免疫印跡western實驗中內參蛋白的選擇和注意事項
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、抗體問題啦（一抗有問題還是二抗有問題啦）……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達產物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴謹的 Western Blot實驗設計中要求有良好的參照體系，對實驗結果分析是非常有用。特別是當實驗出現問題時，借助參照體系很容易就可以查出問題所在，而不必抓耳撓腮怨天尤人。良好的參照體系通常包括分子量marker(用來確定蛋白條帶對應的分子量大小)、空白載體對照 (如果是誘導表達體系還應該有誘導前的對照)、已......閱讀全文
用核蛋白做western，選什么蛋白做內參照
當實驗樣品中只是核蛋白，而不是細胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H)，或者核纖層蛋白(nuclear lamina protein)等為核內參抗體。除了這些，其它常見的核蛋白內參還有K70, K80, Lamin A和B
總蛋白儀與內參的可靠性比較
目前，多個主流期刊和免疫印跡專家提出了看家基因已經不適合作為內參使用了。因為大多數看家基因都是高豐度蛋白，其產生的信號大多都會接近線性動態范圍的上限，當我們在檢測低豐度蛋白的時候，往往蛋白的上樣量會很大，易造成信號過飽和，這時候常見的內參產生的信號已經不能正確反應上樣量的差異了。并且研究發現一些看家
什么是內參,內參的作用是什么
內參就是取在一般細胞當中表達量較為穩定的基因，你的目的基因要與其進行比較。因為你每次的樣品不一定一樣，所以必須要有內參進行校正。要是內參沒有起峰，那這個數據基本沒用。
Azure總蛋白儀與內參的可靠性比較
目前，多個主流期刊和免疫印跡專家提出了看家基因已經不適合作為內參使用了。因為大多數看家基因都是高豐度蛋白，其產生的信號大多都會接近線性動態范圍的上限，當我們在檢測低豐度蛋白的時候，往往蛋白的上樣量會很大，易造成信號過飽和，這時候常見的內參產生的信號已經不能正確反應上樣量的差異了。并且研究發現一些
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
灰度值分析目的蛋白/內參比值大于1可以嗎
western blot結果的分析是一個主觀性比較強的過程western是一個半定量的實驗。所以一般是作為定性的驗證試驗首先要分析的就是有無目的蛋白的條帶，有無條帶就是一個定性的結果，這種分析是比較簡單。當然這其中還要綜合考慮內參等對照樣品。然后就是有條帶之后，各個條帶灰度值的分析，而對其灰度值的量
什么是內參基因
這個概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要檢測某個基因的表達，降低或者提高，但是當你得出結果以后，你并不知道是它本身的表達降低/提高了，還是你操作過程中造成的誤差（比如提RNA時的損失），所以這個時候需要同時檢測另外的基因作為參照。這個基因就是內參基因，這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因，
核內參PCNA抗體用于細胞核內參的PCNA單抗
增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen簡稱PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系統性紅斑狼瘡）患者的血清中首次發現并命名，因其只存在于正常增殖細胞及腫瘤細胞內而得名。PCNA是一種分子量為36KD的蛋白質，在細胞核內合成，并存在于
做定量pcr時內參GAPDH變化了，是不是要換個內參
可以換一個。其實很多藥物影響糖代謝，會改變GAPDH。建議試試PPIA（肽基脯氨酸異構酶），它與蛋白質表達有關，含量比較穩定，除靜息細胞外基本不變。
免疫印跡western實驗中內參蛋白的選擇和注意事項
免疫印跡western實驗中內參基因的選擇和注意事項 Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。 雖然，順利的時候Western blot做
免疫印跡western實驗中內參蛋白的選擇和注意事項
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
為什么選擇組蛋白H3為細胞核的內參指標？
