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實驗材料單向凝膠電泳分離后的蛋白樣品儀器、耗材微波爐微波爐專用塑料容器實驗步驟一、凝膠染色1.電泳結束后，將凝膠置于盛有試劑 A 的微波爐專用塑料容器中，試劑 A 的量要足夠覆蓋整塊凝膠。例如，一塊典型的 mini 膠（8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的試劑 A。2.用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰（約需 2 min)。3.室溫輕輕搖動凝膠，使之冷卻 5 min。4.棄去用過的試劑 A，用水快速地沖洗一下凝膠。這時，即使在藍色的背景下也可以看到蛋白含量在 IOOng 以上的蛋白條帶顯現出來。5.加入 IOOml 試劑 B，用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰（約需 80s)。6.棄去熱試劑 B，用水沖洗凝膠。此步完成后可見蛋白含量在 50 ng 以上的條帶。7.加入 IOOml 試劑 C，并用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰（約需 80s)。8.棄去熱試劑 C，用水沖洗凝膠。這樣，蛋......閱讀全文
考馬斯亮藍染色 銀染法 非氨鹽銀染法 快速銀染法 實驗方法原理 1.
凝膠染色是生物實驗室內經常會遇到的實驗操作，包括硝酸銀染色實驗和考馬斯亮藍染色脫色實驗2大類。傳統的凝膠染色實驗一般都需要借助脫色搖床來完成，主要操作步驟有加液、換液、排液和清洗等，全程比較依賴人工參與，因此我們常把傳統的凝膠染色稱為人工或手動凝膠染色。由于使用脫色搖床而帶來的非封閉性操作，手動凝膠
凝膠染色是生物實驗室內經常會遇到的實驗操作，包括硝酸銀染色實驗和考馬斯亮藍染色脫色實驗2大類。傳統的凝膠染色實驗一般都需要借助脫色搖床來完成，主要操作步驟有加液、換液、排液和清洗等，全程比較依賴人工參與，因此我們常把傳統的凝膠染色稱為人工或手動凝膠染色。由于使用脫色搖床而帶來的非封閉性操作，手動
（一）原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
③ 分析純過硫酸胺（AP）（AR） 0.14g加重蒸水至100ml，置棕色瓶，4℃儲存僅能用一周，最好當天配制。上述3種試劑用于制備分離膠。④ 濃縮膠緩沖液：稱取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,調pH6.7，用重蒸水定容至100ml，
④ 濃縮膠緩沖液：稱取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,調pH6.7，用重蒸水定容至100ml，置棕色瓶內，4℃貯存。⑤ 濃縮膠貯液：稱Acr10g，Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml，過濾后置棕色瓶內，4℃貯存。⑥ 40%
（一）原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不
（一）原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
（4）10% 過硫酸銨，5ml（0.5g過硫酸銨, 加5ml蒸餾水, 新鮮配置），-20℃保存一個月左右。（5）10% （w/v）SDS，10g SDS加蒸餾水100ml, 室溫保存。（6）10% TEMED 0.1ml TEMED , 加0.9 ml蒸餾水。（7） 2×上樣緩沖液（10ml）：0.
一、實驗目的和內容目的: 學習考馬斯亮藍（Coomassie Brilliant Blue）法測定蛋白質濃度的原理和方法內容：制作測定蛋白質濃度的標準曲線。制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術。一般用分光光度法測物質的含量，先要制作標準曲線，然后根據標準曲線查出所測物質的含量。考馬斯亮藍法測定蛋
非變性聚丙烯酰胺凝膠和變性sds-page電泳在操作上基本上是相同的，只是非變性聚丙烯酰胺凝膠的配制和電泳緩沖液中不能含有變性劑如SDS 等。一般蛋白進行非變性凝膠電泳要先分清是堿性還是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候，要利用低pH凝膠系統，分離酸性蛋白時候，要利用高pH凝膠系統。酸性蛋白通常在非變性
Native-PAGE原理:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 (Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等變性劑的條件下, 對保持活性的蛋白質進行聚丙烯酰胺凝膠電泳,常用于同工酶的鑒定和提純.未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離
實驗原理： 蛋白質含量測定法，是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經典方法，即定氮法、雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來的新的測定法，即考馬斯亮藍法（Bradford法）。其中Bra
