在質粒載體中進行平末端片段的克隆實驗
克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產物，載體和目的 DNA 在連接反應中的比例必須適當。每一重組體中外源 DNA 的連接方向和插入數量都必須用限制酶酶切圖譜分析或其他方法加以鑒定。作為一般規律，如果連接反應中質粒和目的 DNA 摩爾數相等，而且 DNA 的總濃度少于 100 μg/ml。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產物，載體和目的 DNA 在連接反應中的比例必須適當。每一重組體中外源 DNA 的連接方向和插入數量都必須用限制酶酶切圖譜分析或其他方法加以鑒定。作為一般規律，如果連接反應中質粒和目的 DNA 摩爾數相等，而且 DNA 的總濃度少于 100 μg/ml，獲得一定數量的單體閉合重組子是可能的 ( Bercovich et al. 1992)。實驗材料T4 噬菌體 DNA 連接酶限制性內切核酸酶試劑、試劑盒ATP乙醇聚乙二......閱讀全文
miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L
核糖克隆實驗
這個方案只是用 RNA 酶處理 PCR 產物的一種方法。有很多可選擇和有效的途徑來純化 PCR 產物以除去引物，接著用酶處理 PCR 產物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR儀設置溫浴程序是很方便的。可以在加熱步驟完成后選擇加上“冷卻”步驟，即在冷模塊中放置 5 min 甚至過夜。本實驗來源于 P
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液 RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mm
miRNA－－克隆實驗
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarci
miRNA克隆實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶 平末
核糖克隆實驗
—、材料1. 緩沖液、溶液和試劑.10XATEN 緩沖液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化鈉0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜堿（SigmaB-2629)藍色葡聚糖（bluedextran)(SigmaD
細菌克隆的溶解實驗
細菌克隆的溶解實驗可以用于：（1）從表達特定融合蛋白質的重組噬菌體構建噬菌體溶源菌；（2）從該溶源菌誘導合成并純化出融合的目的蛋白質。實驗方法原理具有原噬菌體的細菌稱為溶原性細菌。噬菌體分為烈性噬菌體和溶原性噬菌體，在感染于寄主細菌細胞時，前者往往在菌體內增殖并將菌體裂解。實驗材料大腸桿菌噬菌體試劑
克隆載體的準備實驗
許多載體及其衍生物被開發出來用于克隆 PCR 產物，其中包括典型的 pBluescript 類載體。它們具有多克隆位點和簡化的多克隆位點，PCR-Script Direct 質粒也是這樣。簡化的多克隆位點允許使用者把常用的限制酶位點整合到 PCR 引物中，同時還避免了相同的目標序列同時出現在質粒載體
克隆串聯體實驗
試劑、試劑盒溶液與緩沖液LoTEcDNA標簽連接酶儀器、耗材試劑盒PCR儀實驗步驟一、在pZero的I位點連接串聯體1.SphI酶切載體，與按大小回收的串聯體片段連接；我們推薦在pZero的Sph1位點上克隆串聯體，有關于在此載體上克隆的細節我們參考了Zero Background 克隆試劑盒的使用
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
細菌克隆的溶解實驗
試劑、試劑盒?IPTG溶源菌抽提緩沖液氯化鈉溶菌酶LB 瓊脂平板儀器、耗材?氣體恒溫箱液氮Millipore 濾紙水浴搖床牙簽或接種環噬菌體λgt11λgt18-23λZAP 和λZipLox 重組子大腸桿菌 Y1090 hsdR 菌株及 Y1089 菌株實驗步驟?材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試
克隆串聯體實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTEcDNA標簽連接酶儀器、耗材 試劑盒PCR儀實驗步驟 一、在pZero的I位點連接串聯體1.SphI酶切載體，與按大小回收的串聯體片段連接；我們推薦在pZero的Sph1位點上克隆串聯體，有關于在此載體上克隆的細節我們參考了Zero Background 克隆試劑盒
克隆載體的準備實驗
試劑、試劑盒 氯仿-異戊醇酚：氯仿-異戊醇（25:24:1)氯化鋰 (LiCl10mol L)酚（Tris-飽和）TE 緩沖液乙醇堿性磷酸酶平末端限制性內切酶和反應緩沖液克隆載體儀器、耗材 水浴鍋真空干燥機 瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑氯仿-異戊醇（24:1)酚
相互作用克隆實驗
實驗方法原理 它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建的適當的表達文庫。編碼誘餌蛋白的基因常用于在中合成重組融合蛋白。重組融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作標記。由于 cAMP 依賴蛋白質激酶（蛋白質激酶 A，PKA）的識別位點被引入重組融合蛋白質，從而可通
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
多克隆抗體純化實驗
實驗材料 動物血清樣品試劑、試劑盒 正辛酸醋酸緩沖液PBS儀器、耗材 透析袋高速低溫離心機實驗步驟 一、材料和試劑?1. ? 正辛酸?2. ?60 mmol/L，pH4.0醋酸緩沖液，PBS?3. ?透析袋?4. ?高速低溫離心機?二、操作步驟?1. ?將待提取樣品用60 mmol/L，pH4.0醋
多克隆抗體提取實驗
實驗材料 血清試劑、試劑盒 DEAE纖維素磷酸鹽緩沖液儀器、耗材 燒杯布氏濾斗濾紙實驗步驟 1. ?稱取DEAE-纖維素(DE32或DE52)50 g，置于1 000 ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經酸堿處理后，用0.01～0.05 mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡
相互作用克隆實驗
實驗方法原理它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建的適當的表達文庫。編碼誘餌蛋白的基因常用于在中合成重組融合蛋白。重組融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作標記。由于 cAMP 依賴蛋白質激酶（蛋白質激酶 A，PKA）的識別位點被引入重組融合蛋白質，從而可通過 PKA
軟瓊脂克隆形成實驗
軟瓊脂克隆形成實驗可用于：（1）細胞分化的基礎研究；（2）臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。實驗方法原理軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映
YAC克隆的分析實驗
基本方案 制備YAC DNA進行Southern印跡分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌
克隆載體的準備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿-異戊醇 酚：氯仿-異戊醇（25:24:1) 氯化鋰 (LiCl 10mol L) 酚（Tris-飽和） TE 緩沖液
克隆串聯體實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 LoTE cDNA標簽 連接酶 儀器、耗材 試劑盒
相互作用克隆實驗
相互作用克隆 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建的適當的表達文庫。編碼誘餌蛋白的基因常用于在中合成重組融合蛋
軟瓊脂克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。
YAC克隆的分析實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 AHCYPD甘油儀器、耗材 培養箱冷凍管實驗步驟 1. ?用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上，倒扣平板于30℃培養，直至長出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。2. ?短期保存：用Parafilm膜將平板周圍封起來，于4℃可保存4~6周。