實驗材料轉染細胞溶解產物BS-C-1/HuTK-143B/BHK-21/CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰/乙醇儀器、耗材6孔 35 mm 組織培養板杯狀超聲儀45℃水浴鍋無菌巴斯德吸管(帶棉花濾芯)實驗步驟實驗試劑準備詳見「其他」。1. 胰酶消化單層培養的細胞,用適當的完全培養基懸浮細胞。1.1 對 XGPRT 篩選、噬斑選擇或顏色篩選,用 BS-C-1 細胞。1.2 對 TK 篩選,用 HuTK-143B 細胞。1.3 對于 MVA,用 BHK-21 或 CEF 細胞。2. 用血球計數器對細胞計數(附錄 3F)。3. 按 5 ×105 細胞/孔將細胞加到 6 孔培養板中(最終 2 ml/孔),培養生長至匯片(所需時間少于 24 h)。4. 按以下方法制備細胞。4.1 對于 ......閱讀全文
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒,其基因組含有一段外源核酸序列,通常為編碼目標蛋白質的dDNA,在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進,對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初,最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法,這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中,轉移質粒和親代桿狀病毒
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒,其基因組含有一段外源核酸序列,通常為編碼目標蛋白質的dDNA,在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成,其位于病毒基因組多角體座位,替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中
近日,哈爾濱獸醫研究所重點實驗室于力團隊發表在該雜志上的文章 “Senecavirus-specific recombination assays reveal the intimate link between polymerase fidelity and RNA recombination
2012年4月,以沙特阿拉伯為中心的中東地區首次爆發了中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS -CoV),該病毒感染后致死率高達37%。2015年,MERS在韓國爆發,致死率高達20%,實際上,MERS至今仍在沙特并未消失,2019年12月至2020年3月,沙特至少出現了34名MERS確診病例,至少1
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 &nbs
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾(Sf9)細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清(FBS)的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱(濕度可選)15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾(Sf9)細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清(FBS)的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱(濕度可選)15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體T7 RNA聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先,將感興趣的基因插入質粒中,使其位于T7 RNA聚合酶啟動子(PT7)的控制下。在培養過程中,外源基因被高效的 T7 RNA聚合酶轉錄。這種轉染方案適用于分析的目的,因為不需要構建新的重組病毒,所以比較簡單。對于大規
產品說明書 本產品僅限用于研究,嚴禁用于疾病診斷。 本產品僅供購買方內部研究使用,未經Vigenebio公司書面許可,嚴禁轉售。 產品有限責任擔保 Vigenebio保證您收到的產品符合產品目錄上的規格。本擔保規定了Vigenebio更換產品的責任。Vigenebio不提
不論是細胞治療還是基因治療都離不開病毒載體。目前使用最多的病毒載體類型包括:腺相關病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆轉錄病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,這些常用病毒載體特性如下圖所示:特征慢病毒Lentivirus逆轉錄病毒Retrovirus腺相關病毒AAV腺病毒ADV基因表達穩轉/瞬轉穩轉瞬轉
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒,可用于(1)作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率(2)作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白(3)研究桿狀病毒基因組的結構與功能(4)研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13
新型人類冠狀病毒SARS-CoV-2(之前稱為2019-nCoV)的持續大流行引起了全球的極大關注。我們和中國的其他人參與了對這種病毒的初始基因組測序。在本文中,我們描述了針對SARS-CoV-2的出現,這些基因組數據揭示了什么,并討論了我們對其起源理解上所存在的差距。 一種新的人類冠狀病毒