免疫印跡法 （以檢測流行性出血熱病毒結構蛋白和 NP 核蛋白為例說明）實驗方法原理免疫印跡法 是將電泳與免疫酶染色結合起來的一種方法。它先經電泳 (SDS--PAGE)將病毒結構蛋白進行分離，通過轉印將被分離的各區帶原位轉移到硝酸纖維素膜 (nitrocellulose membrane, NC 膜
1．目的 學習SDS-PAGE的基本操作，學會用SDS-PAGE檢測蛋白。 2．原理 蛋白質在加熱變性以后與SDS結合，帶上負電荷，在電場的作用下，向正極移動，結果按分子量大小排列在膠板上，含量多的蛋白帶紋粗。 3．器材 旋渦混合器，微量移液取樣器，
試劑、試劑盒 SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8) 10%SDS10%過硫酸銨TEMEDTris-甘氨酸電泳緩沖液溴酚藍考馬斯亮藍 R-250 染色液考馬斯亮藍脫色液儀器、耗材 離心機冷室水浴鍋電泳裝置微量移
SDS-PAGE 蛋白質樣品的制備 試劑、試劑盒 SDS-PAGE
一、目的學習和掌握考馬斯亮藍G-250 測定蛋白質含量的原理和方法。二、原理考馬斯亮藍G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。考馬斯亮藍G-250 在游離狀態下呈紅色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白
蛋白質染色可用于（1）蛋白質的觀測（2）蛋白質含量的測定。實驗方法原理1. 凝膠中蛋白質的定位可用考馬斯亮藍染料染色或銀染色。前者簡便且快捷，而銀染法具有相當高的靈敏度，能用于檢出更少量的蛋白質。2. 蛋白質的存在影響酸堿滴定中所用某些指示劑的顏色變化，從而改變這些染料的光吸收。在些基礎上發展了蛋白
細胞骨架(cytoskeleton)是指真核細胞胞質中錯綜復雜的纖維狀網絡結構，主要包括微管（microtubule，MT，20~25 nm）和纖絲（filament）兩大類；另外，胞質中還散布著一些3~6 nm的細小纖維。按纖維的直徑、組成成分以及組裝結構的不同，纖絲又可分為微絲（micr
實驗材料含有已分離蛋白質的聚丙烯酰胺平板凝膠試劑、試劑盒化學切割劑考馬斯亮藍含1mol L Tris-Cl 的乙醇聚丙烯酰胺平板凝膠蛋白酶消化緩沖液蛋白酶溶液儀器、耗材白光盒和手術刀聚丙烯試管平板凝膠電泳儀SpeedVac 濃縮器實驗步驟方法 1: 酶催化的蛋白質片段化1.固定聚丙烯酰胺凝膠中分離的
實驗方法原理噬菌體展示技術是將外源基因與噬菌體的表面蛋白基因融合，在融合了外源基因的噬菌體顆粒的表面就會表達相應的外源蛋白，即外源基因編碼的蛋白被展示在噬菌體顆粒的表面。實驗材料載體tRNA抗體寡核苷酸試劑、試劑盒抗生素儲存液BCIP葡萄糖儲存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制劑RNase 抑制劑TEN
實驗步驟 基 本 方 案 1 考馬斯亮藍染色檢測范圍為〇.3?lMg 每蛋白質條帶。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)聚丙烯酰胺凝膠（單 元 12. 3)考馬斯亮藍、銀染用固定液考馬斯亮藍染液甲醇/乙酸脫色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 濾 紙（可選）干 膠
用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗實驗步驟 一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk，35?45 mm 長）或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域，
方案1 雙向凝膠電泳鼠肝蛋白質提取物的制備實驗 方案2 雙向凝膠電泳真核生物細胞裂解物的制備實驗 方案3 雙向凝膠電泳大腸桿菌裂解液的制備實驗 方案4 雙向凝膠電泳腦脊液蛋白樣品的制備實驗 方案5 第一向：蛋白質的等電聚焦電泳實驗
一、實驗目的1. 掌握考馬斯亮藍R250 對植物細胞骨架染色的方法。2. 通過對洋蔥內皮細胞的處理，掌握植物細胞骨架的制備方法與顯微形態觀察。二、實驗原理細胞骨架(cytoskeleton)，是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網絡結構，根據蛋白質纖維的直徑、組成成分和組裝結構的不同可分為微絲、微管和中
實驗步驟一、材料1.動物一 年 中 的 問 一 時 間 在 不 同 米 樣 點 潮 落 時 采 集 貽 貝 Lmk，35?45 mm 長）或者是貝殼長度為 5 cm 的 紫 貽 貝 edwfe)。其中一個采樣點是有記錄的清潔區域，在這里采集到的動物作為對照。2. 富含過氧化物酶體組分的分離在分離過程
用蛋白質組學方法對海洋環境中過氧 化物酶體增殖污染物進行風險評估實驗 實驗步驟
實驗概要掌握考馬斯亮藍R250 染細胞骨架微絲的方法，了解動物細胞骨架的基本形態結構。實驗原理真核細胞胞質中縱橫交錯的纖維網稱為細胞骨架(cytoskeleton)。根據纖維直徑、組成成分和組裝結構的不同，分為微管(microtubule, MT)、微絲(microfilament, M
實驗方法原理 實驗材料 待測蛋白質樣品試劑、試劑盒 10％三氯醋酸（TCA）考馬斯亮藍凝膠染色液考馬斯亮藍凝膠脫色液儀器、耗材 Whatman 3 MM 濾紙實驗步驟 1. 用鉛筆在 3 mm 濾紙上畫出 1 cm x 1 cm 大小的方格；2. 在每一方格中心加入 3 ul 樣品；3. 將濾紙涼干