小量細菌克隆的雜交法篩選實驗
實驗方法原理 主瓊脂板上和覆蓋于另一塊瓊脂板表面的硝酸纖維濾膜或尼龍膜上的細菌克隆可以被定位， 經過一段時間，已經在濾膜上生長的克隆可以被原位裂解以備雜交之用。同時，主瓊脂板可置于 4℃ 保存，直到篩選的結果出來為止。 實驗材料 E.coli 試劑、試劑盒 LB 或 SOB 瓊脂板 儀器、耗材 硝酸纖維素膜 注射器 針頭 防水黑色墨汁 木制牙簽或接種環 ......閱讀全文
關于動物細胞工程的過程介紹
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在
關于動物細胞工程的過程介紹
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。 2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定3
當多克隆位點有外源DNA片段插入時，破壞此酶的N端閱讀框架，產生無α互補功能的N端片段，因此在帶有外源DNA片段的細菌在含有IPTG/X-gal的培養基上呈白色，見圖7-11 。如果外源DNA插入片段相當短，不破壞β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的閱讀框，有時產生的重組體菌落不呈白色而是呈淺藍色。4
常用的植物目的基因克隆技術
1、通過已知基因產物的分析和鑒定這類技術主要通過生物化學和病理學研究分離鑒定有關基因的蛋白產物，并對蛋白質氨基酸順序進行分析，推斷出編碼該蛋白質的基因序列，然后通過抗體、寡聚核苷酸探針或PCR制備的探針對文庫進行篩選來分離目的基因。如植物抗病蟲基因工程中常用的蘇云金桿菌殺蟲晶體蛋白基因（Bt基因）、
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
單克隆抗體技術的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
概述單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
關于單克隆抗體的制備過程介紹
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
粒子篩選實驗室法和在線法
1、實驗室法粒子色選實驗室法有人工挑選法和粒子掃描設備法，以少量粒子試樣的實驗室分析數據預估實際生產情況。1.1、人工挑選法試驗方法：取少量粒子試樣，人工肉眼識別挑出帶缺陷粒子。但是，人眼觀察必然存在誤差。人眼誤判可能性高，不同人之間誤差大，重復性差，人眼不能看到50微米以下的雜質，人眼幾乎不能解決
粒子篩選實驗室法和在線法
1、實驗室法粒子色選實驗室法有人工挑選法和粒子掃描設備法，以少量粒子試樣的實驗室分析數據預估實際生產情況。1.1、人工挑選法試驗方法：取少量粒子試樣，人工肉眼識別挑出帶缺陷粒子。但是，人眼觀察必然存在誤差。人眼誤判可能性高，不同人之間誤差大，重復性差，人眼不能看到50微米以下的雜質，人眼幾乎不能解決
單克隆酶免疫色度分析篩選方法需要哪些儀器？
①微量條板架? 能放置1～8個微量條板的聚苯乙烯框架。②條板密封紙? 覆蓋微量板的粘合紙。③內嵌式包裝物? （用于固定放置試劑）。④培養箱? 能于35.0℃±0.1℃～37.0℃±0.1℃恒溫。⑤水浴箱a.能于42.0℃±0.5℃和35.0℃±1.0℃恒溫。b.能于100.0℃±0.1℃恒溫。（注意
沙門氏菌多克隆酶免疫分析篩選方法
本方法由酶免疫分析方法（EIA）測得的陽性樣品的增菌肉湯和 M 肉湯必須依照常規標準方法中所指示的，在選擇性培養基上做劃線接種，并必須將典型或可疑菌落按標準方法進行生化和血清學鑒定。 對于陽性結果的確定 ①可借助比色計卡進行視覺檢查，當判斷陰性和陽性對照符合卡上所描述的標準時，陽性結
關于單克隆抗體技術的細胞篩選的介紹
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結
單克隆抗體制備的流程
原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力
ClonePix結合CloneSelect－Imager技術加強開發病毒特異...（二）
????????????????????????? ?快速分離分泌抗體的高產克隆?ClonePix系統在流程效率和成本節約方面顯示了顯著改善，增加了發現稀有分泌子的概率。因此，ClonePix2技術單克隆抗體產生的時間減少到有限稀釋法的一半。?在這個過程中，首先擴增親本雜交瘤克隆的數量，然后Clon
關于溶藻細菌的篩選與分離介紹
溶藻細菌篩選主要有兩種方法：一是利用液體感染的方法進行分離；另一種是利用固體感染的方法進行分離。國內外溶藻細菌一般分離自因富營養化而發生水華或赤潮的湖泊及海洋，大多為革蘭氏陰性菌。由于溶藻細菌在自然水體中存在的比率比較低，故采用傳統的方法需要濃縮大量水樣，耗時長且很難獲得理想溶藻細菌，與將來工程
斑點雜交（Dot－blot）法
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot（Bio-Rad）和Hybri-Dot,它們有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下
單克隆抗體制備的基本原理與過程
單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤
β內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備（下）
1.7 抗體純化1.7.1 多克隆抗體的純化采用辛酸-飽和硫酸銨法純化抗β-內酰胺酶的兔血清，2次滴加飽和硫酸銨的最終體積分數分別為50%和40%。將沉淀用少量PBS溶解后轉入透析袋中，用PBS溶液透析48h，利用紫外分析法檢測透析液直至透析完全。1.7.2 單克隆抗體的純化采用PEG6000沉淀法
雜交瘤的克隆化及凍存與復蘇
?雜交瘤克隆化一般是指將抗體陽性孔進行克隆化。因為經過HAT篩選后的雜交瘤克隆不能保證一個孔內只有一個克隆。在實際工作中，可能會有數個甚至更多的克隆，可能包括抗體分泌細胞、抗體非分泌細胞、所需要的抗體（特異性抗體）分泌細胞和其它無關抗體的分泌細胞。要想將這些細胞彼此分開就需要克隆化。克隆化的原則是，
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
雜交瘤陽性克隆增強佐劑的使用方法
雜交瘤陽性克隆增強佐劑Positive Clone Stimulate Adjuvant細胞電融合法以其無化學毒性、操作標準化、克隆得率高等獨特優勢逐步取代聚乙二醇法（PEG），成為主流的雜交瘤細胞產生方法。在同等情況下，電融合法產生的融合克隆數目是PEG的5-10倍。但美中不足的是，該法產生克隆的
我科學家成功克隆出雜交稻種子
據中國農科院最新消息，中國水稻研究所水稻生物學國家重點實驗室王克劍團隊，利用基因編輯技術建立了水稻無融合生殖體系，成功克隆出雜交稻種子，首次實現雜交稻性狀穩定遺傳到下一代。該項成果近日在線發表于《自然·生物技術》雜志。 王克劍介紹，我國雜交水稻年種植面積超過2.4億畝，占水稻總種植面積的57%
高效雜交瘤細胞融合和單克隆化
單克隆抗體自問世以來，以其特有的高度專一性迅速占領醫學的多個領域，在蛋白親和純化、醫學診斷、腫瘤導向治療以及放射性免疫成像技術方面發揮著重要的作用，因此單克隆抗體的制備技術之一——雜交瘤技術也越來越重要。雜交瘤技術是指將骨髓瘤細胞和免疫淋巴細胞融合，形成能分泌高度純一單克隆抗體的雜交瘤細胞的技術。可
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。?制備單克隆抗體包