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（一）DNA的凝膠電泳：凝膠電泳是分子克隆的中心技術之一。瓊脂糖凝膠用于分離大于200～1000bp的片段;操作簡單、快速，且分離范圍廣，分辨率高。2.聚丙烯酰胺凝膠用于分離5－500bp的片段; 效果好、分辨率極高，相差1bp的DNA片斷就能分開，能容納相對大量的DNA ，用于核苷酸多態性的分析。瓊脂糖凝膠電泳的基本過程材料：電泳緩沖液（常用TAE或TBE）、電泳級瓊脂糖、溴化乙錠溶液（核酸顯示劑）、加樣緩沖液（保證核酸不在加樣孔中擴散和用于電泳時間的指示系統）、水平凝膠電泳裝置及制膠系統、直流電源系統。基本過程：制膠→放入電泳槽中并加入電泳緩沖液→取出梳子→將適量的核酸樣品和上樣緩沖液混合并上樣于加樣孔中→一定電壓條件下電泳→合適的時間后停止電泳→取出凝膠進行溴化乙錠染色→凝膠成像系統紫外燈下觀察并照相保存結果注意：溴化乙錠具有致癌性，操作時要帶手套；不同濃度瓊脂糖的凝膠分離范圍；影響DNA在凝膠中遷移速率的因素：1、DNA......閱讀全文
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
細胞內的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質結合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色體DNA
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
分子生物學產品常見問題分析問題原因解決辦法DNA完全沒有被內切酶切割1) 內切酶失活標準底物檢測酶活性2) DNA不純，含有SDS，酚，EDTA等內切酶抑制因子將DNA過柱純化，乙醇沉淀DNA3) 條件不適（試劑、溫度）檢查反應系統是否最佳4) DNA酶切位點上的堿基被甲基化換用對DNA甲基化不敏感
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
（四）核酸的濃縮、沉淀與洗滌隨著核酸提取試劑的逐步加入，以及去除污染物過程中核酸分子不可避免的丟失，樣品中核酸的濃度會逐漸下降，及至影響到后面的實驗操作或不能滿足后繼研究與應用的需要時，需要對核酸進行濃縮。沉淀是核酸濃縮最常用的方法，其優點在于核酸沉淀后，可以很容易地改變溶解緩沖液和調整核酸溶液至所
分子生物學是在生物化學基礎上發展起來的，以研究核酸和蛋白質結構、功能等生命本質的學科，在核酸、蛋白質分子水平研究發病、診斷、治療和預后的機制。其中基因工程（基因技術，基因重組）是目前分子生物學研究熱點，這些技術可以改造或擴增基因和基因產物，使微量的研究對象達到分析水平，是研究基因調控和表達的方法，也
1、核酸抽提原理 簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
幼嫩組織的細胞處于旺盛的分裂階段，核較大而胞質較少，核酸濃度高，且內含物少、次生代謝產物少，蛋白質及多糖類物質相對較少，在SDS或 CTAB物質存在時，經機械研磨，使細胞破裂并釋放出內含物，提取的DNA、RNA的產量高，純度好。 提取DNA所用的提取液、吸頭、離心管等需要高壓滅菌以滅活DN
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定 DNA、RNA 分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用 DNA 分子在電場中時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA 分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA 分
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定 DNA、RNA 分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用 DNA 分子在電場中時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA 分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
實驗方法原理 三種不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用來進行 RNA 定量，確定內含子位置，以及用來鑒定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5'
酶切基礎知識DNA酶切一般分為質粒直接酶切和PCR產物酶切第一節 DNA酶切及凝膠電泳 一.DNA的限制性內切酶酶切分析 限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在
核酸純化在分子生物學實驗室已經廣泛應用。怎樣獲得高質量、高純度的DNA或RNA樣品對下游實驗的順利進行至關重要，因此，對純化后的核酸進行鑒定也是必不可少的步驟。本文簡單的回顧學習一下核酸鑒定的方法。核酸鑒定包括：濃度/純度鑒定+完整性鑒定 1.濃度/純度鑒定 （1）紫外分光光度計：原理：由于核酸中的
一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80%）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現象，
分子生物學試驗方法探討二－瓊脂糖凝膠電泳技術 分子生物學試驗方法探討二－瓊脂糖凝膠電泳技術、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80%）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊
三種不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用來進行 RNA 定量，確定內含子位置，以及用來鑒定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5' 端和 3' 端的位置。當檢測 RNA 被雜交到 DNA 模板上時，用核酸酶 S1 進行保護試驗的分析；當檢測 RNA 被雜交
2．核酸的分離純化 從細胞中提取核酸后，仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程，也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙，現普遍采用加入去污劑或加入E
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242
凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）可以：（1）研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初
實驗方法原理 三種不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用來進行 RNA 定量，確定內含子位置，以及用來鑒定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5' 端和 3' 端的位置。當檢測 RNA 被雜交到 DNA 模板上時，用核酸酶 S1 進行保護試
一、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80%）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現象，加之硫酸根可與
實驗概要掌握RNA提取的基本技術，了解RNA提取過程中的各種注意事項。實驗原理RNA提取是分子生物學實驗中難度較大的實驗技術。 RNA提取和DNA提取有類似的地方，因為它們都是核酸，都具有較好的水溶性。提取RNA首先破碎細胞，然后用提取液將RNA溶出，反復抽提去除蛋白質，加入乙醇沉淀RNA
分子生物學試驗方法探討二－瓊脂糖凝膠電泳技術分子生物學試驗方法探討二－瓊脂糖凝膠電泳技術、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80%）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧
從細胞中提取核酸后，仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程，也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙，現普遍采用加入去污劑或加入EDTA、8-羥基喹啉、檸