盤點：分子診斷常用技術50年的沿革與進步
一、基于分子雜交的分子診斷技術 上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年，由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增，人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現，為基于分子雜交的體外診斷方法進行了最初的技術儲備。 (一)DNA印跡技術(Southernblot) Southern于1975年發明了DNA印跡技術，通過限制性內切酶將DNA片段化，再以凝膠電泳將長度不等的DNA片段進行分離，通過虹吸或電壓轉印至醋酸纖維膜上，再使膜上的DNA變性與核素標記的寡核苷酸探針進行分子雜交，經洗脫后以放射自顯影鑒別待測的DNA片段-探針間的同源序列。這一方法由于同時具備DNA片段酶切與分子探針雜交，保證了檢測的特異性。因此，一經推出后便成為探針雜交領域最為經典的分子檢測方法，廣為運用于各種基因突變，如缺失、插入、易位等，及與限制性酶切片......閱讀全文
比率熒光納米探針檢測農藥殘留，低檢測限實現可視化
近期，中國科學院合肥物質科學研究院固體物理研究所研究員蔣長龍團隊在氨基甲酸酯農藥和有機磷農藥殘留分析檢測方面取得新進展。研究設計制備了兩種高效的比率熒光納米探針，并結合智能手機的顏色識別器，實現對食品和環境水體中農藥的可視化定量檢測。相關研究成果發表在《化學工程雜志》（Chemical Engi
盤點：單核苷酸多態性（SNP）檢測方法
單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性，包括堿基的顛換、轉換、插入和缺失。它是人類可遺傳變異中最常見的一種，占所有已知多態性的90%以上。SNP作為第三代分子標記，被廣泛應用于分子
多色探針熔解技術有何潛力？
多色探針熔解曲線分析技術熒光PCR是應用最廣的核酸檢測平臺。熒光PCR操作簡單、閉管反應，可有效降低擴增產物污染，但一大缺點在于它所能檢測的靶標數目有限。這也是熒光PCR在臨床應用受到制約的重要因素，但隨著多色探針熔解曲線分析技術的出現，卻很好的解決了這個問題，即能夠在保留熒光PCR優點的同時也能突
分子診斷常用技術（一）
分子診斷技術即是利用分子生物學方法對人類及病原體的各類遺傳物質進行檢測，以幫助對疾病進行診斷。以技術原理出發對分子診斷技術進行歸類與評價，以對目前臨床常用技術的沿革進行回顧。1961 年Hall 建立的液相分子雜交法標志著人類掌握分子生物學技術對特定核酸序列進行檢測，開啟了對疾病分子診斷的大門。19
盤點：分子診斷常用技術（一）
分子診斷技術即是利用分子生物學方法對人類及病原體的各類遺傳物質進行檢測，以幫助對疾病進行診斷。以技術原理出發對分子診斷技術進行歸類與評價，以對目前臨床常用技術的沿革進行回顧。1961年Hall 建立的液相分子雜交法標志著人類掌握分子生物學技術對特定核酸序列進行檢測，開啟了對疾病分子診斷的大門。1
蛋白質的內源熒光與熒光探針
利用熒光光譜法研究蛋白質一般有兩種方法。一是測定蛋白質分子的自身熒光(內源熒光)，另一種是當蛋白質本身不能發射熒光時，通過非共價吸附或共價作用向蛋白質分子的特殊部位引入外源熒光(也稱熒光探針)，然后測定外源熒光物質的熒光。 ?蛋白質的內源熒光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan?,Trp
基因多態性的檢測方法
1．限制性片段長度多態性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）：由DNA 的多態性，致使DNA 分子的限制酶切位點及數目發生改變，用限制酶切割基因組時，所產生的片段數目和每個片段的長度就不同，即所謂的限制性片段長度多態性，導致限制片段長度發生改
重疊基因的調控序列
①在5′端轉錄起始點上游約20～30個核苷酸的地方，有TATA框(TATA box)。TATA框是一個短的核苷酸序列，其堿基順序為TATAATAAT。TATA框是啟動子中的一個順序，它是RNA聚合酶的重要的接觸點，它能夠使酶準確地識別轉錄的起始點并開始轉錄。當TATA框中的堿基順序有所改變時，mRN
