實驗方法原理 隨著體外分子實驗技術的發展,近年來相繼發現了許多具有不同催化功能的 DNA 分子,這些被稱為脫氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反應、連接反應、卟啉環金屬化等許多化學反應,而且還具有 DNA 激酶活性。實驗材料 脫氧核酶試劑、試劑盒 脫氧核酶切割緩沖液終止緩沖液脂質體儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置放射自顯影用具水浴實驗步驟 一、材料與設備1. 聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置。2. 放射自顯影用具。3. 水浴。4. 脫氧核酶 ( 修飾或未修飾)由化學合成獲得。5. 脫氧核酶體外切割的底物 RNA 由體外轉錄獲得。6. 2X 脫氧核酶切割緩沖液:50 mmol/L Tris ( pH 7.5),10 mmol/L MgCl2,150 mmol/L NaCl,0.01% SDS。7. 終止緩沖液:95% 去離子甲酰胺,0.05% 溴酚藍,0.05% 二甲苯青,10 mmol/L EDTA。8. 脂質體。二、操作方法1.......閱讀全文
實驗方法原理 隨著體外分子實驗技術的發展,近年來相繼發現了許多具有不同催化功能的 DNA 分子,這些被稱為脫氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反應、連接反應、卟啉環金屬化等許多
隨著體外分子實驗技術的發展,近年來相繼發現了許多具有不同催化功能的 DNA 分子,這些被稱為脫氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反應、連接反應、卟啉環金屬化等許多化學反應,而且還具有 DNA 激酶活性。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理隨著體外分子實驗技術的發展,近年
脫氧核酶是一類由三十幾個脫氧核苷酸構成的寡聚脫氧核糖核苷酸,制備容易,使用方便,是體外在特定位點切割 RNA 的有效方法。常用于體外切割 RNA 底物的脫氧核酶是「10~23」型脫氧核酶。實驗材料脫氧核酶無RNA酶的DMA酶切割底物RNA試劑、試劑盒5X反應緩沖液5X乙酸鎂或氯化鎂無水乙醇水飽和酚實
實驗材料 脫氧核酶無RNA酶的DMA酶切割底物RNA試劑、試劑盒 5X反應緩沖液5X乙酸鎂或氯化鎂無水乙醇水飽和酚實驗步驟 一、材料與設備1) 脫氧核酶 (其設計與制格參見脫氧核酶相關章節)2)5X 反應緩沖液:750Tnmol/LNaCl,200 mmol/LTris-HCl (pH8.0)3)5
實驗材料 脫氧核酶 無RNA酶的DMA酶 切割底物RNA 試劑、試劑盒
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實驗方法原理 25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-U
[實驗原理]細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程,染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 2+和Mg2+依賴的核酸內切酶作用下,在核小體單位之間被隨機切斷,形成180~200bp核小體DNA多聚體。DNA
為加強第二代測序技術檢測試劑的規范和指導,進一步保證和提高相關產品的質量,8月8日,中國食品藥品檢定研究院(中檢院)組織制定了《第二代測序技術檢測試劑質量評價通用技術指導原則》(下稱《指導原則》)。 該文件是中檢院發布的首個質量評價技術指導原則,旨在對產品設計、研發及驗證的各關鍵環節進行規范,
一.前言 本指導原則主要針對第二代測序(next generation sequencing,NGS)技術檢測試劑(以下簡稱“NGS檢測試劑”)產品質量提出指導性要求,涉及基本原則、主要原材料、檢測流程及性能評價等方面。 本指導原則是對企業和檢驗人員的指導性文件,但不包括注冊審批所涉及的行政
利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化 實驗材料 T4 DNA 連接
實驗方法原理25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-UdR標記體外傳代培養的腫瘤細胞作為靶細胞,以外周血分離的單個核細胞或小鼠脾細胞作為效應細胞,進行體外NK細胞活性檢測。被
(二)正式實驗階段 1.選擇放射性同位素的劑量 同位素必須能經得起稀釋,使其最后樣品的放射性不能低于本底,一般來說放射性同位素在生物體內不是完全均勻地被稀釋,可能在某些器官、組織、細胞、某些分子中有選擇性地蓄積,蓄積的部分放射性就會很強,在這種情況下,應以相關部位對示蹤劑的蓄積率來考慮示蹤劑用量
封閉式試管培養 開放式蓋玻片培養 實驗方法原理 在標準培養箱(37°C ) 中用 Lei
封閉式試管培養 開放式蓋玻片培養 實驗方法原理 在標準培養箱(37°C ) 中用 Lei
實驗方法原理脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結合。在適合底物存在下,過氧化物酶可產生很強的顏色反應,特異準確
自然殺傷(NK)細胞參與了機體免疫防御的第一道防線,主要用于(1)免疫監視系統中抗腫瘤抗病毒(2)免疫調控。實驗方法原理25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-UdR標記體外
細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程,染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 2 和Mg2 依賴的核酸內切酶作用下,在
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程,染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。然后大約30 ﹪的染色體DNA在Ca 2+和Mg2+依賴的核酸內切酶作用下,在核小體單位之間被隨機切斷,形成180~200bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸,每組寡核苷酸都有固定的起點,但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠
試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L M
本方案介紹在放射性標記的 DNA 片段上確定蛋白質結合位點的作圖方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羥自由基斷裂 DNA。如果希望得到優化足跡法反應的建議,請參見本方案最后部分的疑難解析以及優化 DNA 酶 I 足跡法反應的欄目。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)
實驗方法原理在標準培養箱(37°C ) 中用 Leighton 塑料管培養細胞,然后用胰蛋白酶懸浮法收集細胞。實驗材料羊水標本D-PBSA秋水仙酰胺胸腺嘧啶核苷溴脫氧尿核苷胰蛋白酶EDTAHistopaque-l077試劑、試劑盒完全培養液胰蛋白酶和EDTA混合液消毒劑如Virkon氯化鉀低滲溶液固
DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗 實驗材料 新鮮組
試劑、試劑盒 TSES 緩沖液TSES 緩沖液飽和酚氯仿辛醇乙酸鉀乙醇緩沖液 Almol LNaH2P04 緩沖液氯胺 T 溶液Na125I5 mmol LNa2S2O5lOOmmol LKINET 緩沖液酵母 tRNA蔗糖纖維素柱平衡液三重蒸餾水0.1mol LNaOH5 mmol L
實驗材料Hela細胞系試劑、試劑盒DMEM培養基生理鹽水臺盼藍染色液DAPI染料青霉素鏈霉素Rnase A硫酸亞鐵儀器、耗材普通光學顯微鏡熒光顯微鏡載玻片蓋玻片細胞培養瓶電泳儀高速離心機超凈工作臺二氧化碳培養箱恒溫水浴鍋細胞記數器1. 實驗目的通過實驗了解細胞凋亡的一般過程和形態特征,了解誘導細胞凋
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA 特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA 的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA 的A
2 用阿糖胞苷微核實驗檢測人淋巴細胞 (V G 1 期 DNA 剪切修復損傷的方法在對暴露于各種遺傳毒物的人 G 。期淋巴細胞的 M N 進行檢測后發現,對于主要引起堿基損傷和 DNA 加合物而不是 DNA 鏈斷裂或者紡錘體損傷的化學物質和紫外輻射而言, MN 的形成與細胞毒性相比明顯程度較