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    構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗

    實驗材料E.coli MC 1061 (Bio-Rad)硫氧還蛋白表達載體質粒DNA 洗脫液試劑、試劑盒DNA 聚合酶DNA 連接酶小牛腸堿性磷酸酶(CIP)限制性內切核酸酶反應緩沖液4dNTPTris·Cl培養基儀器、耗材QIAquick 膠回收試劑盒質粒制備試劑盒DNA 合成儀16℃ 和 95℃ 水浴PCR 純化柱電轉儀實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 用自動 DNA 合成儀合成如下的 91-堿基的隨機寡核苷酸和 17-堿基的引物。分別用水溶解使其終濃度為 1 ug/ul。寡核苷酸 : 5'-GACTGACTGGTCCG (NNK)20GGTCCTCAGTCAGTCA-3'。此處 N 代表 A,G,C 或 T; K 代表 G 或 C。引物:5'-CTGACTGACTGAGGACC-3'。2. 按順序加入下列試劑到一 1.5 ml 離心管中(終體積 890 ul):......閱讀全文

    構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗

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    構建硫氧還蛋白肽適配體組合庫實驗

    實驗方法原理 實驗材料 E.coli MC 1061 (Bio-Rad)硫氧還蛋白表達載體質粒DNA 洗脫液試劑、試劑盒 DNA 聚合酶DNA 連接酶小牛腸堿性磷酸酶(CIP)限制性內切核酸酶反應緩沖液 4dNTPTris·Cl培養基儀器、耗材 QIAquick 膠回收試劑盒質粒制備試劑盒DNA 合

    用肽適配體正向分析細胞過程實驗2

    輔助方案 肽適配體靶點的鑒定實驗方法原理通過配對相互作用或捕獲法鑒定的肽適配體的假定靶點應當通過遺傳學測試進行驗證,例如:1. 用免疫沉淀法確定體內適配體的相互作用;2. 通過上位(顯)性分析以確定適配體在與靶蛋白相同的區域發揮功能;3. 比較由靶蛋白刪除或過表達引起的表型與由適配體造成的表型。實驗

    肽適配體的親和力成熟實驗

    實驗材料質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒Taq 聚合酶10×緩沖液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全極限(CM) 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器30℃ 培養箱實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 制備

    肽適配體的親和力成熟實驗

    實驗方法原理 實驗材料 質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒 Taq 聚合酶10×緩沖液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全極限(CM) 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材 PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器 30℃ 培養箱實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「

    用肽適配體正向分析細胞過程實驗

    實驗方法原理 實驗材料 用于遺傳學篩選的酵母株肽適配體庫試劑、試劑盒 完全極限(CM) 缺失成分液體培養基和平板儀器、耗材 30℃ 培養箱實驗步驟 1. 用高效乙酸鋰轉化法將 50~100 ug 肽適配體庫(在 pJM-2 或 pJM-3 中)轉化酵母篩選株(106~107 轉化株)。將轉化株涂布到

    用肽適配體正向分析細胞過程實驗1

    實驗材料用于遺傳學篩選的酵母株肽適配體庫試劑、試劑盒完全極限(CM) 缺失成分液體培養基和平板儀器、耗材30℃ 培養箱實驗步驟1. 用高效乙酸鋰轉化法將 50~100 ug 肽適配體庫(在 pJM-2 或 pJM-3 中)轉化酵母篩選株(106~107 轉化株)。將轉化株涂布到 10 cm

    利用雙雜交系統相互作用阱/篩選特定蛋白肽適配體實驗

    實驗材料DNA酵母株試劑、試劑盒PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限(CM) 缺失成分培養基和平板儀器、耗材30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 使用標準的亞克隆技術,將編碼誘餌蛋白的 DNA 插入 PEG20

    利用雙雜交系統相互作用阱/篩選特定蛋白的肽適配體...

    利用雙雜交系統相互作用阱/篩選特定蛋白的肽適配體實驗實驗方法原理 實驗材料 DNA酵母株試劑、試劑盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限(CM) 缺失成分培養基和平板儀器、耗材 30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其

    中國科大篩選出特異針對點突變蛋白的適配體

      近日,中國科學技術大學教授單革實驗室發明了一種新的篩選方法,可篩選出能特異針對具有細微改變(比如單氨基酸殘基突變)蛋白質的核酸(RNA)適配體。該研究成果發表在7月27日的《美國國家科學院院刊》(PNAS)上,論文第一作者為博士陳亮。   RNA適配體是人工合成及篩選出的能特異結合小分子、蛋白質

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