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    等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點

    等電聚焦(Isoelectric focusing,簡稱 IEF)是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展,已迅速發展成為一門成熟的近代生化實驗技術。目前等電聚焦技術已可以分辨等電點(pI)只差 0.001pH 單位的生物分子。由于其分辨力高,重復性好,樣品容量大,操作簡便迅速,在生物化學、分子生物學及臨床醫學研究中得到廣泛的應用。實驗方法原理實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子,向電場的正極泳動,在小于其等電點的 pH 環境中解離成帶正由荷的陽離子,向電場的負極泳動。這種泳動只有在等于其等電點的 pH 環境中,即蛋白質所帶的凈電荷為零時才能停止。如果在一個有 pH 梯度的環境中,對各種不同等電點的蛋白質混合樣品進行電泳,則在電場作用下,不管這些蛋白質分子的原始分布如何,各種蛋白質分子將按照它們各自的等電點大小在 pH 梯度中相對應的位置處進行聚焦,經......閱讀全文

    蛋白質純度測定實驗

    實驗步驟在評價樣品純度之前,首先需要鑒定待測雜質的類型,如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質,進而確定在特定溶液條件中, 能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化特性 (化學分析或物理特征)。而純度則是指待測雜質含量低于某個特定水平。需要注意的是,上述說明中并沒有要求描述雜質的性質。

    等 電 聚 焦

    等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質,當通以直流電時,兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度,當蛋白質放進此體系時,不同的蛋白質即移動到或聚焦于與其等電點相當的pH位置上,電聚焦的優點是:有很高的分辨率,可將等電點相差0.01-0.02pH單位的蛋白質分開;一般電泳由于受擴散作用的

    蛋白質純度測定實驗

    蛋白質純度測定實驗             實驗步驟 在評價樣品

    臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述

    分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清蛋

    電泳技術

    電泳法,是指帶電荷的供試品(蛋白質、核苷酸等)在惰性支持介質(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中,于電場的作用下,向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動,使組分分離成狹窄的區帶,用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。    電泳技術的

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    對于復雜混合物,如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分,通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation),二維凝膠 (2D 膠)電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷,即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量,即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電

    等 電 聚 焦

     等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質,當通以直流電時,兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度,當蛋白質放進此體系時,不同的蛋白質即移動到或聚焦于與其等電點相當的pH位置上,電聚焦的優點是:有很高的分辨率,可將等電點相差0.01-0.02pH單位的蛋白質分開;一般電泳由于

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗             試劑、試劑盒 樣品緩沖液

    電泳分析常用方法

    (一)醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄 膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小,幾乎能完全消除紙電泳中出現的“拖尾”現象,又因為膜的親水性比較小,它所容納的緩沖液也少,電泳時電流的大部分由樣 品傳導,所以分離速度快,電泳時間短,樣品

    臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述

    分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清

    等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點

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    雙向電泳實驗

    ISO-DALT 方法 IPG-DALT 方法             實驗方法原理 雙向電泳(two-dime

    電泳的原理、分類和應用

      【概述】帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。  1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早發現。 

    雙向電泳實驗——ISO-DALT 方法

    實驗方法原理雙向電泳(two-dimensional electrophoresis)是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合,即先進行等電聚焦電泳(按照pI分離),然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小),經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒尿素去污劑儀器、耗材

    CEInfinite: 全柱成像新技術 拓展蛋白質分析無限想象空間

      【導語】用液相色譜法分離分析多肽或一些小蛋白的方法已經很成熟,但若要分析較大的蛋白質分子,科學和工業界都會選擇電泳技術,比如在生物制藥行業中做提純后蛋白質的分析表征。不過,不管是凝膠電泳還是傳統的毛細管等電聚焦,電泳實驗可真不是好做的,方法開發困

    載體兩性電解質pH梯度等電聚焦實驗—薄層分析等電聚焦

    實驗方法原理利用蛋白質分子或其他兩性分子的等電點的不同,在一個穩定的、連續的、線性 pH 梯度中進行蛋白質的分離和分析。所以利用等電聚焦技術分析的對象只限于蛋白質和兩性分子。分析的條件是凝膠中有穩定的、連續的和線性的 pH 梯度。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液儀器、耗材注射器水浴實驗步驟一

    常用電泳法

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    雙向電泳實驗——IPG-DALT 方法

    試劑、試劑盒尿素去污劑還原劑載體兩性電解質儀器、耗材IPG 凝膠實驗步驟一、第一向1. 固相 pH 梯度凝膠或凝膠條的準備固相 pH 梯度凝膠的灌注及聚合方法請參閱 固相 pH 梯度等電聚焦 有關章節,如需要可切成 3~5 mm 寬的膠條在 -20℃ 保存一年。為避免繁瑣和復雜的灌膠和切膠條程序和保

    CEInfinite: 全柱成像新技術 拓展蛋白質分析無限想象空間

    出色的重復性和超高分辨率   CE-WCID(全柱成像毛細管等電聚焦電泳儀)具有超高的蛋白質pI點的分辨率(△pI<0.01),這個指標無人能比。 蛋白質pl點的測定舉例:△pI<0.01,7分鐘完成實驗   蛋白質藥物主要成分和降解產物的pl點測定和重復性的考

    常用電泳法

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    生物藥物分析方法

      生物藥物包括直接從生物體分離純化所得生化藥物及利用基因重組技術或其它生物技術研制的生物技術藥物及生物制品。由于生物藥物具有毒性低、副作用小、易被吸收的特點,同時具有多方面的生物活性及功能,在疾病的預防、診斷及治療方面有著突出貢獻。隨著人們對生命本質及身體健康的日益關注,生物藥物的研究和開發日趨增

    蛋白質的雙向電泳實驗

    等電聚焦法             實驗方法原理 蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofoc

    電泳實驗的危害與防護注意事項

    1.DNA電泳與溴化乙錠“DNA的瓊脂糖凝膠電泳”是生物化學實驗的基礎型實驗。“質粒DNA的分離、純化和鑒定”在很多學校也是必開的綜合性實驗。這些涉及到DNA的提純及鑒定的實驗都會用到高度靈敏的熒光染色劑溴化乙錠對DNA進行染色。EB是強誘變劑,具有高致癌性,會在60~70 cc蒸發,所以在學生

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    電泳技術及其臨床應用新進展

    電泳技術是一門古老而又年輕的技術。早在1809年俄國物理學家Reuss就進行了世界上第一次電泳實驗,此后各種電泳技術及儀器相繼問世,廣泛應用于蛋白質、氨基酸、核酸、其他有機化合物甚至無機離子等領域的分離和/或鑒定。近年來,先進的電泳技術和各種自動電泳分析系統被越來越多的臨床實驗室所采用檢驗|地帶網搜

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