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原代細胞的培養與建系 細胞的來源多樣，培養方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經分散接種之手段稱為傳代。凡能經傳代方式進行再次培養的細胞稱為傳代細胞。若能穩定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經大量擴增后所形成的生物學特性穩定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術是從事細胞培養工作的基礎，只有熟悉和掌握了基本技術,才可能更快捷地學習和掌握其他方法,本章重點敘述常用的基本技術。 第一節 原代細胞的取材 &nb......閱讀全文
無血清培養基的出現是培養基發展歷程上的一個里程碑，其一般是在合成培養基的基礎上，引入成分完全明確的或部分明確的血清替代成分，使培養基能滿足動物細胞培養的要求，又可有效的克服因使用血清所引發的問題。進入20世紀80年代后，新的無血清培養基不斷問世，人們經過研究發現，只要在培養基中增加某些適于細胞生長的
CHO細胞無血清培養入門技術手冊——深圳百恩維生物1、CHO細胞背景CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美國科羅拉多大學Dr. Theodore T. Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得，為
流式細胞儀在生物學中的應用 耿慧霞 ,王 來 ,王 強 (河南大學生命科學學院 ,河南開封 475001) 摘 要 :簡要論述了流式細胞儀(flow cytometry ,FCM) 的工作原理 ,并對其在生物學基礎科學研究中的應用進行闡述 ,包括 對細胞凋亡、細胞周期、免疫細胞、細胞受體的研
(二)原代細胞的維持 1、貼壁細胞（包括半貼壁細胞的換液） 貼壁細胞長成網狀或基本單層時，由于營養缺乏，代謝產物增多，pH變酸，不適宜細胞生長，此時細胞還未長成單層，未達到飽和密度，仍需繼續培養，因此，需采取換液方式來更新營養成分以
細胞培養技術細胞周期的測定一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。 單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。 測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法
一、原代細胞的培養與維持1、靜置貼壁細胞（包括半貼壁細胞的培養）凡經消化液處理實體組織來源的細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性，細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L,培養基可用 Eagle（MEM）或DNEM培養，小牛血清濃度為10%~80%。在起始的2天中盡量減少振蕩，以
6 細胞培養基的選擇 6.1根據細胞特點、蛋白表達及病毒特點和培養方式選擇細胞培養基 商售工業用細胞培養基主要是干粉培養基，常用的培養基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等系列，根據細胞的特性及工業化的生產需求，開發或生產的同一系列的細胞培養基在成份上也有
各種已被命名和經過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株，都是一些形態比較均一、生長增殖比較穩定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應的名稱，即文獻中常稱之為已鑒定的細胞（Certified Cells）。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產生物制品。當前世界上已建的各種細胞系（株
一、概念1、細胞系（Cell Line）：原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。2、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志
實驗概要mESCs建系主要試劑細胞基礎培養液、DPBS、0.25%Trypsin、0.1%明膠、兔抗鼠全血清原液、豚鼠補體、0.5%鏈蛋白酶、沖胚液、培養液A、mESCs培養液B主要設備35 mm、60 mm、100 mm培養皿、15 mL離心管、50 mL離心管、體視鏡、注射器、鑷子、虹膜剪實驗材
2010年5月ATCC SDO（Standards Development Organization）工作組在Nature review cancer雜志上發表了題為《Cell line misidentification：the beginning of the end》前瞻性報道。以下是全文
植物組織培養（Plant Tissue Culture）：是指通過無菌操作分離植物體的一部分（外植體explant），接種到培養基上，在人工控制的條件下（包括營養、激素、溫度、光照、濕度）進行培養，使其產生完整植株的過程。（主要有原生質體（Protoplast），懸浮細胞，組織（愈傷組織Callus
最近一段時間我們一直圍繞著腫瘤動物模型的構建，為大家介紹了腫瘤研究中各種實用動物模型的建立方法，相信大家應該收獲頗多。動物水平的研究為我們提供了更接近臨床的數據分析，與此同時，腫瘤細胞的實驗研究也同樣重要，它是腫瘤研究的初級階段，可以更加快捷地提供在體外水平的研究結果。本期我們就開啟腫瘤細胞學新
