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實驗材料抗體試劑、試劑盒PBS儀器、耗材離心機離心管實驗步驟1. 同備擇方案1中大規模制備MAb上清的步驟1~4，但等細胞長到合適的密度時就應收獲細胞，或者是在細胞生長的平臺期收獲。 2. 將細胞倒入無菌的250 ml 錐形離心管中，于4℃ 250 g 離心15 min，棄上清。 3. 置細胞沉淀于冰上，重懸細胞于4℃250 ml 的PBS，于4℃250 g 離心，棄上清。4. 重復以上步驟，最終把細胞合并到一管中，細胞經過3次冼滌后，可以用干其后的工作（如細胞裂解，放射性同位素標記）。展開......閱讀全文
一、對照實驗 1．吸收實驗 應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時，需用相應的抗原吸收抗血清后，再孵育標本，判斷結果的可信性（結果應為陰性）。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種（見本書第一章 ），對于不能形成沉淀，難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原，以固相吸收為佳
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得
抗體制備制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
實驗概要本實驗介紹了果蠅類標本的辣根過氧化物酶標記試劑染色檢測操作流程。實驗原理果蠅類標本被固定及透化處理后，可加入抗體。如同其他免疫組化技術一樣可以直接用標記的一抗，或者通過標記的二級試劑(能與一抗特異性結合)進行檢測。一般而言，直接標記一抗產生的信號更為清晰，背景較低。不足之處在于如檢測多種抗原
抗血清的制備 【原理】：用抗原刺激機體可以產生抗體，抗原的性質、純度和活性影響其免疫動物后獲得的抗體的的特異性和效價。在體外有目的的制備抗原，經初次、再次免疫的過程可以獲得高質量的抗體。 【注意事項】 ①制備佐劑時，一定要順著同一方向用勁磨。 ②檢查油包水的方法：培養皿內加水，滴入混勻液
實驗概要本實驗介紹了果蠅類標本的辣根過氧化物酶標記試劑染色檢測操作流程。實驗原理果蠅類標本被固定及透化處理后，可加入抗體。如同其他免疫組化技術一樣可以直接用標記的一抗，或者通過標記的二級試劑(能與一抗特異性結合)進行檢測。一般而言，直接標記一抗產生的信號更為清晰，背景較低。不足之處在于如檢測多種抗原
制備高特異性、高效價的抗體是實驗免疫學技術的基礎，抗體質量的高低將直接影響試驗的成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或將抗體用于特定的用途，就需要進行抗體純化。抗體純化分了幾種類型，根據用途決定選擇哪種方法進行純化：1. 粗純：將制備抗體的血清
WB免疫印跡法，也稱免疫轉移技術IBT(Immunoblotting)，是Towbin將1975年Southern發明的Soutnern blotting技術應用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學檢測方法。其操作簡便，主要用于未知蛋白檢測及抗原組分、抗原決定簇鑒定，同時也用于未知抗體的檢測和單
外周血是臨床檢驗中的重要標本。FCM分析外周白細胞的主要目的是了解各種白細胞的數目與分群情況。這些數字的變化與臨床的某些疾病有一定的關系。近年來，由于多種識別白細胞膜表面抗原的單克隆抗體的發現，以及對這些單克隆抗體的直接或間接熒光標記物的出現，使得利用FCM的熒光組織化學分析獲得被測細胞的多指標的更
外周血是臨床檢驗中的重要標本。FCM分析外周白細胞的主要目的是了解各種白細胞的數目與分群情況。這些數字的變化與臨床的某些疾病有一定的關系。近年來，由于多種識別白細胞膜表面抗原的單克隆抗體的發現，以及對這些單克隆抗體的直接或間接熒光標記物的出現，使得利用FCM的熒光組織化學分析獲得被測細胞的多指標的更
膠體金免疫層析法快速檢測腹瀉性貝毒軟海綿酸的研究 劉仁沿1 , 梁玉波3 1 , 陳 媛2 , 許道艷1 , 陳冰君1 , 劉永健1 (1. 國家海洋環境監測中心,遼寧大連116023 ; 2. 江西中德生物工程有限公司,江西南昌330029) 摘 要:腹瀉性貝毒是一類分布較
β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備 目前，在我國奶牛養殖業中，青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期，致使牛奶中抗生素殘留超標，乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在同一個抗體公司，可能會有好幾種，甚至好幾十種；在不同的抗體公司，那就更多了。那怎樣在琳瑯滿目的抗體中，選擇自己實驗需要的抗體呢？主要考慮如下幾種因素：分析自己實驗應用的實驗方法是哪種？分析自己實驗中標本的種屬是哪種動物或人的？分析樣本中的蛋白質的結構性質
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
