miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料寡核苷酸乙腈ImpAp17.91XDEPC糖原T4 RNA 連接酶反轉錄酶dNTPDTTEDTAT4 DNA 連接酶BanⅠ限制性內切核酸酶Taq 酶M13F 引物M13R 引物試劑、試劑盒混合液沉淀液上樣液乙醇T4 RNA 連接酶緩沖液重蒸水......閱讀全文
miRNA克隆實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因
miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
miRNA－－克隆實驗
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
從小鼠和人中克隆miRNA實驗方法
Supplementary information to miRNAs cloned from mouse and humanAn online clearinghouse for miRNA gene name assignments?(http://www.sanger.ac.uk/Softwa
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶
核糖克隆實驗
這個方案只是用 RNA 酶處理 PCR 產物的一種方法。有很多可選擇和有效的途徑來純化 PCR 產物以除去引物，接著用酶處理 PCR 產物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR儀設置溫浴程序是很方便的。可以在加熱步驟完成后選擇加上“冷卻”步驟，即在冷模塊中放置 5 min 甚至過夜。本實驗來源于 P
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L
核糖克隆實驗
—、材料1. 緩沖液、溶液和試劑.10XATEN 緩沖液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化鈉0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜堿（SigmaB-2629)藍色葡聚糖（bluedextran)(SigmaD
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mm
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarci
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液 RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四
miRNA－mimics－miRNA－inhibitor
miRNA mimics 是模擬生物體 內源的miRNAs，運用化學合成的方法合成，能增強內源性miRNA的功能。miRNA inhibitor 是化學修飾的專門針對細胞中特異的靶miRNA的抑制劑。近年來人工合成的miRNA（artificial miRNA，amiRNA）已經成功應用于沉默預期靶
miRNA－qPCR－Detection－Primer－Set（miRNA檢測試劑盒）實驗說明
一、概述 1、介紹 microRNA(miRNA)是一類有大約22 個核苷酸組成的非編碼小分子RNA，其廣泛存在于真核生物中。miRNA 在個體發育的不同時期及不同組織中有不同的表達模式，都表明了其在發育和分化中起有重大的調控作用。迄今為此，對miRNA 的檢測方法主要有Northe
miRNA－qPCR－Detection－Primer－Set（miRNA檢測試劑盒）實驗說明
一、概述1、介紹microRNA(miRNA)是一類有大約22 個核苷酸組成的非編碼小分子RNA，其廣泛存在于真核生物中。miRNA 在個體發育的不同時期及不同組織中有不同的表達模式，都表明了其在發育和分化中起有重大的調控作用。迄今為此，對miRNA 的檢測方法主要有Northern B
miRNA海綿—長效抑制miRNA
隨著研究的深入，已知miRNA的數量與日俱增，目前Sanger miRBase數據庫中收錄的人miRNA已達721條。不過，大部分miRNA的功能仍是未知數。在基因功能研究中，最有效的方法是阻止特定基因的功能，然后了解其后果。miRNA同樣如此。然而，相比之下，miRNA的功能研究要困難得多。為什么
miRNA海綿—長效抑制miRNA
miRNA海綿隨著研究的深入，已知miRNA的數量與日俱增，目前Sanger miRBase數據庫中收錄的人miRNA已達721條。不過，大部分miRNA的功能仍是未知數。在基因功能研究中，最有效的方法是阻止特定基因的功能，然后了解其后果。miRNA同樣如此。然而，相比之下，miRNA的功能研究要困
TRIzol影響實驗結果？miRNA文章被撤回
韓國首爾大學的科學家Narry Kim(金娜蕊)及其研究小組近日撤回了一篇關于microRNA(miRNA)衰減的文章，因為她們發現，所用的TRIzol試劑會對富含GC的miRNA或具二級結構的miRNA產生不同影響。 這篇文章去年發表于《Molecular Cell》雜志上。研究
克隆串聯體實驗
試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTEcDNA標簽連接酶 儀器、耗材 試劑盒PCR儀 實驗步驟 一、在pZero的I位點連接串聯體 1.SphI酶切載體，與按大小回收的串聯體片段連接；我們推薦在pZero的Sph1位點上克隆串聯體，有關于在此載體上克隆的細節我們參考
相互作用克隆實驗
實驗方法原理它需要一種編碼誘餌蛋白的基因和用噬菌體表達載體，如 λgt 11 構建的適當的表達文庫。編碼誘餌蛋白的基因常用于在中合成重組融合蛋白。重組融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作標記。由于 cAMP 依賴蛋白質激酶（蛋白質激酶 A，PKA）的識別位點被引入重組融合蛋白質，從而可通過 PKA
YAC克隆的分析實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 AHCYPD甘油儀器、耗材 培養箱冷凍管實驗步驟 1. ?用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上，倒扣平板于30℃培養，直至長出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。2. ?短期保存：用Parafilm膜將平板周圍封起來，于4℃可保存4~6周。
克隆載體的準備實驗
試劑、試劑盒 氯仿-異戊醇酚：氯仿-異戊醇（25:24:1)氯化鋰 (LiCl10mol L)酚（Tris-飽和）TE 緩沖液乙醇堿性磷酸酶平末端限制性內切酶和反應緩沖液克隆載體儀器、耗材 水浴鍋真空干燥機 瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑氯仿-異戊醇（24:1)酚
克隆載體的準備實驗
許多載體及其衍生物被開發出來用于克隆 PCR 產物，其中包括典型的 pBluescript 類載體。它們具有多克隆位點和簡化的多克隆位點，PCR-Script Direct 質粒也是這樣。簡化的多克隆位點允許使用者把常用的限制酶位點整合到 PCR 引物中，同時還避免了相同的目標序列同時出現在質粒載體
細菌克隆的溶解實驗
細菌克隆的溶解實驗可以用于：（1）從表達特定融合蛋白質的重組噬菌體構建噬菌體溶源菌；（2）從該溶源菌誘導合成并純化出融合的目的蛋白質。實驗方法原理具有原噬菌體的細菌稱為溶原性細菌。噬菌體分為烈性噬菌體和溶原性噬菌體，在感染于寄主細菌細胞時，前者往往在菌體內增殖并將菌體裂解。實驗材料大腸桿菌噬菌體試劑
軟瓊脂克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
克隆載體的準備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿-異戊醇 酚：氯仿-異戊醇（25:24:1) 氯化鋰 (LiCl 10mol L) 酚（Tris-飽和） TE 緩沖液
軟瓊脂克隆形成實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞(如正常成纖維細胞)在懸浮狀態下不能增殖，不適用此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下也能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了其惡性程度。
軟瓊脂克隆形成實驗
原理：細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形
細菌克隆的溶解實驗
細菌克隆的溶解實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 具有原噬菌體的細菌稱為溶原性細菌。噬菌體分為烈性噬菌體和溶原性噬菌體，在感染于寄主細菌細胞時，前者往往在菌體內增殖并將菌體裂
YAC克隆的分析實驗
基本方案 制備YAC DNA進行Southern印跡分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