人類多能干細胞(hPSCs)因其擁有分化為機體所有類型細胞的能力，使得hPSCs成為研究發育機制以及疾病機理最常用的工具，同時在再生醫學以及疾病治療領域也有非常廣泛應用。人類多能干細胞因其來源不同又可分為胚胎干細胞（Embryonic stem cell，ESCs）和誘導多能干細胞（induce
一、傳代細胞的傳代培養（1）吸除或倒掉原瓶中的舊培養基（以25mL培養瓶為例）。（2）每瓶加入2mL,無鈣、鎂PBS，漂洗一次后倒掉。（3）每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），輕輕搖動培養瓶，經消化液鋪滿所有細胞表面，待細胞層略有松動，肉眼可觀察到“薄膜”現象時，
以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞，很難在體外培養生長或僅能短期培養而不能傳代，近年來由于細胞培養技術的發展，已有血細胞培養成功的報道，正常血細胞在體外培養生長時間短，只有白血病細胞，血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養成功并建立細胞系，但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉化細
人類多能干細胞(hPSCs)因其擁有分化為機體所有類型細胞的能力，使得hPSCs成為研究發育機制以及疾病機理最常用的工具，同時在再生醫學以及疾病治療領域也有非常廣泛應用。人類多能干細胞因其來源不同又可分為胚胎干細胞（Embryonic stem cell，ESCs）和誘導多能干細胞（induced
一、概念1、細胞系（Cell Line）：原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。2、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須
一、概念1、細胞系（Cell Line）：原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系（Lineage of Cells）所組成。2、細胞株（Cell Strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須
實驗概要人誘導性多能干細胞誘導主要試劑DPBS、0.25% Trypsin、1mg/mL膠原酶Ⅳ、絲裂霉素C、0.1%明膠、Polybrene、PE-TRA-1-60抗體、hESCs培養液、細胞基礎培養液條件培養液hiPSCs的誘導是一個長時間的過程，在飼養層質量下降之后，可以選擇使用條件培養液。條
實驗概要hESCs的分離及建系主要試劑hESCs培養液、DPBS、0.25%Trypsin、1 mg/mL膠原酶Ⅳ、絲裂霉素C、0.1%明膠、囊胚培養液G2、胚胎凍存液、細胞基礎培養液主要設備35 mm培養皿、4孔培養板、濾器、注射器針頭；2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、25 mL、50
一、慢病毒的儲存與稀釋:1. 病毒的儲存：收到病毒液后在很短時間內即使用慢病毒進行實驗，可以將病毒暫時放置于4 ℃保存；如需長期保存請放置于-80℃（病毒置于凍存管，并使用封口膜封口）① 病毒可以存放于-80℃ 6個月以上；但如果病毒儲存時間超過6個月，建議在使用前需要重新滴定病毒滴度。② 反復凍融
慢病毒用于體外（in vitro）實驗：感染培養原代細胞和建系細胞1. 慢病毒對各種細胞和組織的親嗜性不同，用戶使用Invabio提供的慢病毒之前可以通過查閱相關文獻，了解慢病毒對您的目的細胞的親嗜性，感染復數（MOI 值）以及在體內（in vivo）注射所需要的病毒量。如果沒有相關文獻支持
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部
實驗方法原理 細胞生長曲線是觀察細胞生長基本規律的重要方法。只有具備自身穩定生長特性的細胞才適合在觀察細胞生長變化的實驗中應用。因而在細胞系細胞和非建系細胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數法進行。實驗材料 細胞試劑、試劑盒 D-Hanks液牛血清R
實驗概要猴胚胎干細胞（monkey Embryonic Stem Cells，monESCs）的分離及建系主要試劑重組人卵泡刺激素（recombinant human Follicle Stimulating Hormone，rhFSH）、hCG、豚鼠補體、抗猴全血清、TL-HEPES、0.5
提 綱 一、化療藥物的發展 二、腫瘤的藥物治療 三、抗腫瘤藥物篩選及評價 四、體外抗腫瘤活性試驗 五、體內抗腫瘤活性試驗 一、化療藥物的發展 ? 近代腫瘤化療學始于20世紀40年代。 ? 50年代通過動物篩選化療藥物發現了5FU、MTX、CTX等，
提 綱 一、化療藥物的發展 二、腫瘤的藥物治療 三、抗腫瘤藥物篩選及評價 四、體外抗腫瘤活性試驗 五、體內抗腫瘤活性試驗 一、化療藥物的發展 ? 近代腫瘤化療學始于20世紀40年代。 ? 50年代通過動物篩選化療藥物發現了5FU、MTX、CTX等，
實驗概要小鼠誘導性多能干細胞誘導及建系主要試劑0.05%Trypsin、0.25% Trypsin、0.1%明膠、細胞基礎培養液、DPBS、凍存液A、iPSCs誘導培養液實驗材料35 mm、60 mm、100 mm培養皿，15 mL、50 mL離心管、體視鏡實驗步驟①每隔24 h為感染后的細胞換液，
新買到的細胞，實驗室傳了幾代的細胞，又或者儲存于超低溫冰箱幾年不用的細胞，被污染了么？ 鑒定正確么？用它做研究會影響實驗結果么？ 沒有經過相應的細胞鑒定，使用了被污染的細胞，經過大量的實驗，寫出一篇論文，但是結論被推翻，論文被召回，大量的時間、物力和人力被浪費，一切都要從頭再來。 背景介紹應用于