生物芯片技術熒光探針
目前用熒光探針作為檢測信號的儀器，主要是考慮熒光標記所要檢測的DNA的效率，以及熒光探針本身的發光效率和光譜特性。PCR過程中的DNA標記1.末端標記：在引物上標記有熒光探針，在DNA擴增過程時，使新形成的DNA鏈末端帶有熒光探針。2 .隨機插入：選擇四種緘機基，使其中一種或幾種掛有熒光探針，在PC
共聚焦熒光探針的選擇
共聚焦熒光探針的選擇共聚焦激光掃描顯微鏡是20世紀80年代來發展起來的一種新型高精度顯微鏡系統，輔以各類熒光探針或熒光染料與被測物質特異性結合，不僅可觀察固定的細胞、組織切片，還可對活細胞的結構、分子、離子進行實時動態地觀察和檢測。熒光探針的發展非常迅速，目前僅美國Molecular Probes公
pcr熒光探針法是什么
pcr熒光探針法是是SYBRGreen摻入到雙鏈DNA中的量。SYBRGreen摻入到雙鏈DNA中后會發出熒光。但是只要是雙鏈，它都摻。而探針法是當探針結合到目標序列上以后，聚合酶降解探針后，探針上自帶的熒光基團離開淬滅基團，從而發出熒光。
熒光探針的分類及應用
受到激發光激發后，從激發態單重態回到基態，在紫外-可見-近紅外區有特征發光，稱之為熒光。熒光性質（激發和發射波長、強度、壽命、偏振等）可隨所處環境的性質，如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子，被稱為熒光探針。熒光探針分類很多，可以根據材料屬性分為有機和無機探針，可以根據探針尺寸分為
pcr熒光探針法是什么
實時定量聚合酶鏈反應 (Quantitative Real-time PCR，qPCR) 是一種分子生物學技術，用于放大和同時檢測或量化靶向 DNA 分子。程序遵循 PCR 的一般原則。在 PCR 反應過程中，隨著循環次數的增加，PCR 產物的積累導致熒光信號的增強。因此，通過監測熒光強度，在"實時
納米熒光探針摧滅原理
通過一間隔基S(space)和熒光團F(fluorophore)相連而構建。其中熒光團部分是光能吸收和熒光發射的場所，識別基團部分則用于結合客體，這兩部分被間隔基隔開，又靠間隔基相連而成一個分子，構成了一個在選擇性識別客體的同時又給出光信號變化的超分子體系。PET熒光探針中，熒光團與識別基團之間
研究發展RNA“緩沖熒光探針”
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/519783.shtm
研究發展RNA“緩沖熒光探針”
近日，中國科學院大連化學物理研究所副研究員喬慶龍和徐兆超研究員團隊發展了能夠與RNA特異性可逆結合，在活細胞內對細胞核核仁穩定成像的“緩沖熒光探針”Nu-AN，實現了對核仁動態輪廓的成像，并通過活細胞內藥物誘導下核仁特定形態的可視化，為核仁應激試劑的篩選提供可視化的工具。相關成果發表在《先進科學》。
共聚焦熒光探針標記方法
（一）BCECF測定pH值 1. 儲存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分裝后，－20℃避光保存。 2. 染色步驟 將培養細胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（終濃度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、M
實時熒光定量PCR簡介
熒光定量PCR檢測技術從誕生到現在已經有 8 年了，但是其應用在近四年才迅猛增長。在 Medline 數據庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR” 作為關鍵詞檢索，在1996 年僅有 19 篇，在 1997 年僅有 28 篇，在 98 、 99 、2000 年分別達到了
核酸基因分子探針
從化學和生物學的意義上理解，探針是一種已知特異性的分子，它帶有合適的標記物供反應后檢測。探針和靶的相互反應如抗原-抗體、血凝素-碳水化合物、親合素-生物素、受體和配體，以及核酸與其互補核酸間的雜交等反應均屬此類。用核酸探針與待檢標本中核酸雜交，形成雜交體，再用呈色反應顯示。此方法用于疾病的診斷，稱為
基因探針的簡介