（四）染色原理及步驟 1．基本原理 酶標抗體與熒光色素標記抗體的染色相同，亦分直接法和間接法。直接法是將酶直接標記在每一抗體上，間接法是將酶標記在第二抗體上，檢測組織細胞內的特定抗原物質。間接法所用的第一抗體是對組織細胞內某種抗原的特異性抗體（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而絕大數單克隆
β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備目前，在我國奶牛養殖業中，青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期，致使牛奶中抗生素殘留超標，乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限量抗生素的原
【本屆論壇特點】 前沿學術交流與實驗技能培訓班有機的結合在一起，讓生物制藥科研人員在了解新技術、新工藝、新材料等行業前沿動態的同時，有機會在國內外一線專家的指導下親自上機操作，切實提高一線技術人員在研發和生產過程中解決實際問題的水平和動手操作能力。 強大的演講嘉賓陣容，本次論壇將邀請近30位
實驗概要本實驗介紹了三種抗體純化的方法。實驗步驟1. 抗Fab片段抗體親和層析純化法 1) 偶聯抗人或抗鼠Fab片段抗體到Protein G Sepharose，將純化的抗人或鼠Fab片段抗體以2mg/ml的比例與Protein G Sepharose凝膠珠溶液混合，
近年來，隨著生物藥市場和基因工程技術的發展，重組治療性抗體或者單抗的需求在生物藥中的比例也逐年上升。重組mAbs被應用于包括癌癥及免疫系統缺陷在內的許多疾病的治療當中。重組mAbs通過基因工程技術改造后可以在多種宿主細胞表達。重組mAbs在表達后進行翻譯后修飾、蛋白質折疊、組裝及適當的糖基化才能具有
近年來，隨著生物藥市場和基因工程技術的發展，重組治療性抗體或者單抗的需求在生物藥中的比例也逐年上升。重組mAbs被應用于包括癌癥及免疫系統缺陷在內的許多疾病的治療當中。 重組mAbs通過基因工程技術改造后可以在多種宿主細胞表達。重組mAbs在表達后進行翻譯后修飾、蛋白質折疊、組裝及適當的糖
抗體的概念 動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) 是指存在于人和動物血液(
（一）大咖授課，機會難得 分離純化行業的泰斗級專家黃駿雄老師與擁有多年蛋白純化培訓和項目指導經驗的姜韜老師，作為主講嘉賓，親自授課。為確保培訓效果，姜韜老師與黃駿雄老師在九月上旬親臨納微科技，查看實驗培訓的設備與環境，為確保培訓課程能達到最佳效果，帶領工作人員完成預實驗。 （二）小班授課，最
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
一、多克隆抗體的制備【實驗原理】當將抗原注射入實驗動物體內時，一系列抗體生成細胞會不同程度的與抗原結合，受抗原刺激后在血液中產生不同類型的抗體，這種由一種抗原刺激產生的抗體稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分—抗原決定簇相結合。將抗原導入敏感動物體內
實驗材料 正常鼠血清鼠單克隆抗地髙辛抗體鼠抗 FITC 抗體AMCA-親和素FITC-親和素生物素化山羊抗親和素抗體Cy3 標記的親和素Cy3 標記的山羊抗鼠抗體Cy3 標記的兔抗山羊抗體Cy3 標記的驢抗兔抗體Cy3 標記的兔抗鼠抗體 地高辛標記的山羊抗鼠抗FITC 標記的驢抗鼠抗體FIT
ELISA原理 ELISA利用抗原抗體之間專一性結合之特性，對標本進行檢測；由于結合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計 其結合 機制後，配合酵素顯色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與結合機制的不同，ELI
（一）實驗班簡介 為滿足研發及產業工作中的實際需求，讓從事生命科學研究與生物技術應用領域的專業人員更好、更快、更高質量地完成科研任務，納微科技將同期舉辦小分子制備色譜分離純化實驗培訓班和蛋白/抗體純化高級實驗技能培訓班。兩組實驗培訓班分別由兩組不同老師進行授課。 時間：2016.10.15-
實驗概要本實驗介紹了三種抗體純化的方法。實驗步驟1. 抗Fab片段抗體親和層析純化法 1) 偶聯抗人或抗鼠Fab片段抗體到Protein G Sepharose，將純化的抗人或鼠Fab片段抗體以2mg/ml的比例與Protein G Sepharose凝膠珠溶液混合，
所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用，通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用，是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上，免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用，不同的部分在于, 層析后需要回收