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· Yeast Two-Hybrid System (Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast two-hybrid system technique with introduction to its background. The following procedures are described: mating assay - small scale for tens of different bait or prey proteins, collecting bait (and prey) strains, large scale for hundreds of different bait or......閱讀全文
作為后基因組時代出現的新興研究領域之一, 蛋白質組學(proteomics)正受到越來越多的關注。 蛋白質組學的研究目標是對機體或細胞的所有蛋白質進行鑒定和結構功能分析。 蛋白質組學的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質分離技術如二維凝膠電泳和高效液相
免疫共沉淀和親和層析共分離：免疫共沉淀是證明蛋白質-蛋白質相互作用的最直接最經典和最有效的方法，如蛋白A能與B相互作用結合成異源二聚體，無論用抗A或抗B的抗體或與A或 B的親和物偶聯的agarose小珠都能把A和B沉淀下來。因此廣泛用于蛋白質相互作用研究。常用的小珠：GST-Agarose（不需要抗
作為后基因組時代出現的新興研究領域之一, 蛋白質組學(proteomics)正受到越來越多的關注。 蛋白質組學的研究目標是對機體或細胞的所有蛋白質進行鑒定和結構功能分析。 蛋白質組學的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質分離技術如二維凝膠電泳和高效液相層析, 經典的蛋白質鑒定方法如氨
摘要 蛋白質組學是在后基因組時代出現的一個新興的研究領域, 它的主要任務是識別鑒定細胞、組織或機體的全部蛋白質, 并分析蛋白質的功能及其模式。 因此, 揭示蛋白質組中蛋白質間的相互作用關系也是蛋白質組學的重要內容之一。 酵母雙雜交技術是用來檢測蛋白質間是否相互作用的一
隨著分子生物學技術的開展，對生物基因組中包含的全部基因及其所翻譯的蛋白質的功用加以解讀和描繪，特別是大量未知基因的功用及其相應蛋白質產物的功用停止研討成了基因工程研討的熱點方向。而在蛋白質程度上定量、動態、整體性研討生物體的蛋白質組學，將在后基因組時期大大促進我們對基因功用的了解。酵母雙雜交實驗
隨著對多種重要生物的大規模基因組測序工作的完成，基因工程領域又迎來了一個新的時代---功能基因組時代。它的任務就是對基因組中包含的全部基因的功能加以認識。生物體系的運作與蛋白質之間的互相作用密不可分，例如：DNA合成、基因轉錄激活、蛋白質翻譯、修飾和定位以及信息傳導等重要的生物過程均涉及到蛋白質復合
酵母雙雜交系統酵母雙雜交系統是在真核模式生物酵母中進行的，研究活細胞內蛋白質相互作用，對蛋白質之間微弱的、瞬間的作用也能夠通過報告基因的表達產物敏感地檢測得到，它是一種具有很高靈敏度的研究蛋白質之間關系的技術。大量的研究文獻表明，酵母雙雜交技術既可以用來研究哺乳動物基因組編碼的蛋白質之間的互作，也可
檢測原理：酵母雙雜交系統（Yeast two-hybrid assay）是用于體內研究蛋白相互作用的一種非常便利的工具，常用的如GAL4為基礎的系統，使用酵母轉錄因子GAL4來檢測轉錄激活后的蛋白相互作用。某些轉錄因子（如GAL4）由兩個可以分開，功能上相互獨立的結構域組成，N端有一個147個氨
概述酵母雙雜交系統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立。典型的真核生長轉錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結構域: DNA結合結構域（DNA-binding domain）和轉錄激活結構域（transcription-activating domai
酵母三雜交系統（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白質與 RNA 間的相互作用。在酵母三雜交系統中，RNA 蛋白質相互作用導致報道基因的轉錄，可以通過細胞生長、克隆顏色或特異的酶活性檢測蛋白質與 RNA 的相互作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方
一、分子生物學Promega:Promega公司是分子生物學研究工具的經典品牌，已有接近30年的歷史，是生命科學這個朝陽產業中的“老字號”。該公司所特有的螢光素酶生物發光技術，靈敏度高，信號/背景比率低，在基礎研究和藥物篩選領域內得到廣泛的應用和認可。應用范圍涉及報告基因檢測；細胞學活力、細胞毒作用
1 基因芯片技術分離目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介質上的生物信息分子的微列陣。列陣中每個分子的序列及位置都是已知的，并按預先設定好的順序點陣。基因芯片是生物芯片的一種，其上固定的是核算類物質，主要用于DNA、RNA分析。分為DNA芯片和微點陣兩種。分離目的基因是是指從基因組中發現或找出某個
酵母雙雜交系統的實驗步驟 1. 將報告基因p8op-LacZ轉化酵母EGY48菌株，用培養基SD/-Ura篩選。2. 同時構建DNA文庫，并純化足夠的質粒以轉化酵母細胞。3. 構建DNA-BD/靶蛋白質粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4. 將
