驗材料限制性內切核酸酶基因組 DNAλ 噬菌體 DNA質粒寡聚體試劑、試劑盒乙酸銨乙醇正丁醇酚：氯仿乙酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TETris-Cl儀器、耗材瓊脂糖凝膠Beckman SW28 或相當型號透析袋梯度分級分離設備蔗糖梯度實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨（10 mol/L）乙醇正丁醇酚：氯仿（1:1, V/V）乙酸鈉（3 moI/L, pH 5.2)蔗糖凝膠上樣緩沖......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
實驗材料 大腸桿菌菌株 HB101 質粒 pSPL3 COS-7 細胞 載體 pBluescriptⅡ
為加強第二代測序技術檢測試劑的規范和指導，進一步保證和提高相關產品的質量，8月8日，中國食品藥品檢定研究院（中檢院）組織制定了《第二代測序技術檢測試劑質量評價通用技術指導原則》（下稱《指導原則》）。 該文件是中檢院發布的首個質量評價技術指導原則，旨在對產品設計、研發及驗證的各關鍵環節進行規范，
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
一．前言 本指導原則主要針對第二代測序（next generation sequencing，NGS）技術檢測試劑（以下簡稱“NGS檢測試劑”）產品質量提出指導性要求，涉及基本原則、主要原材料、檢測流程及性能評價等方面。 本指導原則是對企業和檢驗人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
實驗材料 λ噬菌體臂 大腸桿菌菌株 用于λ噬菌體的包裝抽提物 試劑、試劑
在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
實驗步驟 ##一、 cDNA 宏陣列的樣品制備培養基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 養 基（GibcoBRL， Rockville, MD), I : 1000(V /V ) Hyponex肥 料（Hypon
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中
實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌
一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
實驗四 逆轉錄PCR (RT-PCR )【實驗目的】1．了解用逆轉錄PCR 法獲取目的基因的原理。2．學習和掌握逆轉錄PCR 的技術和方法。【實驗原理】聚合酶鏈式反應（PCR）過程利用模板變性，引物退火和引物延伸的多個循環來擴增DNA序列。因為上一輪的擴增產物
進化遺傳學具有兩個并列的研究方向：系統發育的重建和種群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來，各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內， 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應
從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工等一系列問題。總之
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
1、核酸抽提原理 簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的，這些編碼區叫做外元（exon）。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后，經過剪切和拼接，去掉這些非編碼區，才形成成熟
1．RNA的提取 RNA的提取其實原理很簡單：通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經過沉淀，洗滌，晾干，zui后溶解。但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。 1．1分離高質量RNA 成功的cDNA合成來
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式