Insituhybridization
Note: Although it is possible to perform in situ hybridization on bleached embryos, it appears to reduced the strength of the signal. For best results, use albino females.in situ hybridization - Harland , R.M. 1991. Meth. Cell Biol. 36:685. The first time you use a particular probe it is worthwhile to preabsorb it. This takes about 24 h and dramatically increases the quality of the final product.&......閱讀全文
In－situ－hybridization
Note:?Although it is possible to perform in situ hybridization on bleached embryos, it appears to reduced the strength of the signal. For best results
Making－RNA－probes－for－in－situ－hybridization
Make DNA templates via PCR Day 1 It's preferable to start with constructs that contain RNA polymerase start sites (T3, T7, or SP6) which allow use
In－Situ－Hybridization－to－Somatic－Chromosomes－in－Drosophila
In Situ Hybridization to Somatic Chromosomes in Drosophila Abby F. Dernburg INTRODUCTION In situ hybridization was originally developed as a tech
Basic－Fluorescent－in－situ－Hybridization－(FISH)
實驗概要 Fluorescence ?in situ hybridization method is a kind of physical map drawing method, ?use fluorescent element mark probe, to detect probe and s
Fluorescence－In－Situ－Hybridization－using－TSA?
實驗概要This ?protocol describes steps for fluorescent in situ hybridization (FISH) ?to Drosophila embryos using Tyramide Signal Amplification (TSA?), and
熒光原位雜交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）
實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、病
熒光原位雜交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）（圖）
實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、病
熒光原位雜交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）原理
2）標本變性①將制備好的染色體玻片標本于 50oC培養箱中烤片2～3h。（經Giemsa染色的標本需預先在固定液中退色后再烤片）。②取出玻片標本，將其浸在70～75oC的體積分數70％甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2～3min。③立即按順序將標本經體積分數70％、體積分數90％和體積分數100％冰
雙重和多重原位雜交(hybridization－in－situ)技術
為了在同一標本上或同一細胞內同時檢測是否存在兩種或兩種以上的靶核酸序列。可應用雙重或多重原位雜交技術．即以兩種或多種標記探針與靶核酸雜交。然后利用不同的檢測手段分別顯示各種靶核酸的存在和分布。該技術與免疫組織化學技術中的雙重或多重標記相似，除了探針本身的特異性外，對結果的干擾主要來自標記物及檢測試劑
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（四）
（2）硝酸纖維素濾膜吸印。①將膠切成合適大小，切去右上角作為記號。②將膠放進盛有變性緩沖液（1.5mol/l NaCl, 0.5mol/L NaOH）的盤中輕搖動15min。③換到中和緩沖液（1mol/L Tris·HCl , pH8.0, 1.5mol/L NaCl）中輕搖動30min。④裁一張硝
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（二）
5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪開，小心取出濾膜，立即浸入盛有2×SSC和 0.5%SDS溶液的盤中，室溫下漂洗5min。再將濾膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室溫下洗滌15min（輕輕搖動）。然后將濾膜移入 0.1×SSC和0.5%SDS溶液中；68℃輕輕搖動保溫2h，更換緩沖液后繼
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（六）
夾心雜交法可用濾膜和小珠固定吸附探針，使用小珠可更好地進行標準化試驗和更容易對小量樣品進行操作。Dahlen 等利用微孔板進行夾心雜交，可同時進行大量樣品檢測，他們先吸取DNA探針加到凹板中，然后用紫外線照射使其固定到塑料板上。用微孔板進行夾心雜交還可直接用于PCR技術。應用光敏生物標記探針
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（五）
⑦60伏電泳過夜。 ⑧取出凝膠，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室溫下將膠浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增強轉印。 ⑩室溫下將膠浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使膠中和。
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（三）
（1）DAN斑點雜交①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上。每個樣品一般點50μl（2～10μg DNA）。④將膜烘干，密封保存備用。（2）RNA斑點雜交：與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA（
原位雜交(In－Situ－Hybridization,ISH)與熒光原位雜交（一）
是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分
COLONY－HYBRIDIZATION
COLONY HYBRIDIZATION 1) CUT 4 PIECES OF 3MM WHATMAN PAPER AND PLACE EACH ONE IN A SEPARATE CONTAINER(A CAFETERIA TRAY WILL PROBABLY WORK PERFECTLY).
Colony－Hybridization
ProcedurePrepare serial 10-fold dilutions of transformed bacteria in LB and spread 100 μL onto LB/Amp plates, as described in the Electroporation prot
細胞遺傳學——原位雜交(ISH)
In Situ Hybridization· ????????In Situ Hybridization?(jsmith1@po-box.mcgill.ca)In situ?hybridization, as the name suggests, is a method of localizing,
Microarray－Hybridization－Protocol
Introduction:One microarray set consists of 7 nylon membranes with 2.5 x 7.5 cm dimension. 2304 genes were spotted onto nylon membranes (Schleicher an
Principles－of－nucleic－acid－hybridization
Principles of nucleic acid hybridization5.2.1.?Nucleic acid hybridization is a method for identifying closely related nucleic acid molecules within tw
ORNL－MICROARRAY－HYBRIDIZATION－PROTOCOLS
Direct labeling of total RNA with Cy3 and Cy5:A. MATERIALSRNeasy? Mini Kit (Qiagen; Cat # 74106)?SuperScript II RT (200U/μL) (Life Technologies; Cat #
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
原位PCR
About in situ PCR?(Applied Biosystems) Basic information about in situ PCR and its applications. The?In Situ?PCR: Amplification and Detection in
Detection－of－apoptotic－process－in－situ－using－immunocytochemical
1. INTRODUCTION??Apoptosis was observed from invertebrates to lower and higher verterbrates, and intervenes both in physiological and in pathological
Whole－mount－TUNEL－analysis－of－Xenopus－embryos
Fixation and pretreatmentDejelly albino embryos carefully in 2% Cystein (pH 7.8).Remove the vitellin membrane with two pairs of tweezers???????? (or c
Silver－Acetate－Autometallography－(AMG)
In the early eighties, a series of papers were published by Gorm DANSCHER, Aarhus, Denmark, to introduce a reliable and easy-to-handle technique for
什么是熒光原位雜交有什么用？
原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織或細胞內特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標記物可分為同位素
In－Situ－Cell－Death－(Apoptosis)－Detection－by－TUNEL－labeling
Protocol for Frozen Sections:Warm 150ml 4% Paraformaldehyde/1x PBS to RT. Fix slides in it, 20 min., RT.1x PBS rinse, 2 times.1x PBS, 30 min., RT. Beg
cDNA
·?????????cDNA Synthesis?(Crawford Lab)mRNA can be converted into DNA (copy DNA, cDNA) by annealing oligo-dT to the 3' poly-A tail that occurs on