WIKI資訊
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材cDNA 合成試劑盒實驗步驟階段一：在真核表達載體上構建 cDNA 文庫材料緩沖液與溶液10X 限制性內切核酸酶緩沖液酶及緩沖液限制性內切核酸酶見步驟 3核酸與寡核苷酸通過 poly(A)+富集的 mRNAmRNA 須提取自表達目標蛋自活性的細胞或組織，并經兩輪 oligo(dT)-纖維素親和層析純化（見第 7......閱讀全文
實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
實驗材料 λ噬菌體臂 大腸桿菌菌株 用于λ噬菌體的包裝抽提物 試劑、試劑
提要 染色體顯微切割技術是細胞遺傳學與分子遺傳學相結合的一項橋梁技術。近年來，該技術在同源基因的定位和克隆的價值深受關注。本文結合顯微切割的經驗，對其應用和新進展進行了綜述。 完成人類基因組計劃的全序列分析，需要構建基因高
在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。實驗材料 T4 噬菌體 DNA 連接酶牛小腸堿
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titanium第二代
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，可用于（1）作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率（2）作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白（3）研究桿狀病毒基因組的結構與功能（4）研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13
自2013年Science雜志將CRISPR技術選為年度突破開始，這一新技術就給基因編輯世界帶來一場風暴：在過去的這一年半時間里，CRISPR方法已迅速席卷了整個動物王國，成為DNA突變和編輯的一種明星技術。 國內外各大生物實驗室的科學家們紛紛嘗試利用這種技術進行攻關，近期來自北京大學生命
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、克隆
近年來，生物藥的市場需求逐年擴容，其中抗體藥物因其靶向性好，治療效果顯著，在生物藥中占據著舉足輕重的地位，目前已經進入了抗體藥物發展的黃金時代。隨著抗體藥的需求越來越大，抗體篩選技術的發展也是日新月異，目前應用較普遍的有雜交瘤技術、抗體文庫篩選技術、納米抗體技術和轉基因小鼠抗體篩選技術。其中抗體
隨著戊型肝炎病毒(HEV)分子克隆技術的成功建立，HEV分子生物學的研究取得了極大進展，與之相關的HEV檢測方法也正在不斷完善。該方法包括兩方面，即采用基因工程重組抗原建立的抗體診斷方法，以及采用逆轉錄——聚合酶鏈反應(RT-PCR)建立的基因診斷方法，分別檢測抗HEV及HEV RNA。1 抗HE
隨著基因工程的發展，常常需要構建一種能高水平表達異源蛋白質的表達載體。啟動子對外源基因的表達水平影響很大，是基因工程表達載體的重要元件。因此研究啟動子的克隆方法，對研究基因表達調控和構建表達載體至關重要。迄今為止，國外尚未見到有關啟動子克隆方法的綜述性報道，國內僅孫曉紅等曾就啟動子的結構、分類、克隆
免疫PCR技術（Immuno-PCR） 免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年將免疫學反應和PCR技術相結合而創建的一種新的檢測技術，具有抗原、抗體反應的特異性和PCR技術的高效性。它運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應的特異性，使實驗中只需數百個抗原分子即
1 植物群體遺傳蛋白質組學 1.l 遺傳多樣性蛋白質研究基于基因組學的一些遺傳標記，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
一、受體細胞 ：受體細胞的選擇是否合適將關系到能否表達，特別是高效表達。首先要注意不同的表達載體與受體細胞的關系，即原核表達載體適合原核細胞，真核載體則適合真核細胞，而農桿菌僅適用于植物細胞。即使大腸桿菌質粒，也應注意選擇合適的菌種。例如，當用含有T7 噬菌體啟動子的載體表達外源基因時，由于T7
2.3病原生物學與免疫隨著海洋環境逐漸惡化和海水養殖的規模化發展，病害問題已成為制約世界海水養殖業發展的瓶頸因子之一。開展病原生物（如細菌、病毒等）致病機理、傳播途徑及其與宿主之間相互作用的研究，是研制有效防治技術的基礎；同時，開展海水養殖生物分子免疫學和免疫遺傳學的研究，弄清海水魚、蝦、貝類的免疫
一種siRNA分子(紫色和綠色部分)可能治療遺傳性肝臟疾病 RNA干擾(RNAi)，基因沉默技術的一種，顯示了疾病治療的巨大潛力，但從來沒有人能確切證實它對疾病治療所能發揮的作用。但是現在RNAi已經逐漸獲得了研究人員的一致好評。一項新的研究表明，該方法能夠顯著并安全地削弱導致一種罕見的肝臟疾
這一經典的蛋白相互作用研究方法接近于體內環境，那些瞬時、不穩定的兩兩相互作用也可以被檢測到，并且與內源蛋白的表達無關[6]。鑒于這些優點并結合簡便高效的Gateway表達載體構建方法[7]，在大規模的蛋白質－蛋白質相互作用研究中酵母雙雜交系統得到了最為廣泛的應用。Rain 等[8]用該法繪