來自中國協和醫科大學，中國醫學科學院，美國佛羅里達州立大學的研究人員研發了一種新型酵母雙雜交系統，能有效識別靶向核糖體蛋白L12-L10相互作用的抗結核藥物，這對解決結核菌耐藥性問題具有重要的意義。相關成果公布在《美國國家科學院院刊》(PNAS)雜志上。 文章的通訊作者包括來自中國醫學科學
科研人員在分析項目的過程中，碰到這樣的問題：通過各種手段（選擇清除分析、比較基因組學分析、轉錄組分析）獲得的行駛某種功能的某基因，如果進行實驗的驗正呢？一般分為：基因上調（基因轉染法）、基因下調（基因干擾法）后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關功能的變化等。 相信大家也有
科研人員在分析項目的過程中，碰到這樣的問題：通過各種手段（選擇清除分析、比較基因組學分析、轉錄組分析）獲得的行駛某種功能的某基因，如果進行實驗的驗正呢？一般分為：基因上調（基因轉染法）、基因下調（基因干擾法）后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關功能的變化等。 相信大家也有
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
一、蛋白質組概念：一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表
實驗方法原理 酵母三雜交系統（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白質與 RNA 間的相互作用。在酵母三雜交系統中，RNA 蛋白質相互作用導致報道基因的轉錄，可以通過細胞生長、克隆顏色或特異的酶活性檢測蛋白質與 RNA 的相互作用。試劑、試劑盒 YPD 和 SD 培養基鮭
摘要: 蛋白質組研究目的在于從蛋白水平闡明基因的功能，這對于探索生命的奧秘具有重要的意義。蛋白質芯片是近年來興起的一種強有力的高通量研究方法， 能夠一次平行分析成千上萬的蛋白樣品， 具有很高的敏感度與準確性。它將成為蛋白質組學研究中的強有力的研究方法， 并最終架起基因組學與蛋白質組學的橋梁。1 研
盤繞螺旋結構的設計和優化技巧 實驗步驟 本節討論盤
雖然表觀上簡單，盤繞螺旋（coiled coil ) 模體是高度專一的，并在理解三級結構及其形成方面具有重要意義。最常觀察到的盤繞螺旋形態——平行二聚態，其一般的結構類型仍有待全面的描述。盡管如此，其結構已呈現出在某些特定位置需要某些特定類型氨基酸的嚴格規則。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德
3.2.5.1 簡并密碼子使用簡并密碼子，可在希望改變的位點上編碼若干氨基酸的混合密碼。同樣，在仔細選擇要隨機化的對應位點引入簡并密碼子，不僅可以引入期望的堿基，而且可以引人期望的氨基酸。如已經討論過的，盤繞螺旋在不同位置對氨基酸類型有偏好。例如，e 和 g 殘基常是極性且互補的（表 3. 4)
近期，來自多倫多大學Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute (LTRI)和Donnelly中心的一組研究人員，開發出一種新技術，可以將細胞內的DNA條形碼拼接在一起，以同時搜尋數百萬個蛋白質配對，用以分析蛋白質相互作用。相關研究結果發表在4月22日的《Mol
來源：生命科學 關 薇, 王 建, 賀福初*（軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所，北京 100850） 摘 要：隨著2000 年酵母大規模蛋白質相互作用網絡圖譜的成功描繪，蛋白質相互作用特別是大規模蛋白質相互作用研究成為生命科學領域的又一個研究熱點。酵母、果
這一經典的蛋白相互作用研究方法接近于體內環境，那些瞬時、不穩定的兩兩相互作用也可以被檢測到，并且與內源蛋白的表達無關[6]。鑒于這些優點并結合簡便高效的Gateway表達載體構建方法[7]，在大規模的蛋白質－蛋白質相互作用研究中酵母雙雜交系統得到了最為廣泛的應用。Rain 等[8]用該法繪
科研人員在分析項目的過程中，碰到這樣的問題：通過各種手段（選擇清除分析、比較基因組學分析、轉錄組分析）獲得的行駛某種功能的某基因，如果進行實驗的驗正呢？一般分為：基因上調（基因轉染法）、基因下調（基因干擾法）后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關功能的變化等。1、 RNA 干擾
1 甲醇酵母表達系統的特點 1.1 宿主 七十年代巴斯德畢赤酵母曾被用于生產單細胞蛋白（SCP），有很好的發酵基礎，菌體密度可達100g/L干重。其生長培養液的組分包括無機鹽、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉價而無毒。它能在以甲醇為唯一碳源的培養基中快速生長，其中醇氧化酶AOX——甲醇代謝途徑
1. 真核生物表達的優越性和必要性① 真核生物具有轉錄后加工系統，可識別并刪除基因中的內含子，剪切加工為成熟mRNA.②具備完善的翻譯后加工系統，可進行糖基化、乙酰化等修飾，使蛋白形成正確的天然構型，因而真核生物表達系統產生的蛋白更接近天然狀態，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核細胞可將基因表
（3）原核生物的基因組基本上是單倍體，而真核基因組是二倍體。（4）如前所述，細菌多數基因按功能相關成串排列，組成操縱元的基因表達調控的單元，共同開啟或關閉，轉錄出多順反子(polycistron)的mRNA；真核生物則是一個結構基因轉錄生成一條mRNA，即mRNA是單順反子(monocistron)