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人胚腎 293 (HEK293) 細胞在重組蛋白表達中是最常見的宿主細胞。 這類細胞能夠表達大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶聯受體 (GPCR) ，是無法在最常見的生物制藥生產宿主，如：中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞中作表達。 HEK293 雖然是蛋白表達的極好宿主，然而 HEK293 細胞在大規模懸浮培養細胞其結團的問題限制了其在生物過程中的使用。近來許多公司都開發了特殊的培養基配方和抗結團劑，以協助解決這個問題。本文為一成功案例利用 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床進行人類重組蛋白表達的HEK293細胞系從血清貼壁培養馴化至無血清單細胞懸浮培養。馴化過的HEK293細胞系如同典型不結團的懸浮細胞系。我們預期這類細胞系能在生物過程中進行標準的批次或流加培養，如同傳統的CHO細胞在攪拌式生物反應器進行擴增培養。Solving the Aggregation Problem......閱讀全文
人胚腎 293 (HEK293) 細胞在重組蛋白表達中是最常見的宿主細胞。 這類細胞能夠表達大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶聯受體 (GPCR) ，是無法在最常見的生物制藥生產宿主，如：中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞中作表達。 HEK293 雖然是蛋白表達的極好宿主，然而 H
制藥公司的管線充滿了生物藥物。許多是創新的治療蛋白質，但越來越多的代表生物仿制藥和biobetters（圖1）（1）。biobetters通常被定義為“基于創新生物制品，但具有改進的性質”（2）。 他們的發展受益于已知的治療方法和作用機制，從而導致低風險，快速通向臨床，從而降低成本。優勢是通過延
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
在細胞生物學中，一個常見的問題是如何獲取與細胞功能相關的各種定量測量信息。在免疫細胞化學中也存在同樣的問題。制作免疫細胞化學標本環節 較多，只要有一個環節 失誤就會影響實驗結果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術。那么，做成了理想的標本后，如何進行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些
在細胞生物學中，一個常見的問題是如何獲取與細胞功能相關的各種定量測量信息。在免疫細胞化學中也存在同樣的問題。制作免疫細胞化學標本環節 較多，只要有一個環節 失誤就會影響實驗結果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術。那么，做成了理想的標本后，如何進行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗 實驗步驟
1、核酸抽提原理 簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
艾滋病(AIDS)又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種免疫缺陷性疾病。HIV感染的診斷是艾滋病預防控制 工作的重要組成部分，建立敏感實用的檢測方法對于監測、診斷或血液篩查，控制艾滋病的流行顯得尤為重要。以下本文就HIV的檢測技術現狀及進展做一綜述。1
基因組編輯技術CRISPR/Cas9被《科學》雜志列為2013年年度十大科技進展之一，受到人們的高度重視。CRISPR是規律間隔性成簇短回文重復序列的簡稱，Cas是CRISPR相關蛋白的簡稱。CRISPR/Cas最初是在細菌體內發現的，是細菌用來識別和摧毀抗噬菌體和其他病原體入侵的防御系統。
二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白質翻譯（W
SSR分子標記實驗: PCR反應實驗操作注意事項:PCR 反應過程中應特別注意不要使樣品相互污染， 以免造成試驗結果不準確， 同時也要注意所加試劑或樣品必須是經過混勻后的液體， 這樣才能保證反應液各成分的濃度和體積的均一性 所用試劑需從正規商家購進， 以保證試劑的質量。BEAS-2B細
實驗步驟 一、常規操作方案 下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Bu
實驗步驟一、常規操作方案下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他類似的流程也可能
圖a. 用ELISA法測得培養液中IgG的含量；橫軸為天數，縱軸為IgG滴度。 采用高密度瞬時轉染（High-density transfection）的方法，可以在HEK-293 EBNA1細胞中大量表達重組蛋白。實驗表明，該方法具有操作簡單，培養周期短，轉染效率高，批次產量高的優
當你讀到這篇文章時，又一波CRISPR工具將會浮出水面。它們將需要接受測試和優化。不過，如果你詢問開發者你在開展概念驗證研究時是否應當試用它們時，你將僅獲得鼓勵。畢竟，迄今為止它們還不能從Addgene公司獲得，但是將會很快上市了。 最新發布的一系列CRISPR工具包括新的譜系追蹤方法，該方法
問世間誰人無憂，唯神仙逍遙自在。 作為一名終日泡在實驗室的實驗君， 如何在細胞實驗中無所不能，超脫輪回 做到一個人人羨慕的細胞大神呢？ 且看向這里，成為細胞大神的六個細節。 1. 過濾體系 自從出現瓶裝培養基之后，培養基過濾的需求就減少了。有些時候，一些特定細胞培養支持物的添加可能
問世間誰人無憂，唯神仙逍遙自在。作為一名終日泡在實驗室的實驗君，如何在細胞實驗中無所不能，超脫輪回做到一個人人羨慕的細胞大神呢？且看向這里，成為細胞大神的六個細節。 1. 過濾體系 自從出現瓶裝培養基之后，培養基過濾的需求就減少了。有些時候，一些特定細胞培養
在細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞不貼壁可能原因： ?胰蛋白酶消化過度；?支原體污染；?培養基pH值過堿（NaHCO3分解）；?細胞老化；?接種細胞起始濃
創建低溫保存T細胞庫和冷凍培養基配方創建細胞庫對本研究而言非常重要， 因為在進行廣泛研究時， 購買多瓶原代人類 T細胞會使得成本過高。 一旦發現T細胞擴增的最佳條件， 便選擇一包密度最高、 生存能力最強的Evolve袋復凍回細胞庫中。 低溫保存的培養基配方如表2所示。 首先，向已用培養基的細
在New Brunswick S41i CO2恒溫搖床內采用透氣袋實現人類T細胞快速擴增摘要近年來細胞治療領域取得的進步大大提升了對T細胞擴增技術的需求。 T細胞必須能夠迅速擴增， 才能在維持高存活率和T細胞屬性的同時達到高細胞密度。 攪拌罐生 物反應器是實現大規模擴增的最佳細胞培養工具之一。
不僅如此，奧豪斯的每一款搖床都有其獨特之處，以適應不同實驗的需求。為此，專為適應實驗室極端環境的分體式搖床誕生了！能實現精準溫度控制的冷凍式恒溫搖床也出現了！可以在大負載振蕩實驗下保證準確的速度控制和振蕩一致性的大負載圓周式搖床也應運而生！ 極端環境
慢病毒作為基因載體在治療各類遺傳性和后天性的人類疾病中倍受歡迎。從基礎研究發展到臨床階段，高濃度純化的載體需求量越來越大，相應的方法也層出不窮。目前大多數慢病毒的生產是在方瓶、平皿等體系中加入胎牛血清貼壁培養HEK293細胞系（293T和293E），通過多質粒瞬時轉染包裝得到病毒，但是該方法難以
對恒溫培養振蕩器的轉速和溫度實行精確控制的技術探討唐新南 沈水興 嚴廣號，上海智城分析儀器制造有限公司 上海~恒溫培養振蕩器（以下簡稱：恒溫搖床）是醫學、生物學、分子學、制藥、食品、環保等研究應用領域有著重要應用的樣品前處理設備。鑒于作為樣品的細菌、細胞等微量活性物質在生長過程中需要一個優良的生長環
免疫細胞化學的發展對許多領域的研究起到很大的推動作用，在神經科學的研究中尤為突出。本章 僅就免疫細胞化學在神經科學的基礎研究方面的應用做一簡要介紹。 一、確定神經遞質的性質、定性和分布 早期的神經科學工作者應用傳統的神經解剖學研究方法如甲基藍染色法、鍍銀染色法等對中樞及外周神經系統的結構做了大量
《Cell Stem Cell》雜志是2007年Cell出版社新增兩名新成員之一(另外一個雜志是Cell Host & Microbe)，這一雜志內容涵蓋了從最基本的細胞和發育機制到醫療軟件臨床應用等整個干細胞生物學研究內容。這一雜志特別關注胚胎干細胞、組織特異性和癌癥干細胞的最新成
實驗步驟 總蛋白質的檢測 1. 總蛋白質色度法染色 簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀
微生物檢測涉及多行業和領域，在實驗室檢測中有著重要的地位，今天和大家一起對微生物檢測中的一些基礎操作進行匯總和梳理！ 接種將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種。接種和分離工具1. 接種針 2.接種環 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.
常規的轉染包括脂質體，電轉化和病毒法。普通的293、Hela等細胞系，脂質體轉染也能達到70-80%。而對于其他一些極難轉染的細胞，如原代神經元，原代神經干細胞，免疫細胞等來說，脂質體轉染不僅轉化效率很低（約10%），而且細胞死亡率極高。因此有些研究人員不得不轉用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法。病
來自國家自然科學基金委員會的消息，國家自然科學基金委員會公布了2012年度面上項目、重點項目、重大國際(地區)合作研究項目、青年科學基金項目、地區科學基金項目、海外及港澳學者合作研究基金項目、科學儀器基礎研究專款項目等方面的評審結果。有關評審結果將通知相關依托單位，其科研管理人員可登錄