目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基因的表達量就不可靠了管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。然后根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每一個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取RNA以后用DNase處理樣品。如果不放心，可以拿處理過的RNA做膜版，跑一次，如果有帶就是有污染，如果沒有可以合成cDNA庫了。......閱讀全文
什么是內參,內參的作用是什么
內參就是取在一般細胞當中表達量較為穩定的基因，你的目的基因要與其進行比較。因為你每次的樣品不一定一樣，所以必須要有內參進行校正。要是內參沒有起峰，那這個數據基本沒用。
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
pcr內參大小
初次做PCR，將反轉錄RNA濃度統一調整到900ng（20μl體系）后, 即45ng/μl。然后按照程序進行熒光定量PCR，但是在實際中，內參基因（β-actin）的CT值范圍從16-21不等。主要疑問有兩個，第一，內參CT值范圍多大合適，是一致才可靠嗎？第二，目的基因CT值，在實際測定中空白的CT
什么是內參基因
這個概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要檢測某個基因的表達，降低或者提高，但是當你得出結果以后，你并不知道是它本身的表達降低/提高了，還是你操作過程中造成的誤差（比如提RNA時的損失），所以這個時候需要同時檢測另外的基因作為參照。這個基因就是內參基因，這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因，
核內參PCNA抗體用于細胞核內參的PCNA單抗
增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen簡稱PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系統性紅斑狼瘡）患者的血清中首次發現并命名，因其只存在于正常增殖細胞及腫瘤細胞內而得名。PCNA是一種分子量為36KD的蛋白質，在細胞核內合成，并存在于
做定量pcr時內參GAPDH變化了，是不是要換個內參
可以換一個。其實很多藥物影響糖代謝，會改變GAPDH。建議試試PPIA（肽基脯氨酸異構酶），它與蛋白質表達有關，含量比較穩定，除靜息細胞外基本不變。
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
目的基因的Ct值小于內參基因，這個內參基因還能用嗎
如何通過熒光定量目的基因和GAPDH計算相對表達量內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果內參表達量一致，說明你PCR的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基
進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
進口內參抗體：在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗
植物內參抗體該怎么選？
先來說說為什么要用內參抗體？內參抗體的真的是必要的嗎？ 我舉個例子，印度人和韓國人誰更富有？那還用說，當然是韓國人富有。 可是分明印度的GDP更高，為什么說韓國人更富有呢？ 那怎樣實現呢，如果我們能數一數細胞，不同的泳道上同樣數量的細胞是最好的，可是這實現不了。這時候我們就需要一個大致能代
常用內參抗體和標簽抗體
Anti-β-Tubulin，Anti-β-Actin，Anti-GAPDH，Anti-GFP Tag，Anti-RFP Tag 等Epitope Biotech Inc. 公司定制生產高品質的對特定表位有特異性的小鼠單克隆抗體，與其他公司生產的同類產品相比，具有最高的靈敏度和最高的特異性，并且性價
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。 期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳
血清western－blot怎樣選擇內參
由于血漿或血清中很難找到一個穩定表達的蛋白，常見的在組織中比較常用的內參蛋白如肌動蛋白，GAPDH等，嚴格講并不適合血漿或血清；可以考慮用立春紅染色 或考染做loading control（這種方法在不少文獻中都有報道，是大家認可的）Blood上有些文章 用的是立春紅染色做control
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。?期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳的內參為全蛋白
QPCR內參太高，什么原因
提取組織RNA反轉錄后做Q-PCR，選18S做內參基因。以前做一般都10個循環左右，最近這一批組織卻22個循環。溶解曲線也是好的，反轉錄體系也沒有問題（用以往的RNA同時反轉錄做Q-PCR，18S的CT值還是10左右）。提取RNA好像也沒有問題。我是分離了脂肪組織中的成熟脂肪細胞部分，確實不好提RN
