噬菌體鋪平板產生噬斑實驗——連續稀釋法
實驗方法原理這種方法能從單個噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對噬菌體母液進行濃度測定。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒麥芽糖培養基儀器、耗材平板微波爐試管加熱器毛細管實驗步驟1. 在含0.2 %麥芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉湯培養基培養大腸桿菌至飽和。加0.3 ml的大腸桿菌培養液到5個8 mmX80 mm的試管里。在把加有頂層瓊脂培養基的瓶子放到微波爐前一定要松開瓶蓋！2. 在微波爐解凍狀態下溶化頂層瓊脂培養基，或煮沸水浴15 min。室溫下冷卻瓶子5 min，然后將加有溶化瓊脂培養基的瓶子放于45~50°C水浴。3. 用SM將噬菌體溶菌液進行連續稀釋（如100倍的稀釋)。加第一個稀釋液0.1 ml到 一只大腸桿菌試管里，再加第二個稀釋液的0.1 ml到另一只試管里，其他依次稀釋。標記好大腸桿菌/噬菌體混合物的試管，以便它們彼此不混淆。將試管放于室溫培養20 min。4. &n......閱讀全文
噬斑擴增實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 痘苗病毒可以在 HeLa S3 細胞中大量繁殖，其他的細胞系可用于噬斑純化和擴增。 實驗材料 重懸重組噬斑 貼壁生長良好的
噬斑擴增實驗
實驗方法原理 痘苗病毒可以在 HeLa S3 細胞中大量繁殖，其他的細胞系可用于噬斑純化和擴增。實驗材料 重懸重組噬斑貼壁生長良好的細胞HeLa S3 細胞試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培養基篩選試劑（麥考酚酸 黃嘌呤／次黃嘌呤）5-溴脫氧尿苷（BrdU）干冰／乙醇儀器、耗材
噬斑擴增實驗
實驗方法原理痘苗病毒可以在 HeLa S3 細胞中大量繁殖，其他的細胞系可用于噬斑純化和擴增。實驗材料重懸重組噬斑貼壁生長良好的細胞HeLa S3 細胞試劑、試劑盒完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培養基篩選試劑（麥考酚酸 黃嘌呤／次黃嘌呤）5-溴脫氧尿苷（BrdU）干冰／乙醇儀器、耗材杯狀超
重組病毒噬斑篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 轉染細胞溶解產物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞 試劑、試劑盒
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材6孔 35 mm 組織培養板杯狀超
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料 轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒 完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材 6孔 35 mm 組織培養板
噬菌體鋪平板產生噬斑實驗
實驗方法原理 這種方法能從單個噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對噬菌體母液進行濃度測定。實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 麥芽糖培養基儀器、耗材 平板微波爐試管加熱器毛細管實驗步驟 1. ?在含0.2 %麥芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉湯培養基培養大腸桿菌至飽和。加0.3 ml的大腸桿
噬菌體鋪平板產生噬斑實驗
連續稀釋法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種方法能從單個噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對噬菌體母液進行濃度測定。
噬斑的概念
噬斑是在固體培養基上由一個噬菌體復制增殖并裂解宿主菌后形成的溶菌空斑，不同噬菌體噬斑的形態大小不盡相同。通過噬斑計數，可以測定一定體積內的噬菌體單位數目，即噬菌體的數量。
噬菌體鋪平板產生噬斑實驗——連續稀釋法
實驗方法原理這種方法能從單個噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對噬菌體母液進行濃度測定。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒麥芽糖培養基儀器、耗材平板微波爐試管加熱器毛細管實驗步驟1. ?在含0.2 %麥芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉湯培養基培養大腸桿菌至飽和。加0.3 ml的大腸桿菌培養液到
桿狀病毒儲液制備實驗——噬斑試驗測定滴度
實驗材料對數生長期單層培養的 Sf 9 細胞試劑、試劑盒桿狀病毒儲液昆蟲細胞培養液儀器、耗材瓊脂糖頂層覆蓋物臺盼藍頂層覆蓋物（選用）60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱1.5 ml 帶螺口蓋的凍存管實驗步驟1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培養液稀釋處于對數生長期的 Sf 9 細胞至約
噬斑形成單位的定義
中文名稱噬斑形成單位英文名稱plaque forming unit;pfu定 義表示活噬菌體數時所用的量詞。在測定噬菌體滴度的實驗中，一個活噬菌體在平皿中形成一個噬斑，稱為1 pfu。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
為什么噬斑可以檢出純化噬菌體
M13KO7噬菌體感染TG1，不見噬菌斑噬菌體有烈性的和非烈性噬菌體.烈性的噬菌體侵染細菌后會快速造成細菌菌體裂解,培養液呈現清涼透明有破碎殘渣.非裂解性的可以鋪頂層瓊脂板（可以查閱噬菌體滴度的測試實驗方案）,培養后看頂層瓊脂層中有沒有噬菌斑,也可以在底層培養基中加些IPTG/X-gal若噬菌體帶有
痘苗病毒儲液制備——噬斑分析測定滴度
實驗方法原理經胰酶作用的系列稀釋病毒儲液常被用于感染適當的細胞系。經過幾天的培養后，吸出培養基，將細胞用結晶紫染色。由于感染細胞變縮、變圓和脫落，形成直徑 1～2 mm 顏色較淡的噬斑。實驗材料生長良好的貼壁培養的單層 BSC-1 細胞病毒儲液試劑、試劑盒0.1% 結晶紫（溶于 20% 乙醇）儀器、
噬菌體克隆的純化實驗
實驗材料 噬菌體試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖氯仿SMMgSO4儀器、耗材 培養箱牙簽硝酸纖維素膜實驗步驟 1. ?在直徑82 mm LB平極上倒入含200 μl 宿主菌的3 ml 0.7%頂層瓊脂糖，放置10 min。?2. ?通過放射自顯影膠片上的雜交斑點確定陽性噬斑在原平板上的位置，用牙簽輕輕插
噬菌體克隆的純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
噬菌體克隆的純化實驗
噬菌體是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的細菌病毒的總稱，作為病毒的一種，噬菌體具有病毒特有的一些特性：個體微小；不具有完整細胞結構；只含有單一核酸。噬菌體基因組含有許多個基因，但所有已知的噬菌體都是在細菌細胞中利用細菌的核糖體、蛋白質合成時所需的各種因子、各種氨基酸和能量產生系統來實現其自身
使用合成核苷酸作探針實驗——在綠化四甲胺中（TMAC）雜交
實驗材料寡核苷酸試劑、試劑盒LBSDSEDTATMAC儀器、耗材水浴鍋離心機培養箱尼龍膜實驗步驟1. ?按“在氯化鈉/檸檬酸鈉中雜交”介紹的方法處理已影印細菌菌落的濾膜。2. ?按下列方法制備帶擴增噬斑的濾膜（1）從文庫中以漸減密度〔15 000~8 000噬斑 / 150 mm 平板）的方式將噬菌
重組MVA活體免疫染色實驗
實驗方法原理活體免疫染色可用于檢測改造的痘苗病毒Ankara （MVA），因為MVA不能形成分開的、易辨認的噬斑，并且這種技術不需要利用篩選的標記基因。實驗材料匯片生長的CEF細胞試劑、試劑盒完全 MEM-2、MEM-2.5 和 MEM-10 培養基轉染細胞裂解液干冰／乙醇抗外源基因表達蛋白一抗辣根
重組MVA活體免疫染色實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 活體免疫染色可用于檢測改造的痘苗病毒Ankara （MVA），因為MVA不能形成分開的、易辨認的噬斑，并且這種技術不需要利用篩選的標記
重組MVA活體免疫染色實驗
實驗方法原理 活體免疫染色可用于檢測改造的痘苗病毒Ankara （MVA），因為MVA不能形成分開的、易辨認的噬斑，并且這種技術不需要利用篩選的標記基因。實驗材料 匯片生長的CEF細胞試劑、試劑盒 完全 MEM-2、MEM-2.5 和 MEM-10 培養基轉染細胞裂解液干冰／乙醇抗外源基因表達蛋白一
生物因素對細菌的影響實驗——噬菌體的特異溶菌現象
實驗方法原理噬菌體有一定的形態結構和嚴格的寄生性，須在活的易感的細菌細胞內增殖。通常能將其裂解，在平板上進行試驗，可出現空斑即噬斑。噬菌體的溶菌作用具有高度的特異性，故可用噬菌體鑒定菌種及菌型。實驗步驟1.? 在瓊脂平皿底上用蠟筆劃兩個直徑2 厘米的圓圈，標明1 ，2。2.? 以接種環分別取菌，在1
融合蛋白的免疫篩選實驗——IPTG法
實驗方法原理用抗體篩選λgt11 cDNA文庫時，可待噬斑長到一定裎度方可誘導表達融合蛋白，篩選到陽性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌體生長3~4 h 后，將含誘導劑IPTG的濾膜放入噬斑平板，即可誘導β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表達，繼續在37℃培養，然后按基本方案用抗體對影印濾膜進行篩選
治療雙側頸動脈斑塊的基本介紹
1、雙側頸動脈斑塊的西藥治療： 根據個人具體情況可選擇抗血小板藥物，如阿司匹林預防心腦血管疾病。亦可使用控制和減緩頸動脈斑塊進展的藥物，經臨床研究證實有效的藥物有他汀類降脂藥物如阿托伐他汀，以及普羅布考和煙酸等。 2、雙側頸動脈斑塊的中藥治療： 動脈硬化是隨著年齡增大，機體正氣虛弱逐漸出現
噬菌體滴度的測定的方法
在宿主細胞過量的情況下，噬斑的數量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因，在感染以前，要將噬菌體進行稀釋，而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復性)鋪板，也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA 序列。材料和試劑1. 微波爐2. LB/IPTG/Xgal培養 板3. lb培養基4. 頂層瓊脂糖凝膠操
噬菌體滴度的測定的方法
在宿主細胞過量的情況下，噬斑的數量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因，在感染以前，要將噬菌體進行稀釋，而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復性)鋪板，也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA 序列。材料和試劑1. 微波爐2. LB/IPTG/Xgal培養 板3. lb培養基4. 頂層瓊脂糖凝膠操
MVA－病毒儲液制備實驗——免疫染色法滴度測定
實驗方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法進行測定，因為 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 細胞中形成噬斑。實驗材料CEF 或 BHK-21 細胞MVA病毒儲液試劑、試劑盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基1:1 丙酮／甲醇PBS（含和不含3% FBS兩種）PBS／H2O2兔抗
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
實驗材料 噬菌體試劑、試劑盒 瓊脂糖LBNaOHSSCTris·Cl儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?通過系列等比稀釋滴定噬菌體文庫的滴度。?2. ?重組噬菌體與鋪平板的宿主菌混合于培養試管中（表一），于37 ℃溫育20 min。?表一、噬菌體文庫鋪平板組分最佳配制方法?3. ?按每個
瓊脂板上裂解性感染實驗
λ噬菌體重組體編碼的融合蛋白可通過大腸桿菌株 Y1089 溶源化菌落來制備。但從大量單個噬菌斑制備溶源菌工作量大，且并不一定每次成功（Huynh et al.1985)。另外，裂解性噬菌體感染可通過軟瓊脂（本方案）或液體培養（方案 9) 獲得。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