酵母細胞核制備實驗——差速離心法
細胞核（nucleus）是細胞中最大、最重要的細胞器（初中老教材認為細胞核不是細胞器，大學細胞生物學則認為是細胞器，這里以大學教材為準），它是由核膜（nuclear membrane）、核骨架（nuclear scaffold）、核仁(nucleolus) 幾部分組成。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒細胞核緩沖液Ficoll緩沖液儀器、耗材勻漿機實驗步驟1. 將酵母菌接種于YPD培養基（100 ml 到20 L），劇烈搖動或強制通氣條件下培養至對數中期（OD600≈1~5）。培養物在預稱重的離心瓶中于4℃， 1 500 g 離心5 min。 2. 確定酵母細胞的濕重，它與壓緊的細胞體積大致相同。在所有的后續步驟中菌體的量將當作1體積來考慮。 3. 細胞用2~4體積冰水重懸，并立即于4℃，1 500 g 離心5 min，加入1體積含30 mmol/l DTT的酵母消解酶緩沖液重懸細......閱讀全文
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
試劑、試劑盒?甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS) 緩沖液 G緩沖液 H 緩沖液 DTM 緩沖液+0.1 ml L KCl實驗步驟 材料HeLa 細胞（培養和保存條件見下文。我們也成功地使用過 CellexBiosciences 公司制備并冷凍的 HeLa 細胞
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
在本實驗中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法從HeLa細胞制備核提取物的。這一基本方法大概是制備體外轉錄和DNA結合實驗用因子的最常用的方法。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS)緩沖液
酵母基因組DNA的玻珠制備法
實驗概要本實驗利用玻珠制備法制備了酵母基因組DNA。主要試劑無菌水，裂解緩沖液，5mol/L NaCl，苯酚，氯仿：已戊醇(24：1)，乙醇，TE緩沖液，EDTA-Sark，蛋白酶K，5mol/L醋酸銨主要設備搖床，玻璃離心管，臺式離心機，玻珠，振蕩器，P-1000移液器，1.5ml離心管實驗步驟1
感受態制備：酵母感受態細胞制備實驗
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. ?試劑?細菌用-酵母提取物（Fi
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
原代細胞核仁的制備
試劑和器材：?1.?懸浮緩沖液：0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；2.?密度阻滯溶液：0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；3.?按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑
酵母蛋白質和－RNA－的制備（稀堿法）
實驗概要本實驗介紹了從酵母中分離制備蛋白質和 RNA 的原理和方法。實驗原理酵母細胞富含蛋白質和核酸。用稀堿液（0.2% 的氫氧化鈉）處理酵母使細胞裂解，離心收集上清液，得到酵母核蛋白抽提液。用鹽酸調節抽提液 pH 至 3.0 （核蛋白的等電點），核蛋白溶解度下降大量沉出，離心收集沉淀物為酵母蛋白質
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
酵母細胞破碎實驗——液氮破碎法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒液氮儀器、耗材塑料燒杯混合器實驗步驟1. ?酵母在YPD（或選擇性）培養基中劇烈振蕩下培養至對數中期。離心，棄上清，市售酵母糕可以用來代替培養細胞。2. ?在旋渦混合器上振蕩細胞沉淀，使其形成粘稠的細胞糊，必要時，加入最少量的冰水使細胞糊能夠倒出或舀出，如果使用酵母糕，用等
酵母菌基因克隆實驗——互補法
實驗材料酵母菌實驗步驟1. ?用含LEU 2作為選擇標志的酵母菌DNA文庫轉化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培養，依據插入片段的大小，篩選2 000~20 000個Leu+轉化體。?2. ?影印平板轉化體，將其轉印到預熱的選擇性平板，并于37℃培養篩選互補溫感突變的表型。過夜培養之
酵母感受態細胞制備實驗——化學法
酵母感受態細胞制備可應用于：（1）建立酵母轉化體系；（2）酵母表達系統構建；（3）酵母其他分子生物學研究。實驗方法原理感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并進行轉化。化學法簡單，快速，穩定，重復性好，廣泛用于外源基因的轉化。實
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液儀器、耗材 塑料離心瓶Corex 管實驗步驟 1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106 細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 離心機，H-600A 轉頭，3000 r/