分別于2002年和2012年暴發的嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)和中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)在公共衛生領域中造成的重大影響,激起了廣大研究者密切關注冠狀病毒的生物多樣性、基因組學及跨物種傳播的可能性,尤其是來源于蝙蝠(第二大哺乳動物群體)的冠狀病毒。目前,大量的研
兩種重組痘苗病毒共感染細胞 單病毒感染OST7-1細胞 利用VOTE系統 實驗方法原理
在一片恐慌與焦慮中,甲型H1N1流感持續升級,流感疫情呈迅速蔓延之勢,隨著疫區人口的頻繁流動,宛如漣漪般開始向全球波及。氣氛頓時緊張起來。 SARS留給公眾的記憶依然盤桓不去,在甲型H1N1流感面前,中國嚴陣以待的規模并不陌生。 然而,對于這個幽靈殺手,我們的了解有多少?面對它,我們
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先,將感興趣的基因插入質粒中,使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子(PT7)的控制下。應用脂質體轉染,重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中,而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
目前,大量的研究證據表明,感染人類多種的冠狀病毒可能均來源于蝙蝠。蝙蝠冠狀病毒的多樣性比其他動物冠狀病毒更高。近日,通過泛冠狀病毒和深度測序技術,中科院微生物研究所高福實驗室與云南省疾控中心和華大基因合作,從云南西雙版納采集棕果蝠的直腸拭子樣本中鑒定出一種新型蝙蝠冠狀病毒,將其命名為果蝠冠狀病毒
實驗方法原理 含有 pT7 控制的外源基因(「痘苗病毒系統基因表達實驗」中「重組痘苗病毒(VTF7-3)感染后的脂質體轉染」)的重組質粒,通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞,在培養過程中,外源基因被高效的 T7 RNA
創新藥物的研發,是使我國由醫藥大國走向醫藥強國的必由之路。國家無論是“863計劃”、“973計劃”、還是今天的“國家科技重大專項”,都對新藥研發寄予了厚望并給予了多方面的鼓勵支持,國內藥企亦不負眾望,共同肩負起新藥創制的重任。經多年厚積薄發,一個個具有自主知識產權的新藥產品誕生并成功上市,“中國
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統,由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷,人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來,基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行,在技術方法上得到了很大發展,時至今
近日,中國科學院武漢病毒研究所/病毒學國家重點實驗室肖庚富研究組在病毒學雜志Journal of Virology上發表題為Screening and Identification of Lassa Virus Entry Inhibitors from an FDA-Approved Drug
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我國對基因治療等相關的基礎研究、目標產品及管件技術的研發也非常重視。國務院曾出臺《關于印發“十三五”國家戰略性新興產業發展規劃的通知》,明確說明開發新型抗體和疫苗、基因治療、細胞治療等生物制品和制劑的重要性。 據不完全統計,國內布局基因治療領域的相關企業持續增長,自2012年的70余家增長至目
機器蒼蠅起飛 一種會飛的只有家蠅大小的機器裝置為研究人員研究自然界中最小飛蠅的飛行動力學提供了一種新的方法。蠅類能夠做出極為獨特且靈巧的飛行動作,這些飛行動作能夠讓它們快速地躲避蒼蠅拍并巧妙地停留在被風搖曳的花朵上。因為這一原因,它們在空中飛行的高超技藝一直難以在實驗室中得到復制。
今年早些時候在中國首次發現的人感染H7N9禽流感病例引起廣泛關注。中外研究人員最新發現,H7N9病毒很可能是由不同的病毒在家雞體內通過基因重組而生成,同時產生的“副產品”是此前未了解的H7N7病毒。 這項研究的領導者之一、香港大學研究人員朱華晨向新華社記者介紹說,分析結果顯示,家鴨首先從野
來自南京農業大學,中國科學院微生物研究所,國家疾控中心等多家研究機構的研究人員發表最新研究成果,利用先進的生物信息學分析方法從流行病學調查、發病機理、進化和重組情況等方面對不同的冠狀病毒進行了比較分析,并且用大數據網絡監測和分析病毒序列預測了存在潛在威脅的動物源性重組冠狀病毒,文章最后還針對M
近期,中國科學院武漢病毒研究所研究員王華林領導的學科組在膜融合蛋白介導的桿狀病毒入侵及演化機制研究中取得新進展。相關結果發表在2014年2月的病毒學刊物Journal of Virology上(88:2301-11)。 桿狀病毒的膜融合蛋白在介導病毒入侵細胞的過程中發揮重要作用。通過構
重組腺病毒構建,擴增及純化基本技術操作(細菌內同源重組AdEasy System)一 目的基因的克隆(以pshuttle-CMV質粒為例)1. 選擇適當酶切位點,進行酶切連接,將目的片段插入pshuttl-CMV質粒多克隆位點。2
1. 流感病毒的形態及實驗室分離純化:l#61472;引起人類流感的病毒是冠狀病毒。冠狀病毒只感染脊椎動物。l#61472;感染流感病毒后會引起人與動物的呼吸道、消化道與神經系統病患。l#61472;流感病毒的代表型在上世紀 60年代被查明, 60年代后對各種流感病毒的完整形態已進行了深入研究。冠狀