基因探針,即核酸探針,是一段帶有檢測標記,且順序已知的,與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)。基因探針通過分子雜交與目的基因結合,產生雜交信號,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：①應是單鏈,若為雙鏈,必須先行變性處理。②應帶有容
一種新型檢測硫離子的反應型熒光探針
長久以來具有臭雞蛋氣味的硫化氫氣體一直被認為是一種有毒氣體，但近年來的研究發現，生物體內也存在硫化氫，同時發現其參與多個包括與疾病有關的的生理和病理過程，比如參與抑制胰島素信號傳遞，擴張血管平滑肌等。因此體內硫化氫的檢測對于探究疾病產生機理以及生理活動過程中信號的傳遞路徑等有著重要的作用。 北
近紅外熒光探針檢測活性氧/活性硫交互響應
健康的生態環境是人類生存發展的物質基礎，環境受到破壞將危害人類健康。生物細胞內活性硫物種在調節環境和人體平衡方面起著重要的作用。“活性硫物種”是含硫生物分子的集合名詞，該類分子作為硫信號轉導的關鍵位點，在生命體的生理和病理過程中發揮著至關重要的作用。硫化氫（H2S）作為活性硫物種家族的一員，其對
熒光pH探針于細胞內pH檢測的使用（二）
? pH 6.0 ?pH 8.5 ?圖2. 用RatioWorks?BCFL，AM標記的Hela細胞。將Hela細胞與5 μM RatioWorks?BCFL，AM（Cat# 21190）在37°C 下孵育30分鐘
新型熒光探針用于檢測內源大麻素的時空動態變化
內源性大麻素（eCB）是由神經元合成和釋放的一類脂類神經調質分子，可參與大腦多個腦區的突觸可塑性調節，對情緒、睡眠、食欲等神經活動過程具有調控功能。內源大麻素系統的調控異常與神經退行性疾病、癲癇、成癮、抑郁癥和精神分裂癥等諸多神經疾病和精神類疾病密切相關。然而，目前缺乏高靈敏度、高時空分辨率的實
新型熒光探針用于檢測內源大麻素的時空動態變化
內源性大麻素（eCB）是由神經元合成和釋放的一類脂類神經調質分子，可參與大腦多個腦區的突觸可塑性調節，對情緒、睡眠、食欲等神經活動過程具有調控功能。內源大麻素系統的調控異常與神經退行性疾病、癲癇、成癮、抑郁癥和精神分裂癥等諸多神經疾病和精神類疾病密切相關。然而，目前缺乏高靈敏度、高時空分辨率的實
熒光pH探針于細胞內pH檢測的使用（一）
細胞內pH在各種細胞事件中起重要的調節作用，包括細胞生長，鈣調節，酶活性，受體介導的信號轉導，離子轉運，內吞作用，趨化作用，細胞粘附等等。借助pH敏感的熒光指示劑，研究人員能夠以更高的靈敏度、空間分辨率、采樣密度來監控活細胞內的pH波動。?通常，細胞的細胞內pH在其各個細胞區室之間會有所不同。例如，
一文讀懂分子診斷技術、PCR技術、基因測序技術
四、定量PCR(quantitative PCR，qPCR) 相比于其他分子診斷檢測技術，qPCR具有2項優勢，即核酸擴增和檢測在同一個封閉體系中通過熒光信號進行，杜絕了PCR后開蓋處理所帶來擴增產物的污染；同時通過動態監測熒光信號，可對低拷貝模板進行定量。正是由于上述技術優勢，qPCR已經成
水稻轉基因BT63實時探針快速檢測
PCR-針對水稻BT63基因檢測 貨號：IF/GR1017 在管內測試 保存：2-8℃ 簡單信息 本試劑盒是利用分子生物學(PCR)，針對食用，飼用原料，化學藥劑產品中水稻BT63（特定序列；探針帶Fam熒光報告基團和無熒光淬滅基團）的快速檢測法。 本試劑盒
實時定量PCR探針概述
實時定量PCR?(qPCR)的優勢?實時檢測PCR反應過程?精確計算出每個循環的PCR產物量?擴增和檢測同時進行?消除后續PCR的干擾在實時定量PCR反應中，雜交探針與插入染料如SYBR Green相比是更好的選擇。熒光標記探針可以提高實時定量PCR結果的效率、靈敏度和特異性。而且定量PCR可以在一
實時熒光定量PCR技術的應用
1. 基因工程研究領域 ① 基因表達研究：對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測，其結果特異性強、定量準確，為了解β地中海貧血的分子病理機制及其臨床診斷提供了可靠的檢測數據。 ② 轉基因研究：利用兩種發光探針及適當的循環閾值，擴增一個轉移后的基因和一個對照基因，以分析轉基因