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞 試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液 儀器、耗材
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒TM-2 緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
分離核仁實驗——HeLa細胞細胞核或核仁的制備
實驗材料HeLa細胞試劑、試劑盒PBS儀器、耗材Teflon-玻璃勻漿器實驗步驟1. 準備溶液：PBSRSB-8 10 mmol/L Tris；10 mmoI/L NaCl，8 mmoI/L 乙酸鎂，pH 7.4RSB 10 mmol/L Tris；10 mmol/L NaCl，1.5 mmol/L
活化劑裂解方法制備細胞核實驗
用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒TM-2 緩沖液儀器、耗材塑料離心瓶Corex 管實驗步驟1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106?細胞/ml。2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B
釀酒酵母培養基的制備實驗——YPAD培養基的制備
試劑、試劑盒酵母提取物蛋白胨葡萄糖偏硫酸腺嘌呤瓊脂水儀器、耗材錐形瓶實驗步驟1. 在 1 L 的帶螺旋蓋的瓶中或錐形瓶中將下面的成分溶于 500 ml 水中，置于振蕩器上。酵母提取物 6.0 g，蛋白胨 12.0 g，葡萄糖 12.0 g，偏硫酸腺嘌呤 60.0 mg，瓊脂 10.0 g，加水到 6
釀酒酵母培養基制備實驗—檢測酵母中β半乳糖苷酶活性
試劑、試劑盒酵母氮堿基葡萄糖SC-Ura 或 SC-Trp 或 SC-Len 或 SC-His 的混合物蒸餾水瓊脂儀器、耗材磁力攪拌器錐形瓶實驗步驟1. 在 1 L 的螺旋蓋瓶或錐形瓶中將下面的成分溶于水中，置于攪拌器上混勻。酵母氮堿基 4.0 g，葡萄糖 12.0 g，SC-Ura 或 SC-Tr
苯酚法制備酵母tRNA
試劑、試劑盒 DEAE 纖維素 二乙醇胺 (TEA) 溶液 0.lmol LTEA 緩沖液 0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液 12mol L 氯化鈉含 0.lmol LTEA 緩沖液 lmol L 氯化鈉含 0.lmol LTEA 緩沖液 乙醚 水飽和酚 乙醇儀器
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料 酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒 異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液T
苯酚法制備酵母tRNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 DEAE 纖維素 ? 二乙醇胺 (TEA) 溶液 0.lmol LTEA 緩沖液 ?0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液
苯酚法制備酵母tRNA
通過 DEAE 纖維素柱純化，除去少量 DNA、大分子 RNA、蛋白質、多糖等雜質，最后得到各種氨基酸專一性 tRNA 的混合物.試劑、試劑盒DEAE 纖維素二乙醇胺 (TEA) 溶液0.lmol LTEA 緩沖液0.lmol L 氯化鈉含 0.lmoi. LTEA 緩沖液12mol L 氯化鈉含
酵母總RNA的制備
試劑、試劑盒 AE 緩沖液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 無水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸鈉 無 RNase 的水儀器、耗材 髙速離心機實驗步驟 一 材料與設備1)AE 緩沖液：50 mmol/L 乙酸鈉 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 緩沖液預先平衡）。3)
酵母DNA的小量制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
酵母總RNA的制備
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 AE 緩沖液。 ? 苯酚 10%SDS ?酚 ?氯仿 ? 無水乙醇 乙醇. ?3mol L 乙酸鈉 ?無 RNase
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液TE酵母
原代細胞核基質的制備
試劑和器材：?1.?硫酸銨（含10mmol/L Tris-HCl，（pH7.4）及0.2mmol/L MgCl2的1mol/L與0.2mol/L硫酸銨溶液）；2.?氯化鎂（1mol/L儲存液）；3.?苯甲基磺酰氟（PMSF）（無水乙醇配制的1mol/L儲存液）；4.?純化的細胞核保存于含0.25mo
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，