為什么選擇組蛋白H3為細胞核的內參指標呢？當實驗樣品中只是核蛋白，而不是細胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H），或者增殖細胞核抗原（PCNA）等為核內參抗體。除了這些，其它常見的核蛋白內參還有K70， K80， Lamin A和B。但是需要注意的問題是核蛋白內參的選擇需要考
進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
進口內參抗體：在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。 期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳
常用內參抗體和標簽抗體
Anti-β-Tubulin，Anti-β-Actin，Anti-GAPDH，Anti-GFP Tag，Anti-RFP Tag 等Epitope Biotech Inc. 公司定制生產高品質的對特定表位有特異性的小鼠單克隆抗體，與其他公司生產的同類產品相比，具有最高的靈敏度和最高的特異性，并且性價
植物內參抗體該怎么選？
先來說說為什么要用內參抗體？內參抗體的真的是必要的嗎？ 我舉個例子，印度人和韓國人誰更富有？那還用說，當然是韓國人富有。 可是分明印度的GDP更高，為什么說韓國人更富有呢？ 那怎樣實現呢，如果我們能數一數細胞，不同的泳道上同樣數量的細胞是最好的，可是這實現不了。這時候我們就需要一個大致能代
血清western－blot怎樣選擇內參
由于血漿或血清中很難找到一個穩定表達的蛋白，常見的在組織中比較常用的內參蛋白如肌動蛋白，GAPDH等，嚴格講并不適合血漿或血清；可以考慮用立春紅染色 或考染做loading control（這種方法在不少文獻中都有報道，是大家認可的）Blood上有些文章 用的是立春紅染色做control
QPCR內參太高，什么原因
提取組織RNA反轉錄后做Q-PCR，選18S做內參基因。以前做一般都10個循環左右，最近這一批組織卻22個循環。溶解曲線也是好的，反轉錄體系也沒有問題（用以往的RNA同時反轉錄做Q-PCR，18S的CT值還是10左右）。提取RNA好像也沒有問題。我是分離了脂肪組織中的成熟脂肪細胞部分，確實不好提RN
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。?期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳的內參為全蛋白
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他的內參，人們的回答往往
肌動蛋白基因為什么可以作為熒光定量pcr的內參基因
肌動蛋白基因可以作為熒光定量pcr的內參基因的原因是：內參基因相當于一個標尺，具有校正作用，避免待測樣本回收率或者加樣誤差等因素帶來的差異。具有標準化作用，內參基因表達相對穩定，以其為參照，反應基因表達水平的變化。根據查詢相關信息顯示引入內參基因進行了歸一化處理，可以最大限度地減少樣本制備，處理時產
做RTPCR內參的作用
你說的應該是real time PCR吧，注意RT其實是逆轉錄reverse transcription的縮寫，和real time一定要分開來。常說的qPCR，qRT-PCR，都是通過實時（real time）的方法，測定樣品中某個模版的起始量ct值但是呢，由于之前RNA提取、反轉等步驟，各個步驟
人轉錄組測序內參標準物質
通過轉錄組測序獲得人的基因表達譜數據，能進一步挖掘疾病相關的生物標志物，為臨床診斷提供依據。目前，由于轉錄組測序無法溯源，導致不同實驗室及測序平臺產出的數據可比性和測序結果的準確性面臨挑戰。 中國計量科學研究院推出的人轉錄組測序內參標準物質，包含了51個內參基因組成的兩套基于比值的RNA內參混
如何挑選合適的βActin內參抗體？
如何選擇合適的β-Actin抗體？ 現在市場上對于內參抗體選擇是比較多，但是也需要遵循一定的原則，那怎么去找到適合自己實驗的β-Actin抗體呢？首先，我們需要考慮目的蛋白的大小，我們推薦內參要與檢測的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根據你目的檢測蛋白的分子量來選擇合適的內參，由于β-
內參基因拷貝數正常范圍
基因組DNA拷貝數變化在許多人類疾病如腫瘤、遺傳性疾病的發生發展中起重要作用，也是這些疾病的細胞遺傳學表現。染色體顯帶已被運用了幾十年，具有其高度的可靠性并成為染色體分析的金標準，但其分辨率低(約為5～10Mb)，需要中期細胞，操作費時。