關于PCR內參基因選擇策略
關于內參基因的選擇很多初級的實驗人員很少會去思考這個問題，因為擺在面前的只有兩種選擇，β-actin和GAPDH，甚至在很多人長期的觀念中對于內參的認知也僅僅停留在是一個表達量相對較高較穩定的看家基因，對于分子層面相對表達量的一個重要參照而已，至于為什么要選這兩種，還有沒有其他的內參，人們的回答往往
做RTPCR內參的作用
你說的應該是real time PCR吧，注意RT其實是逆轉錄reverse transcription的縮寫，和real time一定要分開來。常說的qPCR，qRT-PCR，都是通過實時（real time）的方法，測定樣品中某個模版的起始量ct值但是呢，由于之前RNA提取、反轉等步驟，各個步驟
核酸采樣沒有內參是啥意思
用來說明試劑是有效的。內參就是用來說明試劑是有效的。所謂“內參”，就是在核酸檢測試劑盒中引入一個標志物，檢測時根據該標志物的數值來判斷采樣是否合格。內參是樣本中穩定表達的內源性物質，能反應樣本本身的內源生物的差異。
內參基因拷貝數正常范圍
基因組DNA拷貝數變化在許多人類疾病如腫瘤、遺傳性疾病的發生發展中起重要作用，也是這些疾病的細胞遺傳學表現。染色體顯帶已被運用了幾十年，具有其高度的可靠性并成為染色體分析的金標準，但其分辨率低(約為5～10Mb)，需要中期細胞，操作費時。
如何挑選合適的βActin內參抗體？
如何選擇合適的β-Actin抗體？ 現在市場上對于內參抗體選擇是比較多，但是也需要遵循一定的原則，那怎么去找到適合自己實驗的β-Actin抗體呢？首先，我們需要考慮目的蛋白的大小，我們推薦內參要與檢測的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根據你目的檢測蛋白的分子量來選擇合適的內參，由于β-
怎么選擇適合的GAPDH內參抗體？
在Western Bloting實驗中，在遇到總蛋白濃度測定不準確時候，或者蛋白質樣品在電泳前上樣時產生的樣品間的操作存在誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉到膜上的內參,比如內參GAPDH的含量來進行校正。??GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關鍵酶，由4個30-40kD
PCR實驗中內參基因的作用
1. 判斷樣品提取是否成功。假如你提取了總RNA然后再做逆轉錄得到cDNA，然后再去跑PCR發現沒有結果，是不是表示樣品中沒有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根據使用同一模板跑出的內參基因的結果才可判斷。內參基因的CT在一個合理范圍（比如20左右）的前提下，才能說明樣品制備沒問題，在這個前提下，做
定量Western－Blot內參質控的掌握技巧
?Western Blot是生物修煉的一大實驗，現在不做定量Western Blot，都不敢自詡學霸的了，暗暗擦汗的有沒有？在討論如何從Western Blot中獲得定量數據之前，先定義一下我們所說的“定量”是什么意思是非常有用的，何為定量，必須符合下列準則：?? 使用一個定義的過程進行檢測，即We
你的－WB－內參選對了么？
你的 WB 內參選對了么？ 關鍵詞： 科研 WB 內參 2019-08-14 17:00 來源：CST 點擊次數：19 ? ? 要想底氣十足地秀
Western－Blot內參的選擇不容忽視
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。因為Western Blot操作相對簡單方便，既可以定性分析表達產物，同時還可以指示目的蛋白量的相對變化。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――
western內參多條帶，是什么原因
western內參多條帶可能的原因有：抗體濃度過高；降低一抗、二抗的濃度。一抗的特異性不足；使用單克隆抗體。二抗的非特異性結合，不加一抗，其他操作不變，即可檢測出二抗的非特異性的條帶是否來自二抗的非特異性結合；此時需要重新選擇二抗。內參發生了降解，降解產物成為了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二
熒光定量PCR實驗中的內參基因
通常它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物。內參基因通常是持家基因（house-keeping gene）因為其表達水平受環境因素影響較小，而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續表達變化很小。常用的內參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti
常用的內參基因及其使用范圍
內參即是內部參照，它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物 你可以去生物幫那里了解這方面的信息，那兒技術文檔、視頻資源豐富，我很喜歡到那里找想要的東西，而且還有很多軟件可以下載，并且有軟件的教材。有時間可以去看看。 包括GAPDH 、β- actin